黃燕燕 何嘉敏 趙 珊 林鐘培 周欽育 劉冬梅

（華南理工大學食品科學與工程學院 廣州510640）

乳酸菌（lactic acid bacteria，LAB）是一類在人和動物消化系統(tǒng)中常見且攝入一定量后對宿主健康有益的微生物[1]。其中，植物乳酸菌被大量應用于發(fā)酵產品中，所應用的菌株具有降低膽固醇[2]、降血糖[3]、抗菌消炎[4]、提高人體免疫力[5]等益生保健功能。植物乳桿菌已成為國內外研究熱點之一。近年來，植物乳桿菌的高密度培養(yǎng)研究快速發(fā)展，而其工業(yè)應用仍處于起步階段。目前，工業(yè)上常用MRS 培養(yǎng)基作為發(fā)酵培養(yǎng)基，不少學者研究了添加緩沖鹽和化學中和劑以促進乳酸菌生長的方法，培養(yǎng)的菌液濃度還不高。林巧[6]對具有高活力的植物短乳桿菌JCBY-1 培養(yǎng)基進行Box-Behnken 優(yōu)化試驗，在MRS 基礎培養(yǎng)基中添加蛋白胨1.01 mg/mL、酵母粉0.73 mg/mL、葡萄糖1.99 mg/mL、乙酸鈉0.51 mg/mL 時，獲得菌液光密度（OD600）最大值為0.273。該法既可獲得較高濃度菌體，又可降低培養(yǎng)的成本，是一種較好的方法。

一直以來乳酸菌是公認的安全菌株。然而，近幾十年來，世界各地陸續(xù)報道了多例乳酸菌與某些疾病發(fā)生相關的事件[7]，其中，乳桿菌屬、明串珠菌屬、片球菌屬、腸球菌屬以及其它乳酸菌攝入引起相關局部或者全身感染的病例時有報道[8]。FAO/WHO 聯(lián)合專家委員會于2002年提出了適用于食品用乳酸菌的安全性評價的內容和基本原則[9]。植物乳桿菌進行安全性評價包括進行體內試驗和體外試驗，其中體外試驗包括抗藥性研究、基體指標評價、有害代謝產物評價，而乳酸菌的有害代謝產物評價主要包括色氨酸分解活性、硝酸鹽還原酶活性、溶血活性、氨基酸脫羧酶活性等[7]。

筆者課題組前期從泡菜水中篩選得到具有較好的降膽固醇效果的植物乳桿菌，經鑒定為植物乳桿菌DMDL 9010[2，10-12]。本研究通過向基礎MRS培養(yǎng)基中添加碳源、氮源、生長因子進行單因素試驗、Plackett-Burman 試驗、Box-Behnken 試驗，提高植物乳桿菌DMDL 9010 的發(fā)酵活菌數(shù)，并對其進行硝酸鹽還原酶檢測活性、抗生素抗性、吲哚試驗、溶血活性檢測、代謝產物抑菌性等特性研究，為下一步進行產業(yè)化和規(guī)?；a奠定理論基礎。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

植物乳桿菌DMDL 9010、大腸桿菌、單核細胞增生李斯特菌、金黃色葡萄球菌，華南理工大學食品科學與工程學院食品質量與安全實驗室保存；基礎MRS 培養(yǎng)基，廣東環(huán)凱微生物科技有限公司，酪蛋白消化物10 g/L，牛肉膏粉10 g/L，酵母膏粉4 g/L，檸檬酸三銨2 g/L，乙酸鈉0.5 g/L，硫酸鎂（MgSO4·7H2O）0.2 g/L，硫酸錳（MnSO4·4H2O）0.05 g/L，磷酸氫二鉀2 g/L，葡萄糖20 g/L，吐溫-80 1.08 g/L；LB 液體培養(yǎng)基，硝酸鹽培養(yǎng)基，蛋白胨水培養(yǎng)基配制方法見文獻[13-15]；硫酸錳、硫酸鎂、氫氧化鈉、鹽酸、氯化鈉、硝酸鉀、碘化鉀、對氨基苯甲磺酸、吲哚試劑（分析純），廣州化學試劑廠；淀粉、無水葡萄糖、細菌學蛋白胨、大豆蛋白肽、抗壞血酸、復合維生素B 片、哥倫比亞血瓊脂平板（生化試劑），廣州卯林試劑有限公司；其它試劑均為分析純級別。

