韓君

摘要 [目的]定性分析豬牙皂的化學(xué)成分組成。[方法]采用UHPLC-Q-Exactive-MS技術(shù)，對(duì)比相關(guān)文獻(xiàn)，通過(guò)Xcalibur軟件分析鑒定豬牙皂中化學(xué)成分。[結(jié)果]鑒定了豬牙皂中17個(gè)化合物，包括3個(gè)酚類成分、7個(gè)黃酮類成分、7個(gè)皂苷類成分。[結(jié)論]該方法專屬性好、結(jié)果可靠，為豬牙皂質(zhì)量控制及藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供參考。

關(guān)鍵詞 豬牙皂;化學(xué)成分;UHPLC-Q-Exactive-MS;皂苷類

中圖分類號(hào) R284.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A文章編號(hào) 0517-6611（2020）24-0201-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2020.24.057

開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Chemical Composition Analysis of Gleditsiae Fructus Abnormalis Based on UHPLCQExactiveMS Technology

HAN Jun

（National and Local Joint Engineering Research Center for Key Technology of Chinses Medicinal Composition Granules，Beijing Tcmages Pharmaceutical Co.， Ltd.， Beijing 101301）

Abstract [Objective] Qualitatively analyzed the chemical compositions of gleditsiae fructus abnormalis. [Method]The chemical compositions of gleditsiae fructus abnormalis were analyzed and authenticated by using the UHPLCQExactiveMS technology and comparing relevant documents through the Xcalibur software. [Result]The 17 chemicals were authenticated in gleditsiae fructus abnormalis， including 3 phenolic compounds， 7 flavonoids and 7 saponins. [Conclusion]The good exclusiveness and reliable result of this method provided reference to the quality control and efficacious material basis of gleditsiae fructus abnormalis.

Key words Gleditsiae fructus abnormalis;Chemical composition;UHPLCQExactiveMS;Saponins

豬牙皂為豆科植物皂莢（Gleditsia sinensis Lam.）的干燥不育果實(shí)[1]，被《中華人民共和國(guó)藥典》2020年版收載為常用中藥之一，但未見(jiàn)控制其藥材的指標(biāo)性成分，文獻(xiàn)中對(duì)其化學(xué)成分分析主要以總皂苷以及三萜皂苷的苷元齊墩果酸和刺囊酸為主[2-5]，全面化學(xué)成分分析鮮見(jiàn)報(bào)道。目前，對(duì)豬牙皂研究主要為三萜皂苷、黃酮和木脂素[6-8]的提取分離與結(jié)構(gòu)鑒定。該研究用UHPLC-Q-Exactive-MS技術(shù)對(duì)豬牙皂化學(xué)成分進(jìn)行鑒定，以期為質(zhì)量控制指標(biāo)成分的選擇和藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

四極桿-靜電場(chǎng)軌道肼高分辨質(zhì)譜儀串聯(lián)Ultimate 3000型超高效液相色譜系統(tǒng)（美國(guó)賽默飛世爾科技公司）;BT25S型電子天平（Sartorius公司）;KQ-300DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

甲醇（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)為20190910）;色譜級(jí)乙腈（默克股份兩合公司，批號(hào)為JB097430）;豬牙皂對(duì)照藥材（上海源葉生物有限公司，批號(hào)為Y19N10H103559）。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件。

ZORBAX Eclipse XDB-C18 色譜柱（2.1 mm×50 mm，1.8 μm）;柱溫為30 ℃;流動(dòng)相為乙腈（A）-水（B），梯度洗脫（0～15 min，10%～40%A;15～25 min，40%～80%A;25～30 min，80%A;30～40 min，80%～10%A）;流速為0.2 mL/min;進(jìn)樣量為1 μL。

1.2.2 質(zhì)譜條件。

采用電噴霧離子源（ESI），毛細(xì)管電壓3 200 V，毛細(xì)管溫度300 ℃，離子源溫度350 ℃，質(zhì)譜一級(jí)采集范圍m/z 146～2 200，二級(jí)采集范圍m/z 50～3 000，S-Lens RF Level 50。

