黃志偉

【摘要】 目的 分析E6/E7 mRNA表達(dá)在陰道鏡檢查陰性女性宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）隨訪評(píng)估中的價(jià)值。方法 選取行陰道鏡檢查陰性的1586例宮頸炎性疾病患者， 其中E6/E7 mRNA陽性886例， E6/E7?mRNA陰性700例， 均隨訪1年后， 比較E6/E7 mRNA陽性、陰性患者的高危型人乳頭瘤病毒（HR-HPV）檢出情況， CINⅡ+ 發(fā)生情況， 不同年齡段患者CINⅡ+ 發(fā)生情況。結(jié)果 隨訪1年后， 886例E6/E7 mRNA陽性患者中檢出HR-HPV416例， 檢出率為46.95%;700例E6/E7 mRNA陰性患者中檢出HR-HPV50例， 檢出率為7.14%;E6/E7 mRNA陽性患者的 HR-HPV檢出率高于E6/E7 mRNA陰性患者， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。886例E6/E7 mRNA陽性患者發(fā)生CINⅡ+ 97例， 發(fā)生率為10.95%;700例E6/E7?mRNA陰性患者發(fā)生CINⅡ+ 15例， 發(fā)生率為2.14%;E6/E7 mRNA陽性患者的CINⅡ+ 發(fā)生率高于E6/E7 mRNA陰性患者， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。將E6/E7 mRNA陽性患者分為<40歲464例， ≥40歲 422例;E6/E7 mRNA陰性患者分為<40歲356例， ≥40歲344例。E6/E7 mRNA陽性患者中<40歲患者的CINⅡ+ 發(fā)生率為4.96%， ≥40歲患者發(fā)生率為17.54%， 比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。E6/E7 mRNA陰性患者中<40歲患者的CINⅡ+ 發(fā)生率為0， ≥40歲患者發(fā)生率為4.36%， 比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 E6/E7 mRNA表達(dá)對(duì)CINⅡ+ 發(fā)生具有較高的預(yù)測(cè)價(jià)值。

【關(guān)鍵詞】 宮頸上皮內(nèi)瘤變;E6/E7 mRNA;隨訪評(píng)估

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2019.30.023

隨著陰道鏡檢查技術(shù)的應(yīng)用， CIN的檢出率明顯提高， 但尚無預(yù)后評(píng)估的有效指標(biāo)， 導(dǎo)致患者需要進(jìn)行多次宮頸細(xì)胞學(xué)檢查、HPV檢測(cè)以及組織病理學(xué)檢查， 不僅增加了患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)， 也增加了其心理壓力[1]。研究發(fā)現(xiàn)[2]， HR-HPV E6/E7基因編碼的致癌蛋白與CIN發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)， 宮頸癌、癌前病變患者E6/E7 mRNA表達(dá)明顯升高， 且其表達(dá)與患者預(yù)后具有相關(guān)性。本文將分析E6/E7 mRNA表達(dá)在女性CIN隨訪評(píng)估中的價(jià)值， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2017年1月～2018年1月到本院進(jìn)行陰道鏡檢查陰性的1586例宮頸炎性疾病患者， 年齡26～68歲，?平均年齡（44.58±11.92）歲， 存在HR-HPV感染， 既往無CIN病史、子宮全切術(shù)史、盆腔放射史等， 已排除妊娠期、哺乳期女性。其中， E6/E7 mRNA陽性886例， 陰性700例。

1. 2 方法

1. 2. 1 宮頸細(xì)胞學(xué)檢查 在宮頸柱狀上皮與鱗狀上皮交接處旋轉(zhuǎn)宮頸刷收集脫落細(xì)胞， 送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢驗(yàn)， 利用描述式診斷系統(tǒng)（TBS）診斷。

1. 2. 2 HPV-DNA檢測(cè) 使用Hbri Max醫(yī)用核酸分子快速雜交儀、美國PE公司PE5700基因擴(kuò)增儀、HPV擴(kuò)增分型檢測(cè)試劑盒、基因芯片檢測(cè)系統(tǒng)等， 根據(jù)導(dǎo)流雜交原理， 利用雜交儀及擴(kuò)增分型試劑盒， 在基因芯片膜上進(jìn)行基因分型快速檢測(cè)， 包括13種高危亞型、5種低危亞型以及3種常見亞型。