YXQ-LS-18SI 立式壓力蒸汽滅菌器，上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠；SW-GJ-1R 超凈工作臺，上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠；GXZ-300D 生化培養(yǎng)箱，寧波東南儀器有限公司；DHG-9194A 電熱恒溫干燥箱，上海精宏實驗設備有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 菌種活化 植物乳桿菌DMDL 9010 于斜面培養(yǎng)基中低溫保存，將該菌從斜面培養(yǎng)基中接種到裝有100 mL 種子培養(yǎng)基的250 mL 錐形瓶中，于37 ℃條件靜置培養(yǎng)24 h；進行二級活化，接種體積分數(shù)為2.5%；活化好后得到種子液，于37℃條件下靜置備用。

1.2.2 培養(yǎng)基優(yōu)化

1.2.2.1 單因素試驗 以基礎MRS 培養(yǎng)基為基礎，選擇碳源：葡萄糖；氮源：細菌學蛋白胨、大豆蛋白肽；生長因子：抗壞血酸、復合維生素B、硫酸錳、硫酸鎂等因素，37 ℃恒溫靜置培養(yǎng)18 h，考察植物乳桿菌DMDL 9010 活菌數(shù)濃度（CFU/mL）。

1.2.2.2 Plackett-Burman 試驗 在單因素試驗基礎上，利用Plackett-Burman 試驗設計法，對上述影響因素進行篩選。每個因素分別取低（-1）和高（+1）兩個水平，共12 個試驗組合。每個處理重復3 次，取平均值即為試驗結果。

1.2.2.3 Box-Behnken 試驗設計方案 在Plackett-Burman 試驗基礎上，利用響應面分析法對植物乳桿菌DMDL 9010 培養(yǎng)基配方進行優(yōu)化，利用Design-Expert 8.0.5b 軟件，用Box-Behnken 模型建立三因素三水平數(shù)學模型。

1.2.3 安全性評價研究

1.2.3.1 硝酸鹽還原酶檢測試驗 將活化后的菌懸液按照體積分數(shù)3%接種量接入到滅菌后的硝酸鹽培養(yǎng)基中，37 ℃培養(yǎng)48 h 后先滴加5%的KI溶液10 滴，再滴加5%的淀粉溶液10 滴，充分振蕩混勻培養(yǎng)基后，最后觀察培養(yǎng)基顏色變化。同時制作對照組[13]。

1.2.3.2 吲哚試驗 將活化后的菌懸液按體積分數(shù)3%的接種量分別接入到滅菌后的蛋白胨水培養(yǎng)基中，于37 ℃培養(yǎng)72 h 后，取出后向培養(yǎng)基中加入2 mL 乙醚，并充分振蕩，靜止片刻，向乙醚層加吲哚試劑8 滴，觀察乙醚層顏色變化，同時制作對照組[14]。

1.2.3.3 耐藥性評價試驗

1）藥敏試驗 采用K-B（藥敏紙片瓊脂擴散法）進行藥敏試驗，取無菌生理鹽水稀釋后濃度為1.0×109CFU/mL 的菌懸液0.1 mL 涂布于MRS 瓊脂培養(yǎng)基表面。所用的藥敏紙片分別為四環(huán)素、紅霉素、鏈霉素、氨芐西林。貼好藥物紙片的平板放置30 min 以上，然后倒置平板于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中，靜置培養(yǎng)24 h。用游標卡尺測量各藥敏紙片的抑菌圈大?。ㄍ瑫r設計金黃色葡萄球菌作為質控菌株進行陽性對照）。

2）質粒提取試驗 取2 mL 活化后的菌懸液，使用質粒提取試劑盒和溶菌酶，按照操作過程提取植物乳桿菌DMDL 9010 的質粒。利用瓊脂糖凝膠電泳進行鑒別[15]，利用圖像記錄分析系統(tǒng)，在254 nm 紫外燈照射下，觀察是否有電泳條帶。

