韓煜暉 張愛英 梅寒

摘 要：目的：建立檢測蘋果中辛硫磷殘留的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）。方法：樣品經(jīng)1%醋酸-乙腈溶液提取，PSA為凈化劑，結(jié)合UPLC-MS/MS技術(shù)，采用正離子多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式進(jìn)行檢測。結(jié)果：辛硫磷檢出限為1.0μg/kg，定量限為4.0μg/kg，在2.0～100.0ng/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2>0.999，在4.0、8.0、40.0μg/kg的加標(biāo)水平下回收率在82.71%～102.10%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在0.72%～3.10%。 結(jié)論：該方法快速簡便、靈敏度高，能很好的滿足蘋果中辛硫磷殘留的檢測要求。

關(guān)鍵詞：超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜;蘋果;辛硫磷

中圖分類號 S859.84文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A文章編號 1007-7731（2019）23-0111-03

Determination of Phoxim in Apple by Ultra Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

Han Yuhui et al.

（Anhui grain and oil products quality supervision and testing station，Hefei 230000，China）

Abstract：Objective：To establish a method to detect the residue of Phoxim in apple by ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry（UPLC-MS/MS）. Methods：The sample was extracted by 1% acetic acid-acetonitrile，cleaned-up by PSA ，then detected by UPLC-MS/MS under multiple reaction monitoring mode （MRM） .Results：The limits of detection （ LOD） of Phoxim was 1.0 μg/kg ，while limits of quantification （ LOQ） was 4.0 μg/kg，the linear ranges were 2.0～100.0 ng/mL and the correlation coefficients （ R2） was above 0.999.The recoveries in samples were between 82.71%～102.10% at three spiked levels （4.0，8.0，40.0 μg/kg） ，with relative standard deviations of 0.72%～3.10%（n=6）.Conclusion：The method was convenient ，simple ，accurate and high efficiency，and can be applied to the determination of the residue of Phoxim in apple.

Key words：Ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry;Apple;Phoxim

近年來，我國消費(fèi)者對水果蔬菜的安全問題日益關(guān)注，而果蔬中的農(nóng)藥殘留是影響其食用安全性的最大因素，因而人們開始重視果蔬中農(nóng)藥殘留的檢測。辛硫磷作為高毒有機(jī)磷農(nóng)藥的替代品，是當(dāng)前農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中應(yīng)用較多的殺蟲劑之一。目前，果蔬中的辛硫磷殘留檢測方法主要有氣相色譜法[1-3]和液相色譜法[4-6]，而由于辛硫磷在高溫下易分解，限制了氣相色譜法的檢測;液相色譜法也因為其專一性差、易受雜質(zhì)干擾等缺點未能得到廣泛的應(yīng)用。液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜因其抗基質(zhì)干擾能力強(qiáng)、靈敏度高、分析速度快等優(yōu)點而被廣泛應(yīng)用到于水果中的農(nóng)殘檢測中[7-8]。與此同時，QuEChERS技術(shù)具有快速、簡便且價格低廉等特點，是當(dāng)前果蔬農(nóng)殘檢測中應(yīng)用較廣的一種樣品前處理方法[9-11]。

周霞等結(jié)合QuEChERS技術(shù)和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法研究了辛硫磷在春筍中的殘留[12]，但當(dāng)前關(guān)于蘋果中辛硫磷的殘留分析文獻(xiàn)報道仍較少。為此，本研究基于QuEChERS技術(shù)，采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS），建立了快速檢測蘋果中辛硫磷農(nóng)藥殘留的方法，并將此方法應(yīng)用于實際樣品的分析。結(jié)果顯示，該方法準(zhǔn)確、可靠，并縮短了樣品的檢測時間，可以滿足分析的要求。

1 材料與方法

1.1 儀器與設(shè)備 超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（型號Waters Xevo TQD，美國沃特世公司）;十萬分之一電子天平（型號XA105DU，瑞士Mettler Toledo公司）;高速冷凍離心機(jī)（型號Multifuge X1R，美國賽默飛世爾科技公司）;高速勻漿機(jī)（型號IKA T25，德國IKA公司）;渦旋混合儀（型號IKA MS3，德國IKA公司）。

1.2 材料與試劑 辛硫磷（Phoxim）標(biāo)準(zhǔn)品（1000mg/L，農(nóng)業(yè)部環(huán)境質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心）;乙腈（色譜純，德國默克公司）;甲酸、醋酸（色譜純，上海安譜實驗科技股份有限公司）;實驗用水為Milli-Q純水儀制備的超純水（美國密理博公司）;檢測樣品為市售蘋果。

1.3 實驗方法

1.3.1 色譜條件 色譜柱：Waters UPLC BEH C18柱（2.1×50mm，1.7μm）;流動相：0.1%甲酸水溶液（A）和乙腈溶液（B），梯度洗脫見表1。流速：0.3mL/min;柱溫：35℃;進(jìn)樣量：10μL。

