丁桂齡，鄭建明，劉艷芳，蔣 慧

肥大細(xì)胞含有豐富的酶系和多種生物活性物質(zhì)，這些物質(zhì)作為機(jī)體重要的細(xì)胞成分，廣泛參與機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)、過(guò)敏反應(yīng)、腫瘤發(fā)生發(fā)展等，由此可見(jiàn)肥大細(xì)胞在機(jī)體病理、生理等過(guò)程中起至關(guān)重要的作用。常規(guī)HE染色不能直觀地辨別肥大細(xì)胞，最常用的顯示肥大細(xì)胞的特殊染色方法為甲苯胺藍(lán)染色，但其相關(guān)試劑配制的方法有多種。為對(duì)比清晰地顯示人體組織中的肥大細(xì)胞，作者選用硫酸-甲苯胺藍(lán)-麗春紅苦味酸染色法進(jìn)行組合染色，效果佳，現(xiàn)介紹如下。

1 材料與方法

1.1 材料選取2019年7月海軍軍醫(yī)大學(xué)附屬長(zhǎng)海醫(yī)院病理科存檔的胰腺、十二指腸手術(shù)切除標(biāo)本8例，標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林固定，脫水，透明，浸蠟，包埋，3 μm厚切片，充分烤片。

1.2 主要試劑及配制(1)硫酸-甲苯胺藍(lán)染液：3%硫酸100 mL，0.5%甲苯胺藍(lán)100 mL。將3%硫酸和0.5%甲苯胺藍(lán)按照1 ∶20比例配制成硫酸-甲苯胺藍(lán)染液。(2)麗春紅苦味酸染色液[1]：0.5%麗春紅S水溶液10 mL，苦味酸飽和水溶液90 mL。

1.3 方法組織切片脫蠟至水，經(jīng)硫酸-甲苯胺藍(lán)染液作用40 min，自來(lái)水洗，麗春紅苦味酸染色液滴染3 min。冷風(fēng)干燥，中性樹(shù)膠封固。

2 結(jié)果

肥大細(xì)胞呈圓形或橢圓形，沿血管腔散在或聚集分布，胞核較小呈淺藍(lán)色，胞質(zhì)顆粒較多，呈深藍(lán)紫色；膠原纖維呈粉紅色，粗細(xì)不均彎曲狀，不規(guī)則分布(圖1)。

圖1 肥大細(xì)胞(紅箭頭)呈輪廓清晰的圓形或卵圓形，胞核呈淡藍(lán)色，胞質(zhì)顆粒呈藍(lán)紫色；膠原纖維(藍(lán)箭頭)呈不規(guī)則且彎曲狀分布的深粉紅色；兩者與周?chē)M織對(duì)比明顯，染色鮮明，硫酸-甲苯胺藍(lán)-苦味酸麗春紅染色

3 討論

肥大細(xì)胞異質(zhì)性是其重要生物學(xué)特征之一?，F(xiàn)已證實(shí)在嚙齒類(lèi)動(dòng)物中，肥大細(xì)胞可分為黏膜型肥大細(xì)胞和結(jié)締組織型肥大細(xì)胞。黏膜型肥大細(xì)胞主要分布于呼吸道、小腸黏膜層；結(jié)締組織型肥大細(xì)胞主要分布于皮膚結(jié)締組織、腹腔漿膜、肌肉、血管及周?chē)窠?jīng)組織[2]，兩者共同參與機(jī)體的病理、生理過(guò)程。因此，顯示組織中肥大細(xì)胞的形態(tài)、數(shù)量變化和相關(guān)組織成分具有重要意義。文獻(xiàn)報(bào)道[3]固定液的選擇會(huì)影響肥大細(xì)胞的染色效果，其中采用Carnoy液固定組織后，肥大細(xì)胞的染色效果最佳。然而，本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)組織經(jīng)常規(guī)10%中性福爾馬林固定后，肥大細(xì)胞沿血管腔散在或聚集分布，呈著色鮮艷的深藍(lán)紫色或紫紅色，與周?chē)M織對(duì)比度高，極易識(shí)別。傳統(tǒng)方法中經(jīng)甲苯胺藍(lán)染色顯示的肥大細(xì)胞，與周?chē)M織對(duì)比度欠佳、不易辨別且染色背景深。隨著技術(shù)的進(jìn)步和染色方法的改進(jìn)，改良甲苯胺藍(lán)染色法和高錳酸鉀硫酸甲苯胺藍(lán)染色法相繼出現(xiàn)，前者分化過(guò)程不易控制，后者染液配制過(guò)程相對(duì)繁瑣，兩種染色法顯示肥大細(xì)胞的效果均不理想。本實(shí)驗(yàn)在原有甲苯胺藍(lán)染色的基礎(chǔ)上，采用硫酸-甲苯胺藍(lán)-麗春紅苦味酸染色法進(jìn)行組合染色，可直觀清晰且對(duì)比鮮明地顯示肥大細(xì)胞、膠原纖維、血管和紅細(xì)胞。肥大細(xì)胞的特點(diǎn)是細(xì)胞呈圓形或橢圓形，單個(gè)或彌漫存在于結(jié)締組織內(nèi)，散在或聚集沿血管腔分布，胞核較小呈淺藍(lán)色，胞質(zhì)顆粒較多呈深藍(lán)紫色。膠原纖維呈粗細(xì)不均且波浪狀、不規(guī)則排列的粉紅色。血管呈淡藍(lán)色、稍粉染的不規(guī)則腔隙樣結(jié)構(gòu)，管腔內(nèi)含紅細(xì)胞。硫酸-甲苯胺藍(lán)-麗春紅苦味酸染色法顯示肥大細(xì)胞的原理可能為：肥大細(xì)胞粗大的嗜堿性顆粒內(nèi)含有屬于硫酸酯的肝素、組胺、五羥色胺等物質(zhì)，這些物質(zhì)具有異色性，而甲苯胺藍(lán)染色法具有異染性，故可以將肥大細(xì)胞中的顆粒染為紫紅色[4]；一定濃度的酸性染液可增強(qiáng)肥大細(xì)胞中胞質(zhì)顆粒的異染性[5]，故在染液的配制上選擇了偏酸性的3%硫酸液；采用麗春紅苦味酸染液進(jìn)行膠原纖維著色，可以更好地顯示肥大細(xì)胞與周?chē)渌M織的毗鄰關(guān)系。染色過(guò)程中需要注意染液配制的比例，染色后的切片不能長(zhǎng)時(shí)間經(jīng)乙醇脫水和經(jīng)二甲苯透明，否則已著色的組織將褪色或著色不均，建議染色完畢的組織直接經(jīng)冷風(fēng)干燥后封片、閱片和拍照。

綜上所述，采用硫酸-甲苯胺藍(lán)-麗春紅苦味酸進(jìn)行組合染色來(lái)顯示組織中的肥大細(xì)胞、血管、紅細(xì)胞和膠原纖維，該方法更具實(shí)用性和可操作性，染色鮮艷，背景理想，對(duì)比度佳，效果穩(wěn)定。