1.2.3.4 抑菌試驗 采用瓊脂擴散法中的牛津杯法來測定菌株代謝產物的抑菌性，分別將大腸桿菌、單增李斯特菌和金黃色葡萄球菌用LB 液體培養(yǎng)基進行活化，取無菌生理鹽水稀釋后濃度為1.0×106CFU/mL 的菌懸液0.1 mL 涂布于LB 瓊脂培養(yǎng)基表面，將無菌牛津杯平行放置兩個于平板中，取0.2 mL 已活化好的植物乳桿菌DMDL 9010的發(fā)酵液和發(fā)酵上清液分別于牛津杯內，緩慢將平板置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24 h，觀察并測量抑菌圈直徑大小，拍照記錄。

1.2.3.5 溶血活性檢測 將活化好的植物乳桿菌DMDL 9010 以及質控菌株大腸桿菌用滅菌的接菌環(huán)劃線接種于哥倫比亞血瓊脂平板中，于37 ℃培養(yǎng)48 h，同時做空白試驗，觀察菌落周圍有無溶血圈出現(xiàn)，拍照記錄。

1.2.4 數(shù)據處理 所有試驗均重復3 次，試驗結果表示為均值±標準偏差（M±SD）。采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，數(shù)據間的分析采用單因素方差分析（one way ANOVA）和Duncan 多重比較法，顯著性水平均設定為P＜0.05。

2 結果與分析

2.1 單因素試驗結果與分析

2.1.1 碳源對植物乳桿菌DMDL 9010 活菌數(shù)的影響 分別向基礎MRS 培養(yǎng)基中添加20，40，50，60，70，80，90，100 g/L 的葡萄糖，接種3%（體積分數(shù)）2 次活化后的植物乳桿菌DMDL 9010，于37℃靜置培養(yǎng)16 h，測定植物乳桿菌DMDL 9010活菌數(shù)，見圖1。由圖1可以看出，隨著葡萄糖添加量由20 g/L 提高到40 g/L，植物乳桿菌DMDL 9010 活菌數(shù)達到最大值為 （3.08±0.144）×108CFU/mL，繼續(xù)增加葡萄糖含量至100 g/L，植物乳桿菌DMDL 9010 活菌數(shù)下降至 （2.21±0.007）×108CFU/mL，隨后變化趨于平穩(wěn)。葡萄糖含量較低時，植物乳桿菌DMDL 9010 活菌數(shù)隨著葡萄糖含量的提高而增多；當達到一定階段時，又隨著葡萄糖含量的提高而下降。葡萄糖的含量較高時可以抑制乳酸菌的生長。這種現(xiàn)象可能是由于植物乳桿菌DMDL 9010 具有反饋抑制體系，不同菌株存在不同單糖轉運與轉化系統(tǒng)，這與司天召等[16]的研究結果相類似。

圖1 葡萄糖添加量對植物乳桿菌DMDL 9010活菌數(shù)的影響Fig.1 Effect of glucose addition on viable count of Lactobacillus plantarum DMDL 9010

2.1.2 氮源對植物乳桿菌DMDL 9010 活菌數(shù)的影響 分別向基礎MRS 培養(yǎng)基中添加10，15，20，25，30，35，40 g/L 的細菌學蛋白胨或0，5，10，15，20，25，30 的大豆蛋白肽，接種3%體積分數(shù)2 次活化后的植物乳桿菌DMDL 9010，于37 ℃靜置培養(yǎng)16 h，測定植物乳桿菌DMDL 9010 活菌數(shù)，見圖2。由圖2a 看出當細菌學蛋白胨添加量為25 g/L 時，植物乳桿菌DMDL 9010 活菌數(shù)最多且為（2.885±0.23）×108CFU/mL，在細菌學蛋白胨添加量超過25 g/L 時，植物乳桿菌DMDL 9010 活菌數(shù)降低，說明過多的氮源會產生底物抑制作用，不利于其生長。由圖2b 看出大豆蛋白肽添加量為5 g/L 時，獲得植物乳桿菌DMDL 9010 活菌數(shù)最多，為 （3.225±0.16）×108CFU/mL，此時植物乳桿菌DMDL 9010 的生長狀況比無添加大豆蛋白肽的組別好。大豆多肽是大豆蛋白經過蛋白酶水解制得的短肽類混合物，植物乳桿菌DMDL 9010 可直接利用小分子的多肽或氨基酸進行生長代謝，促進菌體的生長繁殖和產酸[17]。當大豆多肽的添加量過多時，菌體利用大豆多肽作為營養(yǎng)物質已經達到極限。這與趙玉鑒等[18]的結論一致，把大豆蛋白胨作為氮源加入有利于植物乳桿菌DMDL 9010 的增殖。

