王 研，鞠薇薇，夏榮鈞，丁 哲，李衛(wèi)東，林黎娟

(1. 遼東學(xué)院 醫(yī)學(xué)院，遼寧 丹東 118003; 2. 丹東市第一醫(yī)院 麻醉科，遼寧 丹東 118002)

急性軟組織損傷是指人體的皮膚、皮下組織、肌肉、肌腱、筋膜、韌帶、關(guān)節(jié)嚢和神經(jīng)、血管等遭到外來暴力傷害所引發(fā)的急性損傷，但無骨折、脫位。主要表現(xiàn)為局部疼痛腫脹、瘀斑及功能障礙等，是運動系統(tǒng)中的一種常見病[1]，中醫(yī)治療急性軟組織損傷有獨特的優(yōu)勢，如療效可靠、副作用小等。白屈菜是一種傳統(tǒng)滿藥，近年來藥理學(xué)研究表明，白屈菜堿具有抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、解痙、抗炎、降低血管通透性、減輕腫脹等多方面的藥理作用，滿族民間驗方中常使用白屈菜治療急性軟組織損傷，本實驗通過研究白屈菜對大鼠急性軟組織損傷中1L-1β含量的變化，探討其治療急性軟組織損傷的機制，為滿藥的臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物

SD大鼠52只(48只正式實驗，余備用)，雄性，體重220±10 g，遼寧長生生物技術(shù)股份有限公司提供。動物房清潔、通風(fēng)、干燥，SD大鼠用固體干燥飼料喂食，自由飲水，大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3 w后正式實驗。

1.1.2 試驗藥物與試劑

硫化鈉由成都金山化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，批號為060320；白屈菜購于百草廳大藥房，委托中醫(yī)院制劑室制備成外用藥膏；扶他林由北京諾華制藥有限公司生產(chǎn)，批號為國藥準字H11021640；IL-1β指標檢測試劑和Rat 1L-1 beta ELISA Kit均由ABclonal Biotechnology公司生產(chǎn)，武漢愛博泰克生物科技有限公司進口分裝，批號為968NM74320,規(guī)格為96孔/盒。

1.2 實驗方法

1.2.1 實驗動物分組

經(jīng)適應(yīng)性喂養(yǎng)3 w后，將48只大鼠按體重編號，編號完成后按隨機數(shù)字表法分為4個大組(n=12)，即實驗組(白屈菜組)、藥物對照組(扶他林組)、模型對照組、空白對照組。各大組再分為4 個小組(n=3)，即第1、3、7、10 d組。

1.2.2動物造模

按參考文獻[2]～[4]的方法，在造模前一天將所有大鼠左側(cè)臀部及大腿用7%硫化鈉溶液脫毛, 將模型對照組、白屈菜組、扶他林組大鼠采用打擊法進行造模。大鼠側(cè)臥于自制的軟組織打擊器上,用提前準備好的直徑20 mm、100 g砝碼,沿自制的直徑23 mm、高80 cm的PVC管中自由下落至左側(cè)下肢標記處，反復(fù)8次，造成軟組織損傷模型。

1.2.3 實驗給藥

大鼠造模成功后1 h開始敷藥，將醫(yī)用棉布裁剪成超過造模邊緣0.5 cm的圓形，將白屈菜藥膏涂抹于棉布上外敷于損傷處，并用3M透明膠貼粘貼，每次敷藥4 h，為防止大鼠撕咬敷藥處，用伊麗莎白圈套于大鼠頸部，并全程守護，每日固定時間為大鼠敷藥，共10 d。

1.2.4 臨床觀察

實驗過程中，于造模成功大鼠清醒后及造模后第1、3、7、10 d觀察大鼠軟組織損傷癥狀，并參照王佳[5]等的軟組織損傷評分標準(見表1)，由同一人進行盲評。

表1 大鼠軟組織損傷癥候指數(shù)評分表

1.2.5 指標檢測

造模次日為第1 d，于造模后第1、3、7、10 d分別于各組處死3只大鼠，在損傷中心部位切取切約0.5 cm×0.5 cm×0.25 cm肌肉組織，將肌肉組織用生理鹽水漂洗1 min，吸干后用電子天平秤取15 mg，按10 mg∶0.5mL比例加入0.9%生理鹽水，用玻璃組織勻漿器勻漿，待標本充分勻漿后，導(dǎo)入事先準備好的試管中編號，以2 500 r/min轉(zhuǎn)速離心15 min，收集離心后的上清液，后放入-80 ℃深凍冰箱中保存?zhèn)溆?。采用酶?lián)免疫法(ELISA)檢測組織中1L-1β濃度。

1.2.6 數(shù)據(jù)分析方法

2 結(jié)果

2.1 大鼠軟組織損傷癥候指數(shù)評分

造模后白屈菜組、扶他林組和模型對照組大鼠損傷證候指數(shù)評分隨時間推移而逐漸降低，造模后第0、1、10 d白屈菜組和扶他林組相較于模型對照組無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，第3、7 d評分較造模后白屈菜組、扶他林組與模型對照組在第1、3 d無統(tǒng)計學(xué)意義,白屈菜組與扶他林組較模型對照組在第7、10 d評分明顯降低(P<0.05)，見表2。