1.2.3 供試品溶液的制備。

取豬牙皂對(duì)照藥材約22.55 mg，置50 mL三角瓶中，加25%甲醇10 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，即得。

2 結(jié)果與分析

2.1 UHPLC-Q-Exactive-MS分析

取“1.2.3”項(xiàng)下供試品溶液，按“1.2.1”和“1.2.2”色譜質(zhì)譜條件進(jìn)行分析，分別得到負(fù)離子模式下豬牙皂的總離子流見(jiàn)圖1。

2.2 結(jié)構(gòu)鑒定

理論值通過(guò)質(zhì)量計(jì)算器獲得，根據(jù)測(cè)定值與理論值二者偏差小于0.005‰，氮律等原則，結(jié)合Xcalibur軟件的相對(duì)分子質(zhì)量數(shù)，質(zhì)譜一級(jí)、二級(jí)碎片信息，相關(guān)參考文獻(xiàn)，共鑒定出17種化合物，包括3個(gè)酚類成分、7個(gè)黃酮類成分、7個(gè)皂苷類成分。被鑒定的化學(xué)成分的分子式、二級(jí)碎片離子、結(jié)構(gòu)類型等信息見(jiàn)表1。

2.3 化合物的質(zhì)譜裂解特征分析

2.3.1 黃酮類成分的鑒定。

該研究共分析鑒定了7個(gè)黃酮類化合物。以化合物5為例，ESI-模式下準(zhǔn)分子離子為m/z 609.185 1[M-H]-，經(jīng)過(guò)碰撞脫去一分子鼠李糖形成碎片離子m/z 463.966 0[M-H-C6H10O4]-，再脫去一分子葡萄糖形成碎片離子m/z 301.071 9[M-H-C6H10O5- C6H10O4]-，丟失B環(huán)和C環(huán)并發(fā)生重排后形成碎片離子m/z 151.002 7。根據(jù)文獻(xiàn)[13]報(bào)道和裂解碎片特征判斷，該化合物可能為新橙皮苷，該化合物的MS/MS圖見(jiàn)圖2，可能的裂解方式見(jiàn)圖3。

2.3.2 皂苷類成分的鑒定。

皂苷類化合物是豬牙皂中的特征性成分，該研究共分析鑒別了7個(gè)皂苷類化合物。以化合物16為例，ESI-模式下準(zhǔn)分子離子為m/z 1 635.778 7[M-H]-，脫去一分子H2O形成碎片離子m/z 1 617.770 3[M-H-H2O]-，再脫去C10H16O3形成碎片離子m/z 1 453.686 2[M-H-C10H16O3-H2O]-，再脫去一分子H2O形成碎片m/z 1 435.673 5[M-H-2H2O-C10H16O3]-，再脫去C22H35O16形成碎片離子m/z 881.490 6[M-H-C22H35O16-2H2O-C10H16O3]-，再脫去C16H27O13形成碎片離子m/z 455.353 8[M-H-C16H27O13- C22H35O16-2H2O-C10H16O3]-。

根據(jù)文獻(xiàn)[5]報(bào)道和裂解碎片特征，判斷該化合物可能為皂莢皂苷B，該化合物的MS/MS圖見(jiàn)圖4，可能的裂解方式見(jiàn)圖5。

3 結(jié)論

采用UHPLC-Q-Exactive-MS技術(shù)，利用質(zhì)譜的高分辨、高靈敏度等特點(diǎn)，對(duì)豬牙皂中化學(xué)成分進(jìn)行研究，鑒定出17個(gè)化合物，明確了豬牙皂中黃酮類以及皂苷類成分的質(zhì)譜裂解規(guī)律，為其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及質(zhì)量控制指標(biāo)成分的選擇提供了數(shù)據(jù)支撐。

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