2.1.3 生長因子添加量對植物乳桿菌DMDL 9010 活菌數(shù)的影響 分別向基礎MRS 培養(yǎng)基中添加0，0.01%，0.02%，0.03%，0.04%，0.05%的VC或0.05，0.1，0.15，0.20，0.25，0.30，0.35，0.40 g/L的硫酸錳，或0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 g/L 的硫酸鎂，接種3% （體積分數(shù)）2 次活化的植物乳桿菌DMDL 9010，于37 ℃靜置培養(yǎng)16 h，測定植物乳桿菌DMDL 9010 活菌數(shù)，見圖3，由圖3a 可知，當加入0.01%VC 時，植物乳桿菌DMDL 9010 活菌數(shù)達到最多，為（3.1±0.12）×108CFU/mL，此時植物乳桿菌DMDL 9010 生長狀況比空白組好，且具有顯著性差異（P＜0.05），隨培養(yǎng)基中VC 含量的增加，植物乳桿菌DMDL 9010 活菌數(shù)變化趨于穩(wěn)定。這與邱火琴等[19]的結論一致，VC 對于植物乳桿菌DMDL 9010 生長具有促進作用。由圖3b 可知，當硫酸錳添加量為0.15 g/L 時，植物乳桿菌DMDL 9010 活菌數(shù)顯著增多（P＜0.05），為（4.7±0.14）×108CFU/mL，這與楊加懷[20]的結論一致。隨著添加的硫酸錳含量增加，獲得活菌數(shù)逐步降低，甚至要低于未優(yōu)化的基礎MRS 培養(yǎng)基，說明加入過多硫酸錳，對植物乳桿菌DMDL 9010 增殖有顯著的抑制作用（P＜0.05）。由圖3c 可知，隨著硫酸鎂添加量從0.2 g/L 增加至0.4 g/L 時，植物乳桿菌DMDL 9010 活菌數(shù)顯著增多（P＜0.05），從（4.8±0.19）×108CFU/mL 上升至 （6.5±0.18）×108CFU/mL，而隨著硫酸鎂含量的繼續(xù)增加，獲得植物乳桿菌DMDL 9010 活菌數(shù)逐步降低，這與楊加懷[20]認為硫酸鎂對于植物乳桿菌的生長并沒有顯著性影響的結論不一致，可能是由于菌種的差異，或是其選擇的培養(yǎng)基從其它途徑提供了Mg2+，因而不需要額外添加硫酸鎂作為生長因子。

圖2 氮源添加量對植物乳桿菌DMDL 9010 活菌數(shù)的影響Fig.2 Effect of nitrogen source on viable count of Lactobacillus plantarum DMDL 9010

圖3 生長因子添加量對植物乳桿菌DMDL 9010 活菌數(shù)的影響Fig.3 Effect of growth factor on the viable count of Lactobacillus plantarum DMDL 9010

2.2 Plackett-Burman 試驗結果分析

當基礎MRS 培養(yǎng)基中分別添加葡萄糖40 g/L，細菌學蛋白胨25 g/L，大豆蛋白肽5 g/L，抗壞血酸0.01%，硫酸錳0.1 g/L，硫酸鎂0.4 g/L 時，獲得的菌液是各自單因素優(yōu)化試驗組別中活菌數(shù)含量最高的。因此選擇這幾個濃度作為基準，進行Plackett-Burmen 試驗和Box-Behnken 優(yōu)化試驗。

利用Design Expert 8.0.5 軟件對上表中的數(shù)據進行分析，結果如表2。

由表3可知，在促進植物乳桿菌DMDL 9010生長方面，抗壞血酸、大豆蛋白肽、硫酸錳的貢獻度較高，分別為15.09%，13.64%和6.99%，其它幾個因素的貢獻值均不高于5%。結果表明，在這6種促進因子中，加入抗壞血酸、大豆蛋白肽、硫酸錳，對植物乳桿菌DMDL 9010 生長起促進作用，且抗壞血酸、大豆蛋白肽的貢獻值遠遠高于其它的因素，硫酸錳的貢獻值雖遠低于抗壞血酸和大豆蛋白肽，但仍高于其它的幾種因素。因此，選擇抗壞血酸、大豆蛋白肽、硫酸錳作為研究對象，進行Box-Behnken 優(yōu)化試驗。

