蔡 健，林秀盈，鄭柳婷

(廣西北海市人民醫(yī)院婦科，廣西 北海 536000)

子宮內(nèi)膜息肉(endometrial polyps，EMP)是目前比較常見且高發(fā)的一類婦科病癥，隨著陰道B超技術(shù)的進(jìn)步與宮腔鏡技術(shù)在臨床的推廣使用，越來越多的子宮內(nèi)膜息肉被早期發(fā)現(xiàn)，人們對(duì)子宮內(nèi)膜息肉的研究也日漸深入[1]。近年來有些學(xué)者認(rèn)為子宮內(nèi)膜息肉屬于正常的良性細(xì)胞凋亡失調(diào)性疾病[2-3]，有些學(xué)者則認(rèn)為其屬于導(dǎo)致癌癥病變的潛在因素[4]。已知PTEN、p63蛋白與腫瘤發(fā)生和細(xì)胞凋亡息息相關(guān)，因此本研究希望通過檢測(cè)PTEN、p63在子宮內(nèi)膜息肉中的表達(dá)，探討PTEN、p63與子宮內(nèi)膜息肉發(fā)生的相關(guān)性。

1資料與方法

1.1臨床資料

選取2014年6月至2017年6月北海市人民醫(yī)院病理科石蠟切片共60例，其中經(jīng)病理確診為子宮內(nèi)膜息肉30例作為實(shí)驗(yàn)組，另選擇正常的增殖期子宮內(nèi)膜30例作為對(duì)照組，組織來源于我院婦科門診刮宮術(shù)、住院部宮腔鏡電切手術(shù)，要求三個(gè)月內(nèi)未使用性激素類藥，無惡性腫瘤病史。所有研究對(duì)象均知情同意自愿參與研究。

1.2檢測(cè)方法

宮腔鏡電切術(shù)后及組織離體后在肉眼觀下取子宮內(nèi)膜息肉組織、子宮內(nèi)膜組織，用10%甲醛固定，經(jīng)洗滌、脫水、透明、透蠟、包埋、連續(xù)切片(厚4μm)、粘片、烤片后，常規(guī)HE染色，經(jīng)水洗、脫水、封藏后，鏡下觀察，確診為增殖期子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜息肉后，用免疫組化二步法分別檢測(cè)PTEN、p63基因的陽性表達(dá)情況。免疫組化的操作過程按試劑的說明書進(jìn)行，陽性與陰性參照物分別確定為已知陽性切片及PBS(替代實(shí)驗(yàn)中的兩個(gè)一抗)。

1.3試劑

實(shí)驗(yàn)所用的試劑均在北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司購買，分別有兔抗人PTEN單克隆抗體、SP免疫組化試劑盒以及小鼠抗人p63單克隆抗體。

1.4結(jié)果判定

用低倍和高倍鏡(×400)觀察全片細(xì)胞著色情況，PTEN、p63均為胞核著色。按人工計(jì)數(shù)方法[1]：以光鏡下顯示的情況為判斷標(biāo)準(zhǔn)，陰性與陽性細(xì)胞識(shí)別標(biāo)準(zhǔn)分別為細(xì)胞未顯色或保持和背景色相同、細(xì)胞顆粒呈棕黃色。隨后進(jìn)行陽性細(xì)胞率的計(jì)算，以陽性細(xì)胞數(shù)與總細(xì)胞數(shù)的百分比值進(jìn)行測(cè)算，陽性細(xì)胞的鑒別標(biāo)準(zhǔn)共分為0分、1分、2分和3分四個(gè)等級(jí)，判定區(qū)間分別為未發(fā)現(xiàn)陽性細(xì)胞、陽性細(xì)胞所占比例低于25%、陽性細(xì)胞所占比例位于26%～49%之間、陽性細(xì)胞所占比例大于等于50%。對(duì)細(xì)胞染色強(qiáng)度進(jìn)行累計(jì)計(jì)算，染色強(qiáng)度劃分為0分、1分、2分和3分四個(gè)等級(jí)，判定標(biāo)準(zhǔn)分別為未著色、淺棕黃色、棕黃色、棕褐色。最后結(jié)果的判定以陽性細(xì)胞得分加上染色強(qiáng)度的得分：0～1分判定為陰性(-)，2分判定為為弱陽性(+)，3～4分判定為陽性(++)，5～6分判定為強(qiáng)陽性(+++)。統(tǒng)計(jì)PTEN蛋白陰性表達(dá)率是采用PTEN蛋白陰性表達(dá)例數(shù)與該組例數(shù)的比值。統(tǒng)計(jì)p63陽性表達(dá)率是采用p63陽性表達(dá)例數(shù)與總例數(shù)的百分比。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)利用專業(yè)統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 22.0進(jìn)行匯總、校檢和比對(duì)。計(jì)數(shù)資料用例數(shù)(n)和率(%)表示，組間差異應(yīng)用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩組的PTEN表達(dá)情況及陰性率

統(tǒng)計(jì)兩組的PTEN表達(dá)情況及陰性率，結(jié)果表明在正常子宮內(nèi)膜組中PTEN的陰性表達(dá)強(qiáng)度顯著低于在子宮內(nèi)膜息肉組的表達(dá)強(qiáng)度，組間差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.239，P<0.05)，見表1。

表1 子宮內(nèi)膜息肉的PTEN表達(dá)情況[n(%)]Table 1 Expression of PTEN in endometrial polyps [n(%)]

