李柯汝，趙偉臣，張?zhí)鹛?，徐燕紅，司志文，李文立*

（1.青島農業(yè)大學動物科技學院，山東青島 266109；2.山東菁華農牧發(fā)展有限公司，山東諸城 262201）

水貂生產中通常采用鮮配合飼料，但鮮配合飼料的水分、蛋白質和脂肪含量高，夏季高溫條件下短時間內就容易腐敗變質。飼料腐敗不僅會產生異味，影響適口性，而且還會破壞飼料品質，降低營養(yǎng)價值，變質飼料產生的毒素還可在水貂體內蓄積，影響水貂健康和免疫系統(tǒng)，導致水貂采食量降低，生長發(fā)育受阻，繼發(fā)多種疾病，造成經濟損失[1]。因此，夏季水貂鮮配合飼料的防腐是水貂生產中急需解決的重要問題。脫氫乙酸鈉作為一種廣譜防腐劑，具有安全、高效、抗菌能力強等優(yōu)點，對易引起腐敗的酵母菌、霉菌、腐敗菌等具有良好的抑制效果，廣泛用于食品、化妝品、醫(yī)藥產品等防腐劑[2]。研究表明，脫氫乙酸鈉的抑菌作用不受酸堿度影響，在酸性或堿性條件下均有效，有效抑菌濃度為0.05%～0.10%，對畜禽配合飼料也有較好的防腐效果，已在豬、肉雞等配合飼料中廣泛應用[3-5]。本試驗在夏季水貂鮮配合飼料中添加不同水平的脫氫乙酸鈉，通過測定不同時間點鮮飼料的pH、揮發(fā)性鹽基氮和細菌菌落總數的變化，評價脫氫乙酸鈉對水貂鮮配合飼料的防腐保鮮效果。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗材料 脫氫乙酸鈉（DHA-S，C8H7NaO4）：純度99.0%，購自廣州市安心生物制品有限公司。丙酸鈣的純度≥99%，購自天津市光復精細化工研究所。

1.1.2 試驗飼糧 試驗飼糧主要以海雜魚、魚排、雞腸、雞蛋、雞肝、雞頭、雞油、食用油、膨化玉米、水等原料組成?；A飼糧組成及營養(yǎng)成分見表1。

1.1.3 儀器設備 電子天平（ESJ200-4A，沈陽龍騰電子有限公司）、振蕩器（KS-1，常州億通分析儀器制造有限公司）、恒溫培養(yǎng)箱（HWS 系列，上海丙林對自己有限公司）、高壓滅菌鍋（65L-1580L，德國systec）、電子酸度計（PHSJ-4F，上海儀電科學儀器股份有限公司）、半自動凱氏定氮儀（NKB3200，上海祎鴻分析儀器有限公司）、無菌操作臺、恒溫水浴鍋、多功能電爐、培養(yǎng)皿、滅菌玻璃珠、滅菌試管、滅菌移液管、三角瓶、試管架、酸式滴定管等。

1.2 試驗設計 試驗分為6 組，試驗組分別在鮮配合飼料中添加脫氫乙酸鈉0、250、500、750、1 000 mg/kg，丙酸鈣組在鮮配合飼料中添加丙酸鈣2 000 mg/kg 作對照。

表1 基礎飼糧組成及營養(yǎng)成分（干物質基礎）

1.3 測定指標及方法 從水貂養(yǎng)殖場采集鮮配合飼料，冷藏保存快速送至實驗室，按照試驗設計要求與脫氫乙酸鈉混合均勻，每組6 個重復，每個重復鮮配合飼料質量為1 kg。每個處理的每個重復的鮮飼料平均分裝放置在5 個培養(yǎng)皿中，放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中，分別在0、4、8、12、16 h 測定不同處理鮮配合飼料的pH、揮發(fā)性鹽基氮（TVB-N）和細菌總數等指標。

1.3.1 pH 準確稱取試樣0.1 g 于離心管中，加入10 mL蒸餾水，混勻，3 000 r/min 離心10 min，取上清液用電子酸度計測定。

1.3.2 TVB-N TVB-N 按照《食品中揮發(fā)性鹽基氮的測定》（GB 5009.228-2016）[6]中的半微量定氮法測定。

1.3.3 細菌總數 測定方法參考《飼料中細菌總數的測定》（GB/T 13093-2006）[7]。

1.4 統(tǒng)計分析 試驗數據用Excel 2003 進行處理，用SPSS 17.0 進行統(tǒng)計分析，用One-Way ANOVA 和Duncan′s 進行單因素方差分析和組間多重比較。結果以平均值± 標準差表示，P＜0.05 表示差異顯著，P＞0.05表示差異不顯著。

2 結果

2.1 不同時間點飼料中pH 的變化 由表2 可見，水貂飼料pH 隨著試驗時間的延長而逐漸降低，尤其是無脫氫乙酸鈉的0 mg/kg 脫氫乙酸鈉組組下降趨勢最為明顯，丙酸鈣組次之，然后是脫氫乙酸鈉試驗組。0、4、8、12 h 時各處理pH 差異不顯著；0 mg/kg 脫氫乙酸鈉組組和丙酸鈣組16 h 的pH 低于250、500、750、1 000 mg/kg脫氫乙酸鈉組（P＜0.05）。