表1 Plackett-Burmen 試驗結果表Table 1 Table of Plackett-Burmen experimental results

表2 Plackett-Burmen 試驗分析表Table 2 The analysis table of Plackett-Burman experiments

2.3 植物乳桿菌DMDL 9010 培養(yǎng)基條件的Box-Behnken 優(yōu)化

運用Design Expert 8.0.5 軟件對17 組試驗數(shù)據（見表3～表5）進行回歸分析，由表5可知，擬合模型的P=0.0007＜0.05，決定系數(shù)R2=0.9329，說明模型與實際情況擬合良好。

將大豆蛋白肽、抗壞血酸、硫酸錳添加量3 個參數(shù)分別固定，植物乳桿菌DMDL 9010 活菌數(shù)隨其余兩個參數(shù)變化趨勢如圖4、圖5、圖6所示。

表3 Box-Behnken 試驗因素水平表Table 3 Factors and levels in response surface analysis

表4 Box-Behnken 試驗結果表Table 4 The results of Box-Behnken design

表5 回歸方程方差分析及顯著性檢驗Table 5 Analysis of variance and significance tests for fitted regression equation

圖4 大豆蛋白肽和抗壞血酸對植物乳桿菌DMDL 9010 活菌數(shù)的影響Fig.4 Effect of soy protein peptide and ascorbic acid on the active bacteria number of Lactobacillus plantarum DMDL 9010

圖5 大豆蛋白肽和硫酸錳對植物乳桿菌DMDL 9010 活菌數(shù)的影響Fig.5 Effect of soy protein peptide and manganese sulfate on the active bacteria number of Lactobacillus plantarum DMDL 9010

圖6 抗壞血酸和硫酸錳對植物乳桿菌DMDL 9010 活菌數(shù)的影響Fig.6 Effect of ascorbic acid and manganese sulfate on the active bacteria number of Lactobacillus plantarum DMDL 9010

根據以上分析得知活菌數(shù)Y 對自變量大豆蛋白肽（A）、抗壞血酸（B）、硫酸錳（C）的多元回歸方程：Y=40.28000+0.85000A+0.82000B+2.62000C+4.95000AB+5.30000AC-0.85000BC-5.74000A2-5.14000B2-10.05000C2，得出大豆多肽添加量5 g/L，抗壞血酸添加量0.01%，硫酸錳添加量0.1565 g/L，得出理論植物乳桿菌DMDL 9010 活菌數(shù)最大值4.05×1010CFU/mL，以此條件做驗證試驗，得到植物乳桿菌DMDL 9010 活菌數(shù)為3.88×1010CFU/mL，與理論值接近。

2.4 安全性評價試驗

2.4.1 硝酸鹽還原酶檢測試驗 植物乳桿菌DMDL 9010 的硝酸鹽還原酶試驗結果培養(yǎng)基渾濁且為黃色，說明該菌在增殖過程中表現(xiàn)為陰性反應，植物乳桿菌DMDL 9010 不產生硝酸鹽還原酶。有些細菌在增殖過程中會產生硝酸鹽還原酶，具有還原硝酸鹽的能力，可將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽[13]。

2.4.2 吲哚試驗 植物乳桿菌DMDL 9010 的試驗培養(yǎng)基渾濁且乙醚層為無色，說明該菌在增殖過程中的表現(xiàn)為陰性反應，植物乳桿菌DMDL 9010 不產生色氨酸酶。細菌含有色氨酸酶，該酶能夠分解蛋白胨中的色氨酸生成吲哚（靛基質）[7]。色氨酸酶一旦分解人體內的色氨酸就會造成人體中的色氨酸代謝異常，導致嚴重疾病發(fā)生。

