吳依然，張 敏，解曉露，張文平

(1.山西醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，山西 太原 030009；2.首都兒科研究所兒童發(fā)育營養(yǎng)組學(xué)北京市重點實驗室，北京 100020)

維生素B1、B2、B6(VitB1、VitB2、VitB6)是生物學(xué)作用廣泛并與兒童生長發(fā)育密切相關(guān)的水溶性維生素。VitB1(硫銨素)是體內(nèi)能量代謝與三大產(chǎn)能營養(yǎng)素代謝的輔酶[1]。VitB2(核黃素)是多種氧化還原酶的輔酶，參與呼吸鏈能量產(chǎn)生，也是葉酸、VitB12和同型半胱氨酸代謝的輔酶[2-3]。VitB6參與氨基酸、糖原和脂肪酸代謝、神經(jīng)遞質(zhì)合成，同時也是一碳代謝的輔酶[4-5]。

VitB1、VitB2、VitB6因其水溶特性在體內(nèi)儲存量很低，良好的營養(yǎng)狀況依賴合理的膳食供應(yīng)，容易出現(xiàn)亞臨床缺乏[6-7]。早期發(fā)現(xiàn)與評估兒童VitB1、VitB2、VitB6營養(yǎng)狀況對及時糾正和預(yù)防亞臨床缺乏有重要意義。本研究通過檢測北京和西寧地區(qū)兩所醫(yī)院140例0～7歲兒童全血中VitB1、VitB2、VitB6水平，分析和比較兩所醫(yī)院140例兒童VitB1、VitB2、VitB6的營養(yǎng)狀況，以期為兩地兒童的保健工作提供現(xiàn)實依據(jù)。

1研究對象與方法

1.1研究對象

選取2016年8月在首都兒科研究所、青海省婦女兒童醫(yī)院門診就診的0～7歲140例兒童為研究對象，其中北京地區(qū)72例，西寧地區(qū)68例，排除合并血液系統(tǒng)疾病及臨床診斷為營養(yǎng)元素缺乏的兒童，全部受檢兒童無身體發(fā)育異常及畸形。受檢兒童根據(jù)年齡大小分為：嬰兒組(0～<1歲)42例，男28例，女14例；幼兒組(1～3歲)60例，男34例，女26例；學(xué)齡前組(>3～7歲)38例，男20例，女18例。北京地區(qū)醫(yī)院兒童男42例(58.33%)、女30例(41.67%)，0～<1歲14例(19.44%)、1～3歲38例(52.78%)、>3～7歲20例(27.78%)；西寧地區(qū)醫(yī)院兒童男40例(58.82%)、女28例(41.18%)，0～<1歲28例(41.18%)、1～3歲22例(32.35%)、>3～7歲18例(26.47%)，兩地區(qū)的性別及年齡比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)。受檢兒童家屬均知曉本研究并簽訂知情同意書，本研究獲首都兒科研究所倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2方法

1.2.1血標(biāo)本采集

應(yīng)用毛細(xì)采血管采集指尖末梢全血40μL滴于濾紙片上，室溫通風(fēng)處陰干后制成干血斑(dried blood spots，DBS)，鋁箔真空袋保存后常溫運輸至實驗室。

1.2.2全血VitB1、VitB2、VitB6的檢測及質(zhì)量控制

應(yīng)用本課題組前期發(fā)表的LC-MS/MS方法對北京與青海省西寧地區(qū)140例7歲以下兒童全血干血斑中三種B族維生素(VitB1、VitB2、VitB6)水平進(jìn)行定量分析[8]。應(yīng)用SHIMADZU LC-20A液相及API5000型三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀，電噴霧離子源正離子模式(ESI+)方法。應(yīng)用ACE5C85μm，100×4.6mm色譜柱完成三種目標(biāo)維生素分離，流動相A為0.3%甲酸甲醇，流動相B為0.3%甲酸水溶液，流速為0.8mL/min，進(jìn)樣量為40μL。洗脫條件為：0.00～0.50min，5%B；0.51～3.00min，75%B；3.01～4.00min，75%B；4.01～4.60min，100%B；4.61～6.50min，100%B；6.51～6.60min，5%B；6.61～8.00min，5%B。三種維生素及其同位素內(nèi)標(biāo)定量分析離子對分別為：VitB1，m/z265.2→122.1，VitB1-[13C4]，m/z269.3→122.1；VitB2，m/z 377.2→243.1，VitB2-[13C4，15N2]，m/z 283.2→249.0；PLP，m/z 248.1→150.1，PLP-d3：m/z 171.1→153.1。方法學(xué)確證依照美國食品及藥品管理局(Food and Drug Administration，F(xiàn)DA)[9]與歐盟藥品監(jiān)管體系(European Medicines Agency，EMA)標(biāo)準(zhǔn)[10]，三種B族維生素準(zhǔn)確度范圍為92.6%～103.12%，批內(nèi)與批間精密度范圍為1.47%～8.56%，前處理回收率范圍為81.49%～112.23%。

