王 冰, 楊 勇

(陜西省安康市中心醫(yī)院, 1. 婦科; 2. 核醫(yī)學科, 陜西 安康, 725000)

子宮內(nèi)膜癌屬于婦科常見惡性腫瘤，是造成患者死亡的主要婦科腫瘤之一，相關數(shù)據(jù)顯示，每年大約有20萬新發(fā)病例。若未及時發(fā)現(xiàn)并進行準確診斷，隨著疾病進展，癥狀不斷加重，給患者帶來較大傷害，甚至危及生命安全，因此臨床選擇有效檢測方式成為關鍵[1]。絲裂原活化蛋白激酶4(MAP2K4)屬于編碼MAP激酶信號家族基因的主要成員之一，由于絲裂原活化蛋白激酶通道能夠介導細胞反應的信號系統(tǒng)，廣泛存在于多類細胞中，在細胞生長發(fā)育及凋亡中具有重要意義。若多種激酶組分出現(xiàn)異?；罨蓪е录膊“l(fā)生[2-3], MAP2K4被激活后出現(xiàn)雙重特異性，促進細胞凋亡并使其發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。絲裂原活化蛋白激酶信號通路是細胞外信號受到刺激后產(chǎn)生細胞核反應的共同通路，也是介導上皮細胞、間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的細胞內(nèi)信號分子，其中上皮細胞、間充質(zhì)轉(zhuǎn)化主要是上皮細胞在特殊狀況下發(fā)生間質(zhì)細胞分化，其特征以上皮細胞黏附分子表達降低為主，同時可能發(fā)生波形蛋白的重新表達[4-5]。雖然其在炎癥、癌癥轉(zhuǎn)移等疾病中具有重要作用，但關于MAP2K4和波形蛋白同時表達的報道較少。本研究探討MAP2K4和波形蛋白聯(lián)合檢測在子宮內(nèi)膜癌早期診斷中的意義，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇本院2016年5月—2018年1月納入的103例子宮內(nèi)膜癌患者作為研究對象，年齡38～57歲，平均(3.58±1.02)歲; 絕經(jīng)49例，未絕經(jīng)54例; 組織學分型: 低分化者21例，中分化者35例，高分化者47例; 國際婦產(chǎn)科聯(lián)合會(FIGO) Ⅰ期81例, Ⅱ、Ⅲ期22例; 淋巴轉(zhuǎn)移者12例，未轉(zhuǎn)移者91例; 肌層浸潤深度≥1/2者16例，肌層浸潤深度<1/2者87例。分別提取所有患者的子宮內(nèi)膜癌組織標本，每份標本分成2份，分別檢測MAP2K4、波形蛋白以及二者聯(lián)合檢測的陽性表達情況。

1.2 研究方法

試劑選擇SP試劑盒、兔抗人MAP2K4單克隆抗體、兔抗人波形蛋白單克隆抗體、二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒等。收集所有研究對象的子宮內(nèi)膜癌組織標本，選擇4%中性福爾馬林固定，利用石蠟包埋，保持4 μm厚度持續(xù)切片并烤干。嚴格參照鏈霉親合素-生物素酶復合物法，免疫組化操作均遵照試劑盒說明書進行，一抗按照1∶100稀釋。另外，選擇已知的陽性片作為對照，而磷酸鹽(PBS)緩沖液代替一抗成為空白對照。其中MAP2K4和波形蛋白的表達均定位于胞漿，也可能出現(xiàn)胞核著色，細胞漿或者核內(nèi)存在棕黃色顆粒為陽性。選擇400倍顯微鏡隨機觀察視野，按照陽性細胞數(shù)量所占比例、著色強度評分，采用所有得分相乘后的總分評價陽性結(jié)果。

1.3 觀察指標

① 陽性細胞所占比例: 無記為0分, ≤10%記為1分, 11%～50% 記為2分, 51%～75%記為3分, >75%記為 4分; ② 著色強度評分: 棕褐色記為3分，棕黃色記為2分，淡黃色記為1分，無色記為0分。判斷免疫組化的結(jié)果主要依照上述2個方面進行評價，若 ① ② 二者得分的乘積為0～1分記為陰性(-)，若乘積為2～3分記為陽性(+)，乘積≥4分記為強陽性()。選擇2名經(jīng)驗豐富的專業(yè)人員對免疫組化染色結(jié)果進行獨立讀片，若出現(xiàn)意見分歧可討論后提出統(tǒng)一結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計學方法

2 結(jié) 果

2.1 MAP2K4與波形蛋白的表達及臨床病理

因素的相關性

MAP2K4檢測陽性24例，強陽性15例，陰性64例; 波形蛋白檢測陽性32例，強陽性35例，陰性36例, MAP2K4檢測陽性率為37.86%(39/103), 低于波形蛋白的陽性率65.05%(67/103), 且陽性細胞所占比例積分及著色強度評分低于波形蛋白檢測，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05), 見表1。