2.2兩組的p63表達(dá)情況及陽性率

統(tǒng)計(jì)兩組的p63表達(dá)情況及陽性率，結(jié)果表明在子宮內(nèi)膜息肉組中p63的陽性表達(dá)強(qiáng)度顯著高于在正常內(nèi)膜組的表達(dá)強(qiáng)度，組間差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.667，P<0.05)，見表2。

表2 子宮內(nèi)膜息肉的p63表達(dá)情況[n(%)]Table 2 Expression of p63 in endometrial polyps [n(%)]

3討論

3.1 PTEN的表達(dá)及意義

PTEN定位于10q23.3染色體，被認(rèn)為是同時(shí)具備脂質(zhì)磷酸酶和蛋白磷酸酶雙重磷酸酯酶活性的癌癥對(duì)抗元素，其發(fā)揮作用可以表現(xiàn)為抑制腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散、介導(dǎo)凋亡和抑制細(xì)胞增殖等[5-6]。在子宮內(nèi)膜局部，PTEN通過下調(diào)磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B通路而調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜細(xì)胞凋亡與增殖，因此，PTEN被稱為子宮內(nèi)膜的“看家基因”[7]。

本研究結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜息肉組的PTEN表達(dá)明顯低于正常內(nèi)膜組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。以往有學(xué)者同樣發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜息肉細(xì)胞中PTEN蛋白的表達(dá)率下降趨勢(shì)一定程度上可以反映子宮內(nèi)膜是否存在息肉病變，這與PTEN蛋白失調(diào)有潛在的關(guān)聯(lián)性[8-10]。正常子宮內(nèi)膜的生長可能需要PTEN蛋白的正常表達(dá)，而子宮內(nèi)膜生長失控，可能與PTEN蛋白的表達(dá)下降或缺失有關(guān)[11]，提示PTEN是調(diào)控子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞正常分化的關(guān)鍵因子之一。PTEN在正常的增殖期子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞中同時(shí)高度表達(dá)，而在正常的分泌期的子宮內(nèi)膜中，只在間質(zhì)細(xì)胞中高度表達(dá)，在腺上皮細(xì)胞中不表達(dá)，這表明，PTEN的表達(dá)可能受雌激素和孕激素的調(diào)控，但具體機(jī)制不詳。因此推測(cè)，未成熟的基底部子宮內(nèi)膜的增生過度以致子宮內(nèi)膜息肉，可能與雌激素的長期刺激使PTEN表達(dá)缺失有關(guān)[12-13]。

3.2 p63的表達(dá)及意義

人類p63基因位于染色體3q27-3q29區(qū)，結(jié)構(gòu)上形成了特定的區(qū)域[14]。p63在腫瘤發(fā)生和細(xì)胞凋亡的研究中倍受矚目，成為這一研究領(lǐng)域中的熱點(diǎn)之一[15]。p63基因的生物學(xué)功能，主要表現(xiàn)為參與腫瘤的發(fā)生、表皮的發(fā)育、組織的衰老等，其通過介導(dǎo)轉(zhuǎn)錄的調(diào)控參與細(xì)胞的生命過程[16-18]。p63表達(dá)于外陰、陰道、成熟宮頸的鱗狀上皮的基底旁細(xì)胞和基底細(xì)胞，在正常子宮內(nèi)膜中也可見散在p63陽性細(xì)胞表達(dá)[19]。p63的表達(dá)在細(xì)胞的不同分化階段有差異，p63可作為上皮性干細(xì)胞或基底儲(chǔ)備細(xì)胞的標(biāo)記物存在[20]。

本研究結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜息肉組的p63表達(dá)高于正常內(nèi)膜組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p63在子宮內(nèi)膜息肉組中的表達(dá)與正常子宮內(nèi)膜組相比，表達(dá)強(qiáng)度更明顯，與已有的研究結(jié)果一致[21]。蘇婷婷等[22]研究表明p63蛋白在子宮內(nèi)膜息肉的陽性表達(dá)比息肉周圍內(nèi)膜、正常子宮內(nèi)膜更高。因此推測(cè)子宮內(nèi)膜干細(xì)胞p63的異常表達(dá)可能與內(nèi)膜息肉的形成有關(guān)。子宮內(nèi)膜息肉可能是起源于內(nèi)膜基底層的干細(xì)胞或儲(chǔ)備細(xì)胞，作為干細(xì)胞或基底儲(chǔ)備細(xì)胞的標(biāo)記物的p63，其表達(dá)水平在基底細(xì)胞中升高，可引起細(xì)胞的異常增生、凋亡調(diào)控失常。

3.3不足及結(jié)論

綜上所述，PTEN表達(dá)的缺失、p63表達(dá)的增強(qiáng)，使子宮內(nèi)膜細(xì)胞凋亡減少、增殖過度，與子宮內(nèi)膜息肉的發(fā)生有一定的關(guān)系。本研究結(jié)果顯示了PTEN、p63的異常表達(dá)與子宮內(nèi)膜息肉的關(guān)系，但對(duì)于息肉是否為復(fù)發(fā)性、息肉局部雌激素受體的表達(dá)及其與這些腫瘤因子之間的關(guān)系等未作研究，僅從細(xì)胞增殖、凋亡失衡方面分析，為子宮內(nèi)膜息肉發(fā)病機(jī)制的分子水平研究提供依據(jù)，也為預(yù)防子宮內(nèi)膜息肉復(fù)發(fā)、惡性病變的早期診斷及治療提供方向和理論依據(jù)。