1.3觀察指標(biāo)

①觀察全部受檢兒童全血中VitB1、VitB2、VitB6整體水平；②觀察不同年齡段、不同性別的兒童全血中三種B族維生素的含量；③比較北京和西寧兩地兒童全血中三種B族維生素的差異。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，VitB2數(shù)據(jù)經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后，符合對數(shù)正態(tài)分布，因此VitB2數(shù)據(jù)用幾何均數(shù)G表示，兩組資料間的比較采用獨立樣本t檢驗，三組資料間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)；VitB1、VitB6數(shù)據(jù)經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后，仍然是偏態(tài)分布，因此用中位數(shù)M(P25～P75)表示，組間分布對比應(yīng)用非參數(shù)檢驗方法，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩所醫(yī)院受檢兒童的VitB2水平及營養(yǎng)狀況

在140例受檢兒童全血中，VitB2水平經(jīng)lg10對數(shù)轉(zhuǎn)換后符合對數(shù)正態(tài)分布，全部受檢兒童全血中VitB2水平為5.73ng/mL，其中北京地區(qū)醫(yī)院72例兒童VitB2水平為7.59ng/mL，西寧地區(qū)醫(yī)院68例兒童VitB2水平為4.27ng/mL；在總體受檢兒童中，幼兒組兒童全血中VitB2水平顯著高于嬰兒組與學(xué)齡前組(P<0.05)；在總體受檢兒童全血中VitB2水平在性別間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表1。北京地區(qū)醫(yī)院受檢男童、女童全血中VitB2水平均分別顯著高于西寧地區(qū)醫(yī)院受檢男童、女童(均P<0.05)，且北京地區(qū)醫(yī)院嬰兒組、學(xué)齡前組兒童全血中VitB2水平均顯著高于同年齡段西寧地區(qū)醫(yī)院兒童(均P<0.05)，見表2。

表1 兩所醫(yī)院140例受檢兒童全血中VitB2水平的比較結(jié)果[n(%)]Table 1 Comparison of vitamin B2 levels in whole blood of 140 children [n(%)]

注：與幼兒組比較，*P<0.05；嬰兒組與幼兒組相比，t=-2.32，P<0.05；學(xué)齡前組與幼兒組相比，t=2.86，P<0.05；嬰兒組與學(xué)齡前組相比，t=0.56，P>0.05；G為幾何均數(shù)。

2.2北京和西寧兩所醫(yī)院140例0～7歲兒童VitB1和VitB6水平及營養(yǎng)狀況

2.2.1 VitB1水平及營養(yǎng)狀況

在140例受檢兒童全血中，VitB1水平為2.86(2.07～4.49)ng/mL，其中北京地區(qū)醫(yī)院72例兒童VitB1水平為2.86(2.36～4.70)ng/mL，西寧地區(qū)醫(yī)院68例兒童VitB1水平為2.88(1.71～4.08)ng/mL；在總體受檢兒童中，幼兒組VitB1水平顯著高于嬰兒組與學(xué)齡前組(P<0.05)，見表3。在兩個地區(qū)的醫(yī)院中，幼兒組全血VitB1水平均顯著高于學(xué)齡前組和嬰兒組(均P<0.05)，性別間VitB1水平差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)，見表4。

表2 北京、西寧地區(qū)兩所醫(yī)院兒童全血中VitB2水平的比較結(jié)果(G)Table 2 Comparison of vitamin B2 levels in children’s whole blood in two hospitals of Beijing and Xining city (G)