1. 2. 3 E6/E7 mRNA檢測(cè) 使用河南Kodia生物公司提供的Quanti Virus HPV E6/E7 mRNA試劑盒， 對(duì)上述高危HPV亞型進(jìn)行檢測(cè)。

1. 2. 4 病理學(xué)檢查 隨訪1年后， 對(duì)患者再次進(jìn)行HPV-DNA檢測(cè)、液基薄層細(xì)胞（TCT）檢測(cè)， 發(fā)現(xiàn)HR-HPV持續(xù)感染或非典型鱗狀上皮細(xì)胞（ASCUS）以上， 進(jìn)行陰道鏡病理檢查， 將其分為正常/炎癥、CIN Ⅰ～Ⅲ級(jí)、宮頸癌等， 以CINⅡ+ 為研究終點(diǎn)[3]。

1. 3 觀察指標(biāo) 隨訪1年后， 比較E6/E7 mRNA陽性、陰性患者的HR-HPV檢出情況， CINⅡ+ 發(fā)生情況， 不同年齡段患者CINⅡ+ 發(fā)生情況。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 E6/E7 mRNA陽性、陰性患者的HR-HPV檢出情況比較 隨訪1年后， 886例E6/E7 mRNA陽性患者中檢出HR-HPV 416例， 檢出率為46.95%;700例E6/E7 mRNA陰性患者中檢出HR-HPV 50例， 檢出率為7.14%;E6/E7 mRNA陽性患者的 HR-HPV檢出率高于E6/E7 mRNA陰性患者， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=298.68， P<0.05）。

2. 2 E6/E7 mRNA陽性、陰性患者的CINⅡ+ 發(fā)生情況比較隨訪1年后， 886例E6/E7 mRNA陽性患者發(fā)生CINⅡ+ 97例，?發(fā)生率為10.95%;700例E6/E7 mRNA陰性患者發(fā)生CINⅡ+?15例， 發(fā)生率為2.14%;E6/E7 mRNA陽性患者的CINⅡ+ 發(fā)生率高于E6/E7 mRNA陰性患者， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=46.20， P<0.05）。

2. 3 不同年齡段E6/E7 mRNA表達(dá)患者的CINⅡ+ 發(fā)生情況比較 將E6/E7 mRNA陽性患者分為<40歲464例， ≥40歲422例;E6/E7 mRNA陰性患者分為<40歲356例， ≥40歲344例。E6/E7 mRNA陽性患者中<40歲患者的CINⅡ+ 發(fā)生率為4.96%， ≥40歲患者發(fā)生率為17.54%， 比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=35.87， P<0.05）。E6/E7 mRNA陰性患者中<40歲患者的CINⅡ+ 發(fā)生率為0， ≥40歲患者發(fā)生率為4.36%， 比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=15.86， P<0.05）。見表1。

3 討論

宮頸癌是危及女性生殖健康的常見惡性腫瘤， CIN是一種宮頸病變， 與宮頸浸潤癌關(guān)系密切， 早期發(fā)現(xiàn)及治療是預(yù)防宮頸癌發(fā)生的重要環(huán)節(jié)。2003年食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）批準(zhǔn)了在宮頸癌篩查中應(yīng)用HPV DNA基因分型檢測(cè)， 可提高CIN檢出率， 減少宮頸癌發(fā)生[4]。自從HPV DNA檢測(cè)開展以來， 越來越多的 CINⅠ可被檢測(cè)出來， 但其中60%左右的患者可自然消退， 不需要接受治療， 需要進(jìn)行長(zhǎng)期隨訪評(píng)估。宮頸TCT是一種常見的宮頸疾病檢測(cè)技術(shù)， 具有較高的特異性， 對(duì)CINⅠ持續(xù)或進(jìn)展均具有預(yù)測(cè)價(jià)值， 但敏感度較低， 且受檢測(cè)醫(yī)師診斷技術(shù)影響較大。HPV DNA基因分型檢測(cè)是一種敏感度較高的病因檢測(cè)方法， 但特異度不足， 無法判斷HPV的致癌活性。兩種檢測(cè)方式均無法了解宮頸病變進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)， 可能引起過度治療， 尤其是<30歲的年輕女性， 承受了較大的心理及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。因此， 迫切需要制定科學(xué)、合理、經(jīng)濟(jì)的隨訪方案， 盡量減輕患者的心理負(fù)擔(dān)及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。

