丁桂齡，鄭建明，劉艷芳

腸道不僅是機體消化吸收營養(yǎng)物質(zhì)、產(chǎn)生相關(guān)激素的重要場所，還是機體發(fā)揮免疫功能的關(guān)鍵部位。這些功能的發(fā)揮依賴于很多特定的細胞、細胞特定的活性、細胞與細胞之間的相互作用等。研究發(fā)現(xiàn)杯狀細胞、肥大細胞、漿細胞和神經(jīng)纖維等形態(tài)結(jié)構(gòu)和成分的變化，與上述功能的發(fā)揮密切相關(guān)。實際工作中單獨顯示上述組織的染色方法較多，然而用一種特殊染色方法同時顯現(xiàn)上述組織卻罕有報道。本科室經(jīng)反復(fù)摸索，探索出高錳酸鉀-草酸-甲苯胺藍-麗春紅苦味酸組合染色法可以較好地同時顯示上述組織結(jié)構(gòu)，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料選取海軍軍醫(yī)大學(xué)附屬長海醫(yī)院病理科送檢的經(jīng)外科手術(shù)切除的胰十二指腸切除標本、乙狀結(jié)腸癌標本、橫結(jié)腸癌標本、直腸癌標本各10例，所有標本均經(jīng)10%中性福爾馬林固定后取材，行常規(guī)流程制成3 μm厚石蠟切片，充分烤片。

1.2 主要試劑及配制(1)1%高錳酸鉀硫酸：高錳酸鉀1 g，蒸餾水95 mL，3%硫酸液5 mL。(2)2%草酸：草酸2 g，蒸餾水100 mL。(3)0.5%甲苯胺藍：甲苯胺藍0.5 g，蒸餾水100 mL。(4)麗春紅苦味酸染色液：0.5%麗春紅S水溶液10 mL，苦味酸飽和水溶液90 mL。

1.3 染色方法組織切片經(jīng)脫蠟至水，0.5%高錳酸鉀硫酸滴染10 min，自來水洗。2%草酸滴染1 min，自來水洗。0.5%甲苯胺藍滴染30 min，自來水洗。麗春紅苦味酸染色液滴染3 min。冷風(fēng)干燥，中性樹膠封固。

2 結(jié)果

杯狀細胞呈邊界清晰的亮白色空泡狀(圖1)；肥大細胞呈圓形或橢圓形，細胞核淺藍色(圖1、2)，胞質(zhì)顆粒紫紅色(圖3)；漿細胞整體呈深藍色，核藍染呈圓形或半月形偏向一側(cè)，胞質(zhì)淡染(圖4)；膠原纖維呈深粉紅色、不規(guī)則、彎曲狀分布(圖1～4)；神經(jīng)纖維呈淡粉紅色，細胞核藍色，規(guī)則條索狀、波浪狀排列(圖4)。

3 討論

杯狀細胞、肥大細胞、漿細胞、神經(jīng)纖維、膠原纖維等形態(tài)結(jié)構(gòu)和成分的改變，與腸道相關(guān)功能的發(fā)揮密切相關(guān)。能同時顯示上述組織結(jié)構(gòu)的染色方法報道較少，本文提出的高錳酸鉀-草酸-甲苯胺藍-麗春紅苦味酸組合染色法，能較好地同時顯示上述組織結(jié)構(gòu)。

對于組織中杯狀細胞、肥大細胞、漿細胞、神經(jīng)纖維、膠原纖維的顯示，傳統(tǒng)染色方法是在不同的切片中分別顯示或者不能完全同時顯示；本文提出的組合染色法，可以在一張切片上同時顯示以上組織結(jié)構(gòu)。基于甲苯胺藍對部分組織單一著色的原理，為達到較好的染色效果，組合染色流程中需注意以下幾項：(1)染液的配制上選擇了經(jīng)硫酸酸化的高錳酸鉀液，因為硫酸能加強肥大細胞胞質(zhì)顆粒的異染性[1]，但要注意染液配制時的合適比例。(2)高錳酸鉀的濃度從常規(guī)染色法中的0.5%提高到1%，既可以加強對組織的氧化反應(yīng)，又使要顯示的組織具有選擇性，還可以改善背景色調(diào)。(3)草酸具有較強的還原性，可以對切片進行漂白和分化并優(yōu)化背景色調(diào)；染色過程中，當(dāng)肉眼觀察到組織切片變白即可終止染色，否則組織容易脫落。(4)甲苯胺藍屬于具有異染性的堿性染料，含有2個發(fā)色團和2個助色團，助色團能促使染料電離成鹽類，幫助發(fā)色團對組織產(chǎn)生染色力[2]。組織中的酸性物質(zhì)與甲苯胺藍中陽離子結(jié)合而使細胞核呈藍色[3]，故對杯狀細胞、肥大細胞、漿細胞和神經(jīng)纖維的細胞核都有相應(yīng)的著色。杯狀細胞胞核深藍色位于細胞底部、但整體成亮白色空泡狀，可能是由于杯狀細胞分泌物所含的成分與甲苯胺藍并不反應(yīng)或反應(yīng)程度很低，以至于杯狀細胞整體淡染甚至不著色。(5)麗春紅苦味酸染色液的應(yīng)用，可以同時顯示膠原纖維和神經(jīng)纖維；由于神經(jīng)纖維有細胞核，經(jīng)甲苯胺藍作用，就很好地將兩者區(qū)分開；此步驟染色后水洗時間不能過長，否則組織將褪色或著色不均。(6)染色結(jié)束后的切片需自然晾干或冷風(fēng)干燥后封片。因為乙醇和二甲苯對甲苯胺藍分別有分化作用和改變其異染反應(yīng)的特點，如經(jīng)乙醇脫水和二甲苯透明時間過長，甲苯胺藍對組織的著色將會被乙醇洗脫和被二甲苯逆轉(zhuǎn)。基于該組合染色的原理并不因組織的特異性而產(chǎn)生差異，該方法在其它含有上述成分的組織結(jié)構(gòu)中同樣適用。

綜上所述，高錳酸鉀-草酸-甲苯胺藍-麗春紅苦味酸組合染色法，既可以同時顯示組織中含有的杯狀細胞、肥大細胞、漿細胞、神經(jīng)纖維和膠原纖維，又更具直觀性，還解決了因分別染色的時空差異而導(dǎo)致判讀困難的難題。