注：G為幾何均數(shù)。

2.2.2 VitB6水平及營養(yǎng)狀況

在140例受檢兒童全血中，VitB6水平為24.88(18.91～36.46)ng/mL，其中北京地區(qū)醫(yī)院72例兒童VitB6水平為24.83(18.25～31.50)ng/mL，西寧地區(qū)醫(yī)院68例兒童VitB6水平為25.10(20.3～41.17)ng/mL；在總體受檢兒童中，在不同年齡段及性別間VitB6水平差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)，見表3。在兩個地區(qū)的醫(yī)院中，在不同年齡段及性別間兒童全血VitB6水平差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)，見表4。

表3 兩所醫(yī)院140例受檢兒童全血中VitB1和VitB6總體水平的分布[M(P25～P75)]Table 3 The distribution of vitamin B1 and B6 in whole blood of 140 children in two hospitals [M(P25～P75)]

注：與幼兒組比較，▲P<0.05；VitB1：嬰兒組與幼兒組相比，z=-2.63，P<0.05；學(xué)齡前組與幼兒組相比，z=2.49，P<0.05；嬰兒組與學(xué)齡前組相比，z=3.15，P>0.05。

表4兩所醫(yī)院兒童全血中VitB1和VitB6總體水平分布[M(P25～P75)]

Table 4 Comparison of vitamin B1and B6levels in children’s whole blood in two hospitals in Beijing and Xining [M (P25～P75)]

組別VitB1(ng/mL)北京西寧zPVitB6(ng/mL)北京西寧zP年齡 嬰兒2.52(1.89～6.62)2.22(1.29～7.03)-0.88>0.0520.5(14.25～30.84)30.03(19.49～49.86)1.65>0.05 幼兒3.27(2.59～5.54)3.14(2.65～4.74)-0.14>0.0525.75(18.43～32.03)29.17(20.76～37.20)1.04>0.05 學(xué)齡前2.57(2.20～2.92)#2.04(1.34～3.15)#-1.26>0.0524.84(21.48～31.49)22.90(19.29～29.53)-0.64>0.05 合計2.86(2.36～4.70)2.88(1.71～4.08)-1.25>0.0524.83(18.25～31.50)25.10(20.3～41.17)1.30>0.05 H6.177.321.442.34 P<0.05<0.05>0.05>0.05性別 男3.00(2.20～6.04)2.93(2.20～6.04)-1.11>0.0524.75(18.00～29.76)30.37(21.17～42.29)1.68>0.05 女2.76(2.40～3.37)2.75(1.84～3.52)-0.72>0.0524.84(20.91～33.92)23.95(19.35～32.36)-0.05>0.05 合計2.86(2.36～4.70)2.88(1.71～4.08)-1.25>0.0524.83(18.25～31.50)25.10(20.3～41.17) 1.30>0.05 z-1.21-0.520.47-0.69 P>0.05>0.05>0.05>0.05

注：與幼兒組比較，#P<0.05；北京地區(qū)醫(yī)院兒童VitB1：嬰兒組與幼兒組相比(z=-1.57，P>0.05)，學(xué)齡前組與幼兒組相比(z=2.31，P<0.05)，嬰兒組與學(xué)齡前組相比(z=0.42，P>0.05)；西寧地區(qū)醫(yī)院兒童VitB1：嬰兒組與幼兒組相比(z=-1.83，P>0.05)，學(xué)齡前組與幼兒組相比(z=2.64，P<0.05)，嬰兒組與學(xué)齡前組相比(z=1.06，P>0.05)。