1.3.2 質(zhì)譜條件 離子源：ESI源;掃描方式：正離子掃描;掃描模式：MRM（多反應(yīng)監(jiān)測）模式;噴霧電壓：3200;離子源溫度：500℃;辛硫磷質(zhì)譜信息見表2。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 準(zhǔn)確吸取一定量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用甲醇配置成濃度100mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，-20℃條件下保存。制備空白的蘋果基質(zhì)溶液，以此空白基質(zhì)配制濃度為2、4、8、20、40、100ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列。

1.3.4 樣品制備 按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)對蘋果進(jìn)行處理，用勻漿機(jī)破碎混勻，制成待測樣，-20℃冷凍保存。稱取10.0g樣品于離心管中，加入20mL 1%醋酸-乙腈溶液，加入2顆玻璃均質(zhì)子，然后加入1g NaCl，4g無水Mg SO4，0.5g檸檬酸氫二鈉和1g檸檬酸鈉，渦旋震蕩1min，8000r/min離心5min，取10mL上清液加入含有150mg PSA（乙二胺-N-丙基硅烷）和900mg無水MgSO4的離心管中，渦旋震蕩1min，8000r/min離心5min，取1mL上清液過0.22μm有機(jī)濾膜，待UPLC-MS/MS檢測分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法條件優(yōu)化

2.1.1 樣品前處理方法 本實驗以QuEChERS技術(shù)為基礎(chǔ)進(jìn)行樣品處理。水果樣品的農(nóng)殘分析中一般采用乙腈、甲醇或者丙酮為提取溶劑，有文獻(xiàn)報道甲醇和丙酮的提取效率較差[13-14]，另外根據(jù)辛硫磷本身的性質(zhì)，其在酸性條件下不易分解，因而本實驗選定1%醋酸-乙腈溶液為提取溶劑。蘋果樣品含水量高，且含有較多的有機(jī)酸和糖類等雜質(zhì)，因此，在提取過程中加入氯化鈉和檸檬酸鈉進(jìn)行鹽析和除雜，加入無水MgSO4除去多余的水分，在凈化過程中加入PSA作為固相萃取吸附劑，去除有機(jī)酸等雜質(zhì)。

2.1.2 色譜條件 樣品提取溶劑選擇酸化乙腈，為減少色譜分析過程中的溶劑效應(yīng)，本實驗流動相采用水-乙腈體系。水相中加入適量酸能促進(jìn)化合物電離，提高其響應(yīng)值和靈敏度。因此，選擇0.1%甲酸水溶液為A相，乙腈為B相。實驗選擇Waters UPLC BEH C18柱，1.7μm的粒徑和超高壓的耐受能帶來更好的分離度和靈敏度。流動相的梯度洗脫程序見表1。采用此條件對辛硫磷進(jìn)行分析，總分析時長5min，目標(biāo)物的保留時長1.97min。

2.1.3 質(zhì)譜條件 采用儀器自帶的Masslynx軟件來優(yōu)化目標(biāo)物的質(zhì)譜條件，運(yùn)行Intellistart功能對目標(biāo)物分別進(jìn)行一級全掃描和二級質(zhì)譜掃描，最終得到優(yōu)化后的母離子、子離子、碰撞電壓等參數(shù)。其中，以響應(yīng)值最大的子離子為定量離子。對辛硫磷標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析，得到其MRM模式下的離子提取圖，詳見圖1。

2.2 方法學(xué)驗證

2.2.1 線性方程、檢出限及定量限 用空白的蘋果基質(zhì)溶液配制濃度分別為2.0、4.0、8.0、20.0、40.0、100.0ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。按照上述分析條件測定，以目標(biāo)物的峰面積（Y）對濃度（X，ng/mL）建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖2所示。從圖2可以看出，其線性回歸方程為Y=7371.3X+3283.04，相關(guān)系數(shù)R2=0.999020，說明辛硫磷在2.0～100.0ng/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)出了良好的線性關(guān)系。以信噪比S/N≥3確定方法的檢出限（LOD），S/N≥10確定方法的定量限（LOQ），得出LOD=1.0μg/kg，LOQ=4.0μg/kg。

2.2.2 加標(biāo)回收率和精密度 本實驗采用標(biāo)準(zhǔn)加入法進(jìn)行回收率和精密度的考察，在空白蘋果樣品中加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，制成加標(biāo)含量分別為4.0、8.0、40.0μg/kg的樣品，按照“1.3.4”樣品制備方法進(jìn)行處理，每個濃度水平做6個平行樣品。由表3可知，蘋果中辛硫磷3個水平的加標(biāo)回收率在82.71%～102.10%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在0.72%～3.10%;方法的回收率和精密度均符合農(nóng)殘分析的要求。

2.3 實際樣品測定 利用本實驗建立的分析方法對市售的6種蘋果樣品進(jìn)行了辛硫磷殘留的檢測，結(jié)果均未檢出殘留。

3 結(jié)論

本研究基于QuEChERS技術(shù)，采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS），建立了一種快速、簡便、準(zhǔn)確檢測蘋果中辛硫磷農(nóng)藥殘留的方法，縮短了樣品分析檢測的時間，同時保證了結(jié)果的準(zhǔn)確性。該方法靈敏度高、回收率穩(wěn)定、重復(fù)性良好，能很好的滿足蘋果中辛硫磷殘留的檢測要求。

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（責(zé)編：張宏民）