研究發(fā)現(xiàn)[5]， HPV E6/E7基因與宮頸癌發(fā)生密切相關(guān)， 其一旦與宿主細(xì)胞DNA整合， 可出現(xiàn)HPV E6/E7過度表達(dá)， 產(chǎn)生癌蛋白， 誘發(fā)癌變。由于RNA模板水平可在一定程度上反映癌基因活性， 因此， 可通過檢測(cè)E6/E7 mRNA表達(dá)評(píng)估HPV感染后進(jìn)展情況。以往有研究顯示， 61.9%的CINⅠ轉(zhuǎn)陰患者均為HPV E6/E7 mRNA陽性、表達(dá)水平為583.5 copies/ml， 而進(jìn)展患者或持續(xù)感染患者的HPV E6/E7 mRNA陽性率約為81.8%、表達(dá)水平約為3738.4 copies/ml， 比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。也有報(bào)道顯示， HPV E6/E7 mRNA檢測(cè) CINⅠ持續(xù)感染或進(jìn)展的敏感度為81.8%， 而TCT檢測(cè)敏感度僅為50.0%， HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)具有明顯優(yōu)勢(shì)。但HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)的特異度較低， 僅為38.1%， 而TCT檢測(cè)的特異度為66.7%。有學(xué)者認(rèn)為， HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)的最佳臨界值為2724.0 copies/ml， 該時(shí)期可獲得較高的特異度， 約為81.0%。對(duì)CINⅠ患者進(jìn)行HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)降低了漏診率， 并通過定量檢測(cè)， 可降低其誤診率。有研究顯示， HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)準(zhǔn)確率與宮頸病變的嚴(yán)重程度有關(guān)， CINⅠ～Ⅲ患者檢測(cè)陽性率分別為7.50%、94.74%、92.00%， 而炎癥患者的檢測(cè)陽性率為47.29%， 比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。80%的HPV感染患者均會(huì)在2年內(nèi)自然消退， 從感染到發(fā)生癌變可能需要數(shù)年。作為毒癌基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物， E6/E7 mRNA可反映癌基因活性， 因此， 與HPV DNA相比， 精準(zhǔn)度及特異度更高， 因此， 用于CIN隨訪評(píng)估可減輕患者的心理負(fù)擔(dān)。在本次研究中， 隨訪1年后， E6/E7 mRNA陽性患者中HR-HPV檢出率明顯高于陰性患者， CINⅡ+發(fā)生率高于陰性患者， 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;E6/E7 mRNA陽性患者中≥40歲患者的CINⅡ+ 發(fā)生率明顯高于<40歲患者， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。表明E6/E7 mRNA表達(dá)陽性患者的HR-HPV檢出率更高， CINⅡ+ 病變風(fēng)險(xiǎn)更高， 尤其是≥40歲女性， 應(yīng)作為重點(diǎn)隨訪對(duì)象。應(yīng)注意的是， E6/E7 mRNA陰性患者同樣可發(fā)生CINⅡ+ ， 仍需要密切隨訪觀察， 確保能夠盡早發(fā)現(xiàn)并治療。建議可適當(dāng)減少隨訪次數(shù)， 延長(zhǎng)隨訪時(shí)間。對(duì)E6/E7 mRNA表達(dá)水平高于2724.0 copies/ml的患者， CIN持續(xù)或進(jìn)展可能性更大， 應(yīng)采取更加積極的隨訪方案， 避免延誤病情， 影響治療效果[6-8]。

綜上所述， E6/E7 mRNA表達(dá)對(duì)CINⅡ+ 發(fā)生具有較高的預(yù)測(cè)價(jià)值， 可應(yīng)用于宮頸癌篩查， 避免過度檢查及治療。

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[收稿日期：2019-03-14]