3討論

3.1兒童三種B族維生素營養(yǎng)狀況

VitB1、VitB2、VitB6均為水溶性維生素，在人體內(nèi)含量雖然很低，但對機體正常生理功能的維持起著至關(guān)重要的作用。兒童因生長發(fā)育迅速，對各種營養(yǎng)素需求大，較容易出現(xiàn)B族維生素的缺乏[6,11]。文獻(xiàn)報道兒童B族維生素缺乏可引起神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng)及內(nèi)分泌系統(tǒng)等多個系統(tǒng)功能異常為主要表現(xiàn)的全身性疾病，影響兒童健康[12-13]。國內(nèi)葉志成[14]研究上海地區(qū)兒童B族維生素水平顯示，兒童中存在VitB1、VitB2、VitB6缺乏，且VitB2缺乏率較高。張穎[15]調(diào)查托幼機構(gòu)兒童膳食營養(yǎng)狀況反映出兒童膳食攝入的VitB2量偏低。本次研究結(jié)果顯示0～<1歲、1～3歲及3～7歲兒童全血中VitB1水平分別為2.36(1.66～5.83)ng/mL[7.00(4.92～17.29)nmol/L]、3.15(2.62～5.41)ng/mL[9.34(7.77～16.05)nmol/L]、2.49(1.97～2.98)ng/mL[7.39(5.84～8.84)nmol/L]，均低于Wyatt等[16]報道的美國相同(0～1歲，66～81nmol/L)或相近年齡段[(1～15歲，(67±21)nmol/L]兒童全血中VitB1的水平。西寧地區(qū)醫(yī)院兒童VitB2的含量低于北京地區(qū)醫(yī)院兒童。

3.2影響B(tài)族維生素的因素

本研究結(jié)果表明，兒童全血中VitB1水平與兒童年齡有關(guān)，兒童全血中VitB2水平與地域、年齡等因素有關(guān)，性別對兒童三種B族維生素水平無明顯影響。本研究通過分析不同地域、年齡段及性別兒童全血中三種B族維生素水平結(jié)果顯示：①北京、西寧地區(qū)兩所醫(yī)院幼兒組兒童全血中VitB1水平均高于學(xué)齡前組兒童，分析可能的原因包括：一方面，嬰兒全血中硫銨隨月齡增加而降低，推測該變化與神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育速度相關(guān)，兒童神經(jīng)系統(tǒng)快速發(fā)育時期對VitB1需求量大，兒童神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育具有先快后慢的特點，因此幼兒全血中硫銨含量高于學(xué)齡前期兒童，可能與神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育速度不同相關(guān)。另一方面，幼兒期家長對兒童的營養(yǎng)狀況較為重視，而3歲入托后，家長對營養(yǎng)狀況的關(guān)注度降低，且常見偏食現(xiàn)象，從而導(dǎo)致全血中VitB1水平下降。②北京地區(qū)醫(yī)院兒童全血中VitB2水平顯著高于同年齡段西寧地區(qū)醫(yī)院兒童。根據(jù)國家統(tǒng)計局網(wǎng)站數(shù)據(jù)顯示，2016年北京地區(qū)人均GDP顯著高于西寧地區(qū)。分析北京地區(qū)醫(yī)院兒童全血中VitB2水平高于西寧地區(qū)醫(yī)院兒童的可能原因為北京地區(qū)經(jīng)濟狀況良好，兒童攝入富含VitB2的新鮮蔬果及肉蛋奶類的比例高于西寧地區(qū)兒童。③男女童全血中VitB1、VitB2、VitB6含量較為接近(P>0.05)，表明性別對兒童三種B族維生素水平無明顯影響。

3.3為兒童科學(xué)地提供補充B族維生素的干預(yù)措施

《中國0～6歲兒童營養(yǎng)發(fā)展報告(2012)》[17]中指出，將兒童營養(yǎng)改善提升為國家戰(zhàn)略，提高兒童健康水平，保護和促進(jìn)兒童全面發(fā)展。兒童時期是智力和體格發(fā)展的關(guān)鍵期，兒童時期的營養(yǎng)對其一生健康都將具有重要影響。本研究結(jié)果顯示140例兒童全血中VitB1的含量低于有關(guān)報道的美國同年齡段兒童，西寧地區(qū)醫(yī)院兒童VitB2水平低于北京地區(qū)醫(yī)院兒童。我國是發(fā)展中國家，與發(fā)達(dá)國家兒童相比，兒童營養(yǎng)狀況有待提升，因此，我國兒童尤其是經(jīng)濟落后地區(qū)的兒童應(yīng)注意增補富含B族維生素的食物。同時有關(guān)部門應(yīng)積極采取相關(guān)干預(yù)措施，大力宣傳科學(xué)育兒知識，加強營養(yǎng)，指導(dǎo)家長科學(xué)喂養(yǎng)，做到膳食合理、營養(yǎng)平衡，保證兒童身體健康成長。此外，兒童應(yīng)定期體檢并進(jìn)行維生素檢測，以便對B族維生素缺乏早期發(fā)現(xiàn)、早期預(yù)防、早期治療，保證兒童身體健康成長。