褚乾梅 黃大明 朱夢(mèng)潔 王雪 張姝娟 董菁 王盾

摘要：建立果蔬中多菌靈、啶蟲(chóng)脒、甲萘威等12種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的QuEchERs結(jié)合高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的檢測(cè)方法。樣品經(jīng)乙腈提取，應(yīng)用QuEchERs技術(shù)凈化，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾，以乙腈-5 mmol/L醋酸銨溶液（含0.1%甲酸）為流動(dòng)相梯度洗脫，并在ZOBRAX EclipseXDB-C18柱上實(shí)現(xiàn)12種農(nóng)藥的基線分離。該方法采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）正離子模式掃描，標(biāo)準(zhǔn)曲線外標(biāo)法定量。結(jié)果表明，12種待測(cè)物在各自的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均不小于0.996 6，檢出限為0.1 μg/L。在三個(gè)不同添加水平下的平均回收率為80%～127%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.1%～10.2%。該方法操作簡(jiǎn)單，凈化效果好，靈敏度高，可用于果蔬中12種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的快速分析。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜;果蔬;QuEchERs;氨基甲酸酯類農(nóng)藥;檢測(cè)

中圖分類號(hào)：O657.7+2;S481+.8? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：0439-8114（2019）21-0163-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.21.035

Abstract： A high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometric method with modified QuEchERs method for sample preparation was developed for the simultaneous determination of 12 carbamate pesticides in vegetables and fruits. The samples were extracted with acetonitrile，purified with QuEchERs method and filtrated by 0.22 μm microporous filters. The separation was carried on an ZOBRAX EclipseXDB-C18 Colum（150 mm×4.6 mm，5 μm） by a gradient elution using methanol -5 mmol/L ammonium acetate solution（contain 0.1% formic acid aqueous）as mobile phase. The analytes were detected by tandem mass spectrometry under multiple reaction monitoring（MRM） mode with positive electrospray ionization（ESI+） and quantified by external standard calibration method. The correlation coefficients of the standard calibration curves for the 12 analytes were all above 0.996 6. The limits of detection was 0.1 μg/L. The blank samples were fortified at three leves，and the average recoveries ranged from 80.0% to 127.0% with the RSDs from 1.1% to 10.2%. The method developed was easy to operate，sensitive，and had good purification effect. It could be applied for the rapid determination of 12 carbamate pesticides in vegetables and fruits.

Key words： high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry; vegetables and fruits; QuEchERs; carbamate pesticides;detection

氨基甲酸酯類農(nóng)藥以其殘效小、選擇性強(qiáng)、對(duì)人畜毒性較低等特點(diǎn)而被國(guó)內(nèi)外廣泛應(yīng)用于病蟲(chóng)害的防治[1，2]。作為高毒有機(jī)氯農(nóng)藥的替代品，氨基甲酸酯類農(nóng)藥通過(guò)抑制乙酰膽堿酯酶的活性而引起神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿的積累，造成神經(jīng)功能紊亂，其在果蔬中的過(guò)量殘留或長(zhǎng)期暴露在環(huán)境中會(huì)對(duì)人們的身體健康造成一定的危害[3，4]。

目前果蔬中該類農(nóng)藥的殘留分析有高效液相色譜熒光法[5]、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[6-8]、氣相色譜法[9]和氣相色譜質(zhì)譜法[10]。而液相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜法用于農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留分析為目前殘留分析研究的熱點(diǎn)[11]。高效液相色譜熒光法靈敏度高，選擇性強(qiáng)，但在實(shí)際樣品中，由于基質(zhì)不同，個(gè)別蔬菜種類有較強(qiáng)干擾，無(wú)法做出進(jìn)一步的確證[12]。液相色譜—三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜靈敏度高，抗干擾能力強(qiáng)，是目前痕量分析的首選方法[13]?？焖?、簡(jiǎn)單、廉價(jià)、高效、可靠和安全的分散固相萃取（QuEchERs）技術(shù)可用于果蔬中農(nóng)藥殘留檢測(cè)[14-16]。

試驗(yàn)采用改進(jìn)的QuEchERs方法提取、凈化樣品，結(jié)合高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測(cè)，建立12種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)方法，以期為果蔬中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法作補(bǔ)充，為襄陽(yáng)市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管部門日常監(jiān)督提供科學(xué)、客觀的技術(shù)依據(jù)。

1? 材料與方法

1.1? 材料與儀器

果蔬樣品：采用四分法取適量樣品，用食品加工機(jī)將樣品粉碎，裝入保鮮盒中，于-18 ℃冰柜中保存，備用;氨基甲酸酯類農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液（100 μg/mL）：多菌靈、啶蟲(chóng)脒、克百威、甲萘威、嘧霉胺、苯醚甲環(huán)唑、噠螨靈、甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽（甲維鹽）、咪鮮胺、烯酰嗎啉、嘧菌酯、涕滅威亞砜均購(gòu)于天津環(huán)保所;甲醇、乙酸銨為色譜級(jí)（JetBaker）;乙腈，甲酸為色譜級(jí)（Fisher）;試驗(yàn)用水為娃哈哈純凈水;0.22 μm有機(jī)濾膜（津騰）;Bond Elut EN萃取鹽包（內(nèi)含4 g MgSO4、1 g NaCl，1 g檸檬酸氫鈉及0.5 g檸檬酸氫二鈉）和15 mL凈化管（內(nèi)含885 mg MgSO4、150 mg PSA及15 mg GCB）均購(gòu)自美國(guó)Agilent公司。