2.2 不同時間點飼料中TVB-N 的變化 由表3 可以看出，隨試驗時間的延長，各組飼料TVB-N 含量均呈先降低后升高趨勢；脫氫乙酸鈉含量添加水平高的組TVB-N 含量上升趨勢緩慢。4 h 時0 mg/kg 脫氫乙酸鈉組組TVB-N 含量均高于其他處理組（P＜0.05），說明此時脫氫乙酸鈉和丙酸鈣的防腐效果均較好；此后的各時間點盡管各處理間差異顯著，但TVB-N 值上升較快，尤其是0 mg/kg 脫氫乙酸鈉組組和丙酸鈣組。因此，脫氫乙酸鈉和丙酸鈣防腐效果最好的時間是4 h 以內，但不同水平脫氫乙酸鈉之間差異不顯著。

2.3 不同時間點飼料中細菌總數的變化 由表4 可知，隨著試驗時間延長，不同水平脫氫乙酸鈉的細菌總數大多呈先增后減再增加的趨勢，12 h 時最低。250 mg/kg脫氫乙酸鈉組從0～12 h 細菌總數始終下降，但16 h 顯著上升；而丙酸鈣組0 h 的細菌總數均低于其他各時間點。試驗4、8、12 h 各處理的細菌總數差異不顯著；0、250 mg/kg 脫氫乙酸鈉組和丙酸鈣組16 h 的細菌總數高于其他各組（P＜0.05），脫氫乙酸鈉水平越高，細菌總數越少。

表2 不同時間點水貂飼料中pH 的變化

表3 不同時間點水貂飼料中TVB-N 含量的變化 mg/100g

表4 不同時間點水貂飼料中細菌總數變化 106CFU/g

3 討 論

3.1 不同時間點飼料中pH 的變化 夏季飼喂水貂的鮮配合飼料易腐敗變質，味道變酸并伴有腐臭味。引起水貂鮮飼料pH 變化的原因，主要是其中的蛋白質、脂肪和碳水化合物在保存過程中經細菌、霉菌和酵母菌等腐敗菌綜合作用的結果。蛋白質經腐敗菌分解產生胺類及氨基酸，脂肪氧化酸敗后產生小分子酸和異味，碳水化合物發(fā)酵產生有機酸和氣體，均可影響飼料pH，導致飼料變酸變臭[8]。本試驗結果表明，pH 隨著試驗時間的延長而逐漸降低，尤其是0 mg/kg 脫氫乙酸鈉組組下降趨勢最為明顯，飼料腐敗速度快，其次是丙酸鈣組。不同水平脫氫乙酸鈉組pH 也呈下降趨勢，但下降趨勢緩慢，說明脫氫乙酸鈉具有良好的防霉效果，與張偉敏等[9]研究結果一致。本試驗還發(fā)現(xiàn)同一時間段內，脫氫乙酸鈉添加水平越高，pH 越大，12、16 h 尤為明顯，0、4、8 h 時變化不明顯，可能由于在0～8 h 飼料腐敗不明顯。

3.2 不同時間點飼料中TVB-N 的變化 TVB-N 指動物性飼料及食品中蛋白質在腐敗變質過程中因為各種酶和細菌的作用分解產生的氨、胺類等堿性含氮物質。TVB-N 含量越高，說明蛋白質和氨基酸分解越多，營養(yǎng)價值更低。TVB-N 的大小常用來反映肉類、魚類的新鮮度，飼料工業(yè)中常用于評價新鮮動物性飼料的新鮮度[8]。參照食品安全國家標準《鮮、凍動物性水產品》（GB 2733-2015）[11]的要求，新鮮和冷凍魚類的TVB-N 不超過30 mg/100g。本試驗中，水貂鮮配合飼料中40%左右的為冷凍鮮魚，再加上新鮮雞產品總量超過80%，不加防腐劑時TVB-N 一般超過30 mg/100g，且隨著貯存時間的延長逐漸升高，16 h 時達到45 mg/100g，添加不同水平脫氫乙酸鈉和丙酸鈣后，TVB-N 下降明顯，尤其是貯存4 h 時顯著降低，說明添加2 種防腐劑均可防止飼料蛋白質分解，保鮮效果較好。但不同水平脫氫乙酸鈉組間差異不顯著，250 mg/kg 脫氫乙酸鈉具有較好效果且成本較低。

3.3 不同時間點飼料中細菌總數的變化 脫氫乙酸鈉的防腐保鮮機理是抑制細菌細胞內多種酶的氧化作用，對腐敗菌、霉菌和酵母菌均有一定抑制作用[12]。研究表明，脫氫乙酸鈉含量越高，其抗菌、殺菌能力就越好[13]。段會軻等[14]研究表明，脫氫乙酸鈉在低溫肉制品中有較好的防腐保鮮效果，可使肉品中細菌菌落增長緩慢，達到防腐保鮮目的。本試驗結果表明，隨著試驗時間的延長，細菌總數呈增長趨勢，脫氫乙酸鈉添加水平越高，細菌總數增長越緩慢。在試驗12 h 前的不同時間點，添加不同水平的脫氫乙酸鈉對細菌的抑制效果均較好，且優(yōu)于丙酸鈣。

4 結 論

脫氫乙酸鈉在水貂日糧中具有防腐保鮮作用。綜合pH、TVB-N 和細菌總數指標，夏季可使水貂鮮配合飼料保鮮時間延長4～ 8 h，適宜的添加水平為250 mg/kg。