王淑靜 婁玉鈐

【摘 要】目的：研究制馬錢子分別配伍不同劑量的白芍桂枝湯、赤芍桂枝湯、赤白芍桂枝湯后對其毒性的影響，為制馬錢子與桂枝湯的配伍提供藥理學(xué)實驗依據(jù)，更為臨床安全有效地應(yīng)用制馬錢子提供實驗依據(jù)。方法：通過急性毒性實驗，用加權(quán)概率單位法（Bliss氏法）計算出制馬錢子及其與不同比例的白芍桂枝湯、赤芍桂枝湯、赤白芍桂枝湯配伍后的半數(shù)致死量（LD50），并計算出解毒率。

結(jié)果：制馬錢子的LD50為258.00 mg·kg-1;制馬錢子配伍白芍桂枝湯的高、低2個劑量組的LD50分別為1642.59 mg·kg-1、8218.21 mg·kg-1;制馬錢子配伍赤芍桂枝湯的高、中、低3個劑量組的LD50分別為2064.06 mg·kg-1、3485.07 mg·kg-1、9335.06 mg·kg-1;制馬錢子配伍赤白芍桂枝湯的高、中、低3個劑量組的LD50分別為1792.80 mg·kg-1、2972.45 mg·kg-1、8228.82 mg·kg-1。結(jié)論：制馬錢子與不同劑量組的桂枝湯配伍，其減毒率不同，為臨床安全有效地運用制馬錢子提供了實驗依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 制馬錢子;桂枝湯加減;配伍;毒性;小鼠;實驗研究

《本草綱目》記載馬錢子“味苦，寒，無毒。主治傷寒熱病，咽喉痹痛，消痞塊。并含之咽汁，或磨水噙咽?！睂τ谄錈o毒，后世醫(yī)家產(chǎn)生了質(zhì)疑，《本草匯言》認為其“有毒”，《本草原始》載其“味苦、寒，有大毒”。2015版《中華人民共和國藥典》認為馬錢子味苦、微溫，有大毒，歸肝脾經(jīng);可通絡(luò)止痛，散結(jié)消腫;臨床用于跌打損傷，骨折腫痛，風(fēng)濕頑痹，麻木癱瘓，癰疽瘡毒，咽喉腫痛。炮制后入丸散，每服0.3～0.6 g。全國名老中醫(yī)婁多峰臨床善于運用制馬錢子治療風(fēng)濕病，并發(fā)現(xiàn)配伍桂枝湯能提高臨床療效并降低不良反應(yīng)[1-3]?；诖罅颗R床用藥經(jīng)驗，本研究選擇桂枝湯加減配伍制馬錢子，觀察配伍前后對制馬錢子毒性的影響，為臨床更加安全有效地使用制馬錢子提供實驗依據(jù)[4-5]。

1 實驗材料

1.1 實驗藥物

1.1.1 制馬錢子粉 生產(chǎn)批號20120125，按照2015版《中華人民共和國藥典》規(guī)定的砂燙法將馬錢子粉碎10 min，過200目篩，炮制成制馬錢子，用高效液相色譜儀測得士的寧含量為14.43 mg·g-1，馬錢子堿含量為4.79 mg·g-1。

1.1.2 白芍桂枝湯浸膏粉末 生產(chǎn)批號201201GZ，藥物組成：桂枝9 g、白芍9 g、甘草6 g、生姜9 g、大棗3枚（9 g）。制作方法：將藥物按比例放入煎藥機中，加10倍量水，煎煮1 h，濃縮后干燥粉碎即得，后過200目篩。1 g干浸膏粉相當(dāng)于原生藥6.0 g。

1.1.3 赤芍桂枝湯浸膏粉末 生產(chǎn)批號201202GZ，藥物組成：桂枝9 g、赤芍9 g、甘草6 g、生姜9 g、大棗3枚（9 g）。制作方法同1.1.2。

1 g干浸膏粉相當(dāng)于原生藥5.9 g。

1.1.4 赤白芍桂枝湯浸膏粉末 生產(chǎn)批號201203GZ，藥物組成：桂枝9 g、赤芍4.5 g、白芍4.5 g、甘草6 g、生姜9 g、大棗3枚（9 g）。制作方法同1.1.2。1 g干浸膏粉相當(dāng)于原生藥6.4 g。

以上藥物飲片由河南風(fēng)濕病醫(yī)院統(tǒng)一購買于河南省藥材公司，由河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院劉雅敏統(tǒng)一制備，密閉保存使用。另外考慮樣品制備損耗等因素，3個處方均按1 g干浸膏相當(dāng)于原生藥6 g計算。本實驗制馬錢子配伍桂枝湯高、中、低劑量中，馬錢子粉的含量分別為13.41%、7.19%、3.72%。

1.2 實驗動物 昆明種小鼠，SPF級，體質(zhì)量18～22 g，雌雄各半，購自河南省實驗動物中心，生產(chǎn)許可證號SCXK（豫）2010-0002。統(tǒng)一飼養(yǎng)于河南省藥檢所動物實驗中心，輻照條形飼料，單籠喂養(yǎng)，自由飲水，每籠5只。實驗室溫度（23.0±2.0）℃，濕度50%～65%。

2 數(shù)據(jù)處理

所得實驗數(shù)據(jù)運用加權(quán)概率單位法（Bliss氏法），首先通過NDST軟件計算各組半數(shù)致死量（LD50），其次分別按照減毒率公式計算出各自的減毒率，最后進行比較分析。