2.4.3 耐藥性評價試驗 隨著抗生素在臨床治療的廣泛應用，乳酸菌的耐藥性也越來越嚴重，長期攝入耐藥性的乳酸菌會給臨床治療帶來很大的困難，所以乳酸菌的耐藥性問題成為了研究熱點[21]。但是對于乳酸菌耐藥性的出現(xiàn)并不全是問題，乳酸菌為了較好的適應環(huán)境變化而產生的自身耐藥性是安全合理的。K-B 紙片擴散試驗結果如表6所示，常見的4 種抗生素中對四環(huán)素、鏈霉素表現(xiàn)為安全的中敏，對紅霉素、氨基西林表現(xiàn)為安全的高敏且均不含質粒。瓊脂糖凝膠電泳試驗結果見圖7，植物乳桿菌DMDL 9010 的3 個平行樣品泳道上面均沒有條帶出現(xiàn)，說明植物乳桿菌DMDL 9010 沒有質粒存在，耐藥基因不能轉移到人基因組上進行表達食用較為安全。

2.4.4 溶血試驗 有些細菌在增殖過程中會產生一種能與血液中的紅血球發(fā)生特異性結合的物質，這種物質就是溶血素。在補體的作用下，抗原（紅血球）和抗體（溶血素）進行溶解反應，將抗體溶解，進而引發(fā)破壞紅血球，造成集體嚴重的溶血反應，導致貧血等一系列反應出現(xiàn)[7]。溶血試驗結果見圖8，植物乳桿菌DMDL 9010 在血平板上培養(yǎng)48 h 后長出乳白色菌落且沒有溶血圈，屬于沒有毒性的γ-溶血 （大腸桿菌為陽性對照β-溶血組）。

表6 耐藥性試驗檢測結果Table 6 The results of resistance test

圖7 質粒提取電泳圖Fig.7 Plasmid extraction electrophoresis

圖8 溶血活性檢測結果Fig.8 The results of hemolytic activity test

2.4.5 抑菌試驗 乳酸菌的代謝產物能抑制致病菌的生長，減少腸道內腐敗菌產生的毒素，本試驗選取了大腸桿菌（革蘭氏陰性菌，G-）、單核細胞增生李斯特菌（革蘭氏陽性菌，G+）和金黃色葡萄球菌（G+）作為指示菌，結果如圖9和表7所示。植物乳桿菌DMDL 9010 發(fā)酵上清液對3 株指示菌的抑菌圈直徑都達到了2 cm 以上，說明上清液能抑制大腸桿菌（G-）、李斯特菌（G+）和金黃色葡萄球菌（G+）的生長和繁殖，且發(fā)酵液上清液的抑菌效果優(yōu)于發(fā)酵液，這與許多研究者的研究結果一致[22]，可能由于菌株對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的良好抑菌作用與乳酸菌代謝過程中能產生乳酸、醋酸有機酸和細菌素等天然抑菌物質有關，從而對病原菌起一定的拮抗作用[23]。

表7 菌株代謝產物的抑菌圈直徑大?。╟m）Table 7 Inhibition zone diameters of strains （cm）

圖9 菌株代謝產物的抑菌性Fig.9 Determination of antimicrobial activity in solid LB medium

3 結論

1）通過單因素試驗和Plackett-Burmen 試驗發(fā)現(xiàn)大豆蛋白肽、抗壞血酸、硫酸錳對植物乳桿菌DMDL 9010 的生長影響顯著（P＜0.05），其中影響大小依次為抗壞血酸添加質量分數(shù)＞大豆蛋白肽添加量＞硫酸錳添加量。

2）優(yōu)化的發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：在基礎MRS培養(yǎng)基中添加5 g/L 大豆蛋白肽、0.01%抗壞血酸、0.1565 g/L 硫酸錳時，此時理論預測植物乳桿菌DMDL 9010 的預測菌體濃度為4.05×1010CFU/mL。對所獲得的培養(yǎng)基配方進行驗證試驗，實際菌體濃度為3.88×1010CFU/mL。

3）通過對植物乳桿菌DMDL 9010 的安全性評價可知，有害代謝產物檢測結果均為陰性；常見的4 種抗生素中對四環(huán)素、鏈霉素表現(xiàn)為安全的中敏，對紅霉素、氨基西林表現(xiàn)為安全的高敏且均不含質粒；可抑制大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、單核細胞增生李斯特菌的增長且不會產生溶血現(xiàn)象。通過響應面法優(yōu)化最佳培養(yǎng)條件及安全性評價研究，為下一步工業(yè)化及規(guī)模化生產奠定基礎。