MAP2K4的陽性表達與患者的FIGO分期、淋巴轉(zhuǎn)移有顯著相關性(P<0.05), 而波形蛋白的陽性表達與患者的FIGO分期、組織學分型、浸潤深度及淋巴轉(zhuǎn)移有顯著相關性(P<0.05), 見表2。

表1 MAP2K4與波形蛋白陽性細胞所占比例積分及著色強度評分對比 分

與MAP2K4檢測比較, *P<0.05。

表2 MAP2K4與波形蛋白表達及臨床病理因素的相關性(n=103)

2.2 靈敏度、特異性

MAP2K4檢測的靈敏度、特異性分別為71.84%(74/103)、73.79%(76/103); 波形蛋白檢測分別為80.58%(83/103)、85.44%(88/103); 聯(lián)合檢測分別為92.23%(95/103)、95.15%(98/103)。MAP2K4和波形蛋白聯(lián)合檢測的靈敏度、特異性，高于單一檢測，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

3 討 論

近年來，中國子宮內(nèi)膜癌的患病率逐年升高，其發(fā)生率約占女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的第2位，已成為威脅女性身心健康及日常生活的主要疾病。若能夠盡早發(fā)現(xiàn)并及時給予有效治療，可快速穩(wěn)定病情，延長生存周期[6]。MAP2K4屬于絲裂原活化蛋白激酶信號傳導途徑中主要成員，能夠刺激P38 MAPK、c-Jun N末端激酶，并主要定位于染色體片段，通常在人上皮性腫瘤上，尤其是乳腺癌、卵巢癌按照7%～10%的速度丟失[7-8]。因此, MAP2K4被公認為腫瘤抑制基因，但也曾有報道[9]提出MAP2K4對部分腫瘤可能存在促進作用。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn), MAP2K4檢測陽性率低于波形蛋白陽性率65.05%(67/103), 且陽性細胞所占比例積分及著色強度評分較波形蛋白顯著更低(P<0.05), 這提示了波形蛋白在子宮內(nèi)膜癌組織中的陽性表達相對更高。進一步分析二者與臨床病理因素的相關性后發(fā)現(xiàn), MAP2K4的陽性表達與患者的FIGO分期、淋巴轉(zhuǎn)移有關，而波形蛋白的陽性表達與患者的FIGO分期、組織學分型、浸潤深度及淋巴轉(zhuǎn)移有關。說明MAP2K4及波形蛋白均與患者的病情進展有一定關聯(lián)。事實上，波形蛋白屬于中間絲的常見蛋白質(zhì)，可廣泛分布于正常間質(zhì)細胞中，具有保證細胞完整的作用，并具有抵抗應力[10-12]。臨床上曾有較多報道表明，波形蛋白在多種上皮癌中出現(xiàn)過表達，可加速病灶生長，導致預后不良。由于上皮細胞、間充質(zhì)轉(zhuǎn)化與胚胎發(fā)育密切相關，因此在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中也存在一定作用，使上皮細胞失去活性，減少基質(zhì)的黏附，導致細胞變形后活性增強，同時得到間質(zhì)細胞的特性，提升腫瘤細胞的攻擊能力，促進遠處轉(zhuǎn)移[13-15]。而波形蛋白屬于β鏈蛋白/T細胞因子中的靶點，并在細胞黏附、轉(zhuǎn)移及細胞傳導中具有重要意義。若其表達在上皮細胞、間充質(zhì)轉(zhuǎn)化中提高，說明存在腫瘤轉(zhuǎn)移現(xiàn)象，而此種現(xiàn)象的發(fā)生主要可能是由于其與MAP2K4共同參與到了絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路這一介導細胞反應的重要信號通路而致使腫瘤轉(zhuǎn)移的。此外，本研究結(jié)果表明, MAP2K4和波形蛋白聯(lián)合檢測的靈敏度、特異性，顯著高于單一檢測，提示MAP2K4、波形蛋白在子宮內(nèi)膜癌中均具有一定的診斷價值，同時可用來評價疾病發(fā)展及轉(zhuǎn)移情況，為治療及預后提供前提。其中波形蛋白可促進疾病發(fā)展、分化、肌層浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，可成為評估疾病的主要指標[16], 而AP2K4則可較好地反映出腫瘤轉(zhuǎn)移情況。因此, MAP2K4和波形蛋白檢測均在子宮內(nèi)膜癌中具有不同程度的診斷價值，但單一檢測的靈敏度、特異性并不理想，聯(lián)合檢測后可增強診斷結(jié)果的準確性，為治療及預后提供保障。綜上所述, MAP2K4和波形蛋白聯(lián)合檢測可預測疾病發(fā)展、浸潤及轉(zhuǎn)移情況，對子宮內(nèi)膜癌的治療具有重要作用。