1.2? 儀器與設(shè)備

Agilent 1260超高效液相色譜系統(tǒng)，包括四元泵，在線真空脫氣機(jī)，柱溫箱，自動(dòng)進(jìn)樣器（安捷倫公司）;API3200質(zhì)譜儀，配有電噴霧離子源（ESI）（美國(guó)AB公司）;食品加工機(jī)（上海博朗）;CP4102電子天平（上海奧豪斯）;超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;5810R低溫冷凍離心機(jī)（美國(guó)Eppendorf公司）;MS3渦旋混勻器（德國(guó)IKA公司）。

1.3? 方法

1.3.1? 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制? 分別取400 μL 100 μg/mL的12種標(biāo)準(zhǔn)溶液加入到10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，混勻，配制成4 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，-18 ℃避光保存?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)工作液根據(jù)需要用甲醇配制。

1.3.2? 樣品制備? 準(zhǔn)確稱取10.0 g粗粉碎的蔬菜樣品置于50 mL離心管中，加10 mL乙腈和陶瓷均質(zhì)子，渦旋振蕩1 min，加入Bond Elut EN萃取鹽包，渦旋振蕩1 min，8 000 r/min離心5 min，取6 mL乙腈上清液加入到含有凈化吸附劑和硫酸鎂的15 mL凈化管中，渦旋振蕩1 min，8 000 r/min離心5 min。準(zhǔn)確吸取1 mL上清液過(guò)0.22 μm有機(jī)濾膜，待HPLC-MS/MS分析。

1.3.3? 儀器條件

1）色譜條件。色譜柱：ZOBRAX EclipseXDB-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）;流動(dòng)相：A為5 mmol/L乙酸銨溶液（含0.1%甲酸），B為甲醇;梯度洗脫程序：0～6 min，90% A→10% A;6～10 min，10% A;10～10.01 min，10% A→90% A;10.01～13 min，90% A。流速1 mL/min;進(jìn)樣量5 μL;柱溫40 ℃。

2）質(zhì)譜條件。電噴霧離子源（ESI）;正離子掃描;多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）;毛細(xì)管電壓：5 500 V;干燥氣溫度500 ℃;Gas1：60 mL/min;Gas2：65 mL/min。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 質(zhì)譜條件優(yōu)化

采用電噴霧離子源，在正離子模式下分別對(duì)0.5 μg/mL的12種氨基甲酸酯類標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行母離子全掃描，確定其分子離子。再分別以以上離子作為母離子進(jìn)行子離子掃描，篩選響應(yīng)值較高、干擾較小、穩(wěn)定的兩個(gè)離子作為子離子，峰形較高的離子作為定量離子，并優(yōu)化DP和CE。各目標(biāo)化合物優(yōu)化質(zhì)譜條件見(jiàn)表1。

2.2? 色譜條件優(yōu)化

采用梯度洗脫能較好地分離12種目標(biāo)化合物，總離子流見(jiàn)圖1。通過(guò)在流動(dòng)相中加入適量的甲酸和乙酸銨，不但可以增加分離度，改善峰形，而且可以使氨基甲酸酯類農(nóng)藥在ESI正離子模式的質(zhì)譜信號(hào)得到增強(qiáng)，提高檢測(cè)靈敏度。梯度洗脫條件的優(yōu)化：經(jīng)過(guò)反復(fù)試驗(yàn)，改變不同時(shí)間段流動(dòng)相中有機(jī)相和水相的比例，最終確定了最佳梯度洗脫程序：0～6 min，10%甲醇→90%甲醇;6～10 min，90%甲醇;10～10.01 min，90%甲醇→10%甲醇;10.01～13 min，10%甲醇。

2.3? 樣品前處理方法的選擇

以未檢出農(nóng)藥殘留的蔬菜為基質(zhì)，添加0.05 mg/kg氨基甲酸酯類混合標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)藥，分別采用NY/T 761-2008[17]中氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留測(cè)定的前處理方法和QuEchERs前處理方法進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，兩種方法處理后12種農(nóng)藥的回收率見(jiàn)表2。其中回收率100%，表示樣品中所含農(nóng)藥在檢測(cè)過(guò)程中無(wú)損失，結(jié)果越接近100%，則前處理方法越好。結(jié)果表明，QuEchERs前處理方法簡(jiǎn)單、快捷、安全，除多菌靈、嘧霉胺和涕滅威亞砜回收率與761方法接近，其他9種農(nóng)藥的回收率均優(yōu)于761方法，且QuEchERs方法所得回收率的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均低于761方法，平行性更好，可作為測(cè)定12種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留測(cè)定的前處理方法。

2.4? 標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限

將混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液分別稀釋成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液，按上述操作條件進(jìn)行測(cè)定，以濃度對(duì)相應(yīng)的峰面積進(jìn)行線性回歸，獲得氨基甲酸酯類農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)曲線及相關(guān)系數(shù)。12種農(nóng)藥的線性范圍、線性方程和相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表3。標(biāo)準(zhǔn)曲線在線性范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)為0.996 6～0.999 9，線性范圍為5～100 μg/L，使用該儀器的方法檢出限為0.1 μg/kg，表明該方法可對(duì)氨基甲酸酯類農(nóng)藥進(jìn)行準(zhǔn)確定性、定量分析。

2.5? 回收率和精確度

取10.0 g未檢出農(nóng)藥殘留的蔬菜為空白樣品，在線性范圍內(nèi)分別添加高、中、低3個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)氨基甲酸酯類農(nóng)藥按“1.3”方法提取后進(jìn)行回收率試驗(yàn)。每個(gè)添加濃度重復(fù)3次，結(jié)果見(jiàn)表4。由表4可以看出，方法回收率為80%～127%，標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.1%～10.2%，滿足農(nóng)藥多殘留分析的要求。