孫妲男 鄭劍 唐強

【摘要】 目的 探究針康法通過緩解顱內炎癥反應對糖尿病腦卒中大鼠運動功能的改善作用。

方法 60只大鼠， 隨機分為空白組、假手術組、模型組、針康組、針刺組以及康復組， 各10只。采用高糖高脂飲食、鏈脲佐菌素（STZ）腹腔注射以及改良線栓法建立糖尿病腦卒中大鼠模型， 分別采用不同方式干預21 d后評價各組大鼠運動能力， 檢測各組大鼠腦組織中白細胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）水平， 并進行比較。結果 針刺組、康復組及針康組大鼠平衡木行走試驗評分均較干預前顯著改善， 差異具有統計學意義（P<0.05）;針康組大鼠干預后平衡木行走試驗評分（1.17±0.84）分

均顯著低于針刺組的（2.26±0.83）分及康復組的（2.39±0.66）分， 差異均有統計學意義（P<0.05）。干預后， 模型組、針刺組、康復組及針康組大鼠腦組織IL-6、TNF-α水平均較空白組、假手術組大鼠顯著升高， 差異均有統計學意義（P<0.05）;針刺組、康復組及針康組大鼠腦組織IL-6、TNF-α水平均較模型組顯著下降， 差異均有統計學意義（P<0.05）;針康組IL-6、TNF-α水平分別為（120.88±

55.67）pg/ml、（1.58±0.47）ng/ml， 均顯著低于針刺組的（273.64±52.64）pg/ml、（2.36±0.59）ng/ml及康復組的（251.75±70.31）pg/ml、（2.58±0.61）ng/ml， 差異有統計學意義（P<0.05）。結論 針康法能夠通過緩解糖尿病腦卒中大鼠顱內炎癥反應并改善大鼠運動功能。

【關鍵詞】 針康法;顱內炎癥;糖尿病腦卒中大鼠;運動功能

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2019.34.102

臨床上糖尿病并發(fā)腦血管疾病已經成為糖尿病患者的主要死因[1， 2]， 且糖尿病已被證實是腦梗死的重要獨立危險因素之一。糖尿病患者一旦并發(fā)腦卒中， 無論是出血性還是缺血性腦卒中， 其預后都較非糖尿病患者明顯下降。經過我國中醫(yī)學者多年研究， 中醫(yī)針灸聯合現代康復醫(yī)學已經能夠有效改善糖尿病合并腦卒中患者的預后[3]， 明顯提高生活質量。本研究通過觀察針康法對糖尿病腦卒中大鼠腦組織IL-6、TNF-α水平及運動功能的影響， 探究其通過緩解顱內炎癥反應對糖尿病腦卒中大鼠運動功能的改善作用， 現報告如下。

1 材料與方法

1. 1 實驗動物 采用黑龍江中醫(yī)大學實驗動物中心提供的SPF級健康雄性SD大鼠（180～220 g）150只， 經過7 d適應性飼養(yǎng)后分為造模， 最終分為假手術組、模型組、針刺組、康復組、針康組， 每組10只。本研究經學校倫理委員會通過。

1. 2 糖尿病腦卒中模型制備

1. 2. 1 糖尿病大鼠模型 大鼠高糖高脂飲食（20%蔗糖+

2.5%膽固醇+10%豬油+0.2%膽鹽+67.3%基礎飼料）喂養(yǎng)4周后一次性腹腔注射2%的STZ[4， 5]， 劑量為35 mg/kg。

1. 2. 2 糖尿病大鼠模型建立成功后建立糖尿病大鼠腦卒中模型 取0.26 mm粗細的魚線30 mm長作為栓線， 標記于18 mm處， 頭端燒圓。大鼠禁食6 h后用3.5%水合氯醛

（1 ml/100 g）行腹腔注射， 麻醉完全后行頸部正中切口， 分離出左側頸內動脈、頸外動脈及頸總動脈， 將頸外動脈主干及頸總動脈近心端結扎， 置線于頸總動脈遠端， 夾閉左頸總動脈分叉處， 距分叉處以上0.4 mm行“V”字形切口， 插入至18 mm， 使線栓跨過大腦中動脈開口至大腦前動脈起始部， 結扎備線， 復位組織縫合切口。假手術組除栓線固定10 min但不阻斷血流外， 其余操作同前。

1. 2. 3 模型成功標準 STZ給藥7 d后隨機血糖>13.8 mmol/L

且體重>250 g為糖尿病大鼠建模成功， 腦卒中術后6 h行Bederson神經功能評分[6]在1～3分大鼠提示造模成功。

1. 3 干預方法 針刺組：根據“大鼠學位譜圖”于成模第

2天予以頭穴叢刺。針灸針在百會穴及其兩側4 mm處向前平刺至頂前區(qū)， 深度0.5寸， 捻轉1 min后留針1 h， 捻轉速度為150次/min， 2次/d?？祻徒M：成模第2天予以跑臺訓練， 跑臺坡度為0， 1次/d， 20 min/次， 履帶速度依次遞增：前3 d