3 實驗方法及結(jié)果

3.1 單純制馬錢子LD50實驗 經(jīng)過前期預(yù)實驗，得出制馬錢子Dm（最小100%死亡量）為450 mg·kg-1，Dn（最大0不死量）為200 mg·kg-1，然后在Dm和Dn范圍內(nèi)選擇6個劑量組，組間劑量比為0.85。取雌雄各半、體質(zhì)量18～22 g的昆明種小鼠60只，隨機分為6組，每組10只。實驗前禁食12 h以上，自由飲水，將制馬錢子粉用蒸餾水按質(zhì)量等比級數(shù)依次配制成6個劑量的混懸液，按每10克小鼠體質(zhì)量給予0.3 mL藥液量灌胃給藥。

經(jīng)過多次預(yù)實驗及文獻報道可知馬錢子的中毒特點主要表現(xiàn)為煩躁、呼吸增強、心跳加速、四肢抽搐，直到死亡[6-8]。達到中毒劑量后小鼠一般在10 min內(nèi)死亡，死亡狀態(tài)為四肢及尾巴強直性僵直、抽搐。灌胃給藥后30 min內(nèi)存活的小鼠，基本1 h內(nèi)逐漸恢復(fù)正常。因此，實驗采用一次給藥的方式，給藥后將存活的小鼠以給藥前的飼養(yǎng)方式飼養(yǎng)，連續(xù)觀察7 d，每天詳細記錄小鼠中毒癥狀、死亡數(shù)及死亡狀態(tài)，實驗結(jié)束后，清點各組死亡數(shù)。實驗結(jié)果數(shù)據(jù)見表1，運用Bliss氏法計算后得知本實驗所用制馬錢子LD50為258 mg·kg-1，95%可信限為236.44～277.65 mg·kg-1。

預(yù)算知制馬錢子與白芍桂枝湯、赤芍桂枝湯、赤白芍桂枝湯配伍后的3個混懸液組，即13.41%馬錢子的Dm為2545 mg·kg-1，Dn為1271 mg·kg-1;7.19%馬錢子的Dm為5100 mg·kg-1，Dn為2781 mg·kg-1;3.72%馬錢子的Dm為14 258 mg·kg-1，Dn為5730 mg·kg-1。取昆明種小鼠540只，體質(zhì)量18～22 g，雌雄各半，隨機分為9組，即3種混懸液的3個劑量組（13.41%馬錢子、7.19%馬錢子、3.72%馬錢子），每組60只。在每組的Dm和Dn范圍內(nèi)按各自的組間比選取6個劑量組，每個劑量組隨機分10只小鼠。在禁食不禁水12 h后，將制馬錢子粉分別與3個桂枝湯浸膏粉用蒸餾水按等比級數(shù)依次配制成混懸液，灌胃量為每10克小鼠體質(zhì)量給藥0.3 mL。仍然采用一次給藥后連續(xù)觀察7 d的實驗方法，實驗結(jié)束后，清點各組死亡數(shù)。運用Bliss氏法計算出各組LD50及95%可信限范圍，然后計算出減毒率，減毒率（%）=（混合物L(fēng)D50-馬錢子LD50）/馬錢子LD50。（注：公式的混合物中馬錢子與純馬錢子換算為同一比例）。結(jié)果見表2、表3、表4。

4 討 論

馬錢子具有較強的抗炎鎮(zhèn)痛效果，臨床上用于治療風(fēng)濕頑痹效果顯著。然其藥性猛烈，走竄力強，大大限制了臨床使用范圍。桂枝湯是《傷寒論》群方之首，功能解肌發(fā)表，調(diào)和營衛(wèi)。在臨床上使用桂枝湯配伍馬錢子抗炎鎮(zhèn)痛效果顯著，因此桂枝湯配伍馬錢子對馬錢子應(yīng)用于臨床具有很大的指導(dǎo)意義。桂枝湯中選擇白芍或赤芍，學(xué)者各有見地[9-11]。赤芍、白芍始分于梁代，多數(shù)醫(yī)家認為，“白補而赤瀉，白收而赤散”[12]。白芍味甘，酸，微寒，歸肝、脾、心經(jīng)，功效補血，平肝陽，緩急止血，止汗。赤芍味多甘，寒，歸心、肝經(jīng)，功效清熱涼血，解毒，透疹。李曉麗等[13]研究表明，馬錢子赤芍配伍組與馬錢子單煎組比較，馬錢子堿和士的寧含量均明顯降低。胡錫琴等[14]研究表明，配伍赤芍的藥量越大，越可以減輕馬錢子的毒性，并能增強其鎮(zhèn)痛作用，為赤芍與馬錢子配伍提供很好的實驗依據(jù)。吳鵬等[15]發(fā)現(xiàn)，赤芍中赤芍總苷能顯著增加小鼠耳廓毛細血管開放量、細動脈和細靜脈血管口徑，其中7.5 mg·kg-1、25 mg·kg-1作用比較明顯。

通過本實驗可知，制馬錢子配伍3種桂枝湯后，制馬錢子所占混懸液13.41%、7.19%、3.72%的3個比例中，以3.72%時3種桂枝湯均對其有明顯的減毒作用;縱向分析，不同的桂枝湯配伍制馬錢子后，赤芍桂枝湯減毒效果最佳。桂枝湯配伍馬錢子經(jīng)實驗證明既能減輕制馬錢子毒性，又能增加其藥效作用，因此值得進一步研究。本實驗僅從減毒效果觀察桂枝湯配伍馬錢子后的減毒率，關(guān)于更深一步的作用機制，還需對桂枝湯與制馬錢子配伍的毒效動力學(xué)及分子細胞影響進行更深層次的研究。

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收稿日期：2020-08-20;修回日期：2020-09-25