表2 各組大鼠軟組織損傷癥候指數(shù)評分

注：*P<0.05，與模型組相比較

2.2 各組大鼠肌肉組織 IL-1β含量比較

實驗結(jié)果顯示，大鼠損傷肌肉組織中IL-1β含量，造模后第1 d白屈菜組、扶他林組與模型對照組較空白對照組比較均升高，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，白屈菜組、扶他林組與模型對照組比較，無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，白屈菜組與扶他林組比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；造模后第3 d，白屈菜組、扶他林組、模型對照組較造模后第1 d均增高，與模型組比較白屈菜組、扶他林組均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，白屈菜組與扶他林組相比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；造模后第7 d，與空白對照組比較白屈菜組、扶他林組與模型對照組有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，白屈菜組與扶他林組相較于模型對照組比較均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，白屈菜組與扶他林組比較，無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；造模后第10 d天，與空白對照組比較，白屈菜組、扶他林組與模型對照組均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，與模型對照組比較，白屈菜組、扶他林組均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，結(jié)果見表3和圖1。

表3 各組肌肉組織中1L-1β濃度結(jié)果單位：ng/L，n=3)

注：與模型對照組比較，*P<0.05 ；與空白對照組比較，☆P<0.05

3 討論

IL-1是一組炎癥前期細胞因子，而IL-1β是其主要的分泌形式，對炎癥反應(yīng)的產(chǎn)生和加重方面發(fā)揮著重要作用，對炎癥的產(chǎn)生和促進發(fā)揮著重要作用，主要表現(xiàn)為：不僅可以啟動炎癥級聯(lián)反應(yīng)，還可以刺激產(chǎn)生相關(guān)的炎癥遞質(zhì)和其他細胞因子而引起組織損傷?，F(xiàn)有研究已經(jīng)表明在血液及局部組織中IL-1β的含量與炎癥的嚴重程度成正相關(guān)，所以在相關(guān)炎癥的臨床和實驗研究中IL-1β常被用來判斷疾病嚴重程度和評價藥效的可靠指標[6]。

造模后第1 d，白屈菜組、扶他林組和模型對照組大鼠肌肉組織中IL-1β含量較空白對照組均明顯升高，表明造模成功，證明實驗所采用的造模方法已經(jīng)造成大鼠急性軟組織損傷，白屈菜組、扶他林組與模型對照組比較IL-1β含量降低，說明白屈菜和扶他林可以抑制炎性因子的釋放，相較于模型對照組抑制效果還不明顯(P>0.05)。造模后第3 d，白屈菜組、扶他林組、模型對照組大鼠損傷肌肉組織中IL-1β含量達到最高值，提示損傷組織炎性因子釋放達到高峰，炎癥反應(yīng)最為明顯。白屈菜組與扶他林組相較于模型對照組IL-1β含量降低，提示白屈菜與扶他林可以有效抑制組織釋放炎性因子，有一定的治療效果。造模后第7 d，白屈菜組、扶他林組、模型對照組大鼠損傷肌肉組織中IL-1β含量較第3 d下降，提示炎癥因子釋放減少，損傷組織已進入恢復(fù)期，且白屈菜組與扶他林組比模型對照組IL-1β含量低，提示兩種藥物對抑制炎癥因子的釋放，減輕炎癥反應(yīng)有一定的效果。造模后第10 d，造模各組大鼠肌肉組織中IL-1β含量持續(xù)降低，其中白屈菜組與扶他林組比模型對照組IL-1β含量低，提示白屈菜和扶他林對抑制炎癥因子的釋放具有一定的作用，但與空白對照組比較無統(tǒng)計學(xué)意義，提示即使不予治療，大鼠在肌肉組織損傷后第10 d組織也會逐步愈合，且白屈菜組與扶他林組治療效果相近(P>0.05)。

通過對大鼠造模后局部組織肌肉顏色、腫脹程度、皮下淤血情況以及肢體活動障礙情況的觀察，統(tǒng)計大鼠軟組織損傷癥候指數(shù)評分，提示造模后從第1 d到第10 d，白屈菜組、扶他林組以及模型對照組損傷證候指數(shù)評分逐漸降低，在造模后第0、1 d，造模的3組大鼠軟組織損傷評分無差異(P>0.05)，造模后第3 d，評分達到高峰，提示炎癥反應(yīng)癥狀在造模后第3 d最為嚴重，造模后第3、7 d白屈菜組與扶他林組評分低于模型對照組，提示白屈菜與扶他林對緩解軟組織損傷后的炎癥反應(yīng)癥狀有一定療效。造模后第10 d，白屈菜組與扶他林組評分相較于模型對照組，損傷指數(shù)評分無統(tǒng)計學(xué)意義，實驗過程中發(fā)現(xiàn)，大鼠在實驗后第10 d，脫毛區(qū)鼠毛已經(jīng)開始生長，大鼠趨向痊愈，白屈菜組與扶他林組療效無顯著性差異。結(jié)合炎性因子實驗結(jié)果，提示大鼠軟組織損傷后10 d，敷藥治療與不治療無顯著性差異，可以考慮在后續(xù)實驗中適當縮短實驗的時間。

4 結(jié)論

白屈菜能夠抑制大鼠急性軟組織損傷后組織釋放IL-1β，可以有效緩解損傷局部組織炎癥反應(yīng)，對治療急性軟組織損傷有一定療效。