為5 m/min， 4～7 d為10 m/min， 14～21 d為15 m/min。針康組：同時予以針刺及跑臺訓練。

1. 4 觀察指標及判定標準 比較各組干預前后平衡木行走試驗評分， 評分標準：1分：能夠保持身體平衡， 四肢均觸于木條表面;2分：只有一側爪子能夠握住木條或整個軀體在平衡木上搖晃;3分：出現一或兩個肢體滑下平衡木;4分：平衡功能差， 三個及以上肢體滑下木條;5分：努力在平衡木上保持平衡但跌落平衡木;6分：保持平衡失敗， 懸吊在平衡木上然后跌落;7分：直接從木條上跌落而無努力保持平衡的意向。取腦組織采用ELISA法測定IL-6及TNF-α水平。各組大鼠行為學測試結束后， 用10%水合氯醛

（300 mg/kg）腹腔注射麻醉， 麻醉完全后立即斷頭取腦， 取出的腦組織作冠狀切面， 自切面向頭側3 mm作另一切面取材， 腦組織立即研磨碎， 加入PBS后放入離心機中以3500 r/min

離心20 min， 取上清液后-20℃保存， 根據ELISA說明書測定各組大鼠腦組織IL-6及TNF-α水平。

1. 5 統計學方法 采用SPSS20.0統計學軟件對數據進行統計分析。計量資料以均數±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2. 1 各組大鼠平衡木行走試驗評分比較 空白組、假手術組及模型組大鼠干預前后平衡木行走試驗評分組內比較， 差異無統計學意義（P>0.05）;模型組大鼠干預前、后平衡木行走試驗評分與空白組、假手術組比較， 差異均有統計學意義（P<0.05）;針刺組、康復組及針康組大鼠平衡木行走試驗評分均較干預前顯著改善， 差異具有統計學意義（P<0.05）;針康組大鼠干預后平衡木行走試驗評分均較針刺組及康復組顯著下降， 差異均有統計學意義（P<0.05）。見表1。

2. 2 各組大鼠干預后腦組織IL-6及TNF-α水平比較 模型組、針刺組、康復組及針康組大鼠腦組織IL-6、TNF-α水平均較空白組、假手術組大鼠顯著升高， 差異均有統計學意義（P<0.05）;針刺組、康復組及針康組大鼠腦組織IL-6、TNF-α水平均較模型組顯著下降， 差異均有統計學意義（P<0.05）;與針刺組、康復組相比， 針康組IL-6、TNF-α水平更低， 差異有統計學意義（P<0.05）。見表2。

3 討論

腦組織缺血損傷主要表現為大腦生理屏障破壞， 炎癥因子激活及細胞外基質損傷。炎癥反應是在相關促炎因子的作用下不斷放大， 促進血液及組織間隙中各種炎癥細胞的聚集、粘附， 不斷加重腦組織損傷。糖尿病腦卒中大鼠模型的建立對于研究糖尿病并發(fā)腦血管意外意義重大， 本研究通過高糖高脂飲食、STZ腹腔注射以及線栓法成功建立該動物模型， 線栓法制備局灶性腦缺血模型有眾多優(yōu)點， 首先經濟、實用， 其次能夠精確控制缺血及再灌注時間， 缺血效果可靠， 模型穩(wěn)定性以及重復性好等， 目前逐漸成為90年代以來國內外廣泛使用的方法[6-8]。栓塞大腦中動脈與臨床糖尿病并發(fā)腦卒中患者的病理生理過程相似， 故建立的模型與臨床工作聯系緊密， 具有重要的研究價值。

眾多研究證實， 針刺療法對于改善腦卒中引起的肢體偏癱及促進肢體神經功能恢復有顯著效果， 于致順教授創(chuàng)造的頭穴叢刺法結合了豐富臨床經驗和科學研究， 提出“頭部透穴治療腦血管疾病后癱瘓”的論點， 認為針刺頭部穴位能夠產生一種“針場”， 隨著經絡傳送至大腦皮質特定區(qū)域并刺激該部位， 改善神經細胞興奮性， 促進神經功能恢復。

本研究結果提示， 針康法可以顯著改善糖尿病腦卒中大鼠運動功能， 針康組大鼠干預后平衡木行走試驗評分顯著低于針刺組及康復組， 差異有統計學意義（P<0.05）。本研究采用的跑臺訓練是目前國際通行的卒中后恢復運動， 可以精確調控運動強度， 有利于量化康復訓練， 其能通過重新建立部分腦的“連接”進而改善腦卒中患者的行走能力， 跑臺訓練能顯著降低大鼠腦缺血后的損傷， 可能與訓練后腦損傷區(qū)血管的生成及血管生成因子的表達增加有關?，F代康復學認為， 腦卒中后早期康復應當待患者生命體征平穩(wěn)且無明顯神經功能損傷癥狀24 h后進行[9]。進入運動康復治療階段， 通過有機結合頭穴針刺與康復訓練促進神經功能恢復。顱內炎癥反應的輕重往往與運動功能恢復密切相關[10]。本研究結果顯示， 針康法可以有效減輕糖尿病腦卒中大鼠顱內炎癥因子數量， 炎癥反應是一種生理性保護機制， 過度激活的炎癥反應會導致組織損傷， 炎癥反應參與了腦卒中的生理過程[11]， 對腦組織的損傷可能比腦卒中本身更嚴重， 缺血灶的炎癥細胞會促進炎癥因子及抗炎細胞因子表達上調[12]， 損傷神經細胞。

綜上所述， 針康法能夠緩解糖尿病腦卒中大鼠顱內炎癥反應并改善大鼠運動功能。

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[收稿日期：2019-07-16]