王慶義

（安徽醫(yī)科大學(xué)附屬阜陽醫(yī)院 血液科，安徽 阜陽 236000）

0 引言

白血病是一類造血干細(xì)胞的惡性克隆性疾病，白血病約占惡性腫瘤總發(fā)病率的5%，按起病的緩急可分為急、慢性白血病。隨著環(huán)境污染的加劇，白血病發(fā)病率明顯升高[1]。近年來研究發(fā)現(xiàn)基因的表達(dá)異常為影響急性髓系白血?。ˋML）發(fā)病的主要因素，如CBFB、PML-RARα/t(15；17)、CEBPA基因突變、BAALC基因等。近年來大規(guī)模研究應(yīng)用于識別新的癌癥相關(guān)基因成為臨床的熱點(diǎn)[2]，SOX4屬于SOX轉(zhuǎn)錄因子家族,共享相同的DNA結(jié)合域。相關(guān)研究指出Sox家族成員在許多腫瘤發(fā)育過程的調(diào)節(jié)中是至關(guān)重要[3]。在膀胱癌中，SOX4高表達(dá)與增加病人的存活期顯著相關(guān)，為此本文擬收集我院急性髓系白血病患者，分析骨髓中檢測SOX4基因的意義。

1 資料與方法

1.1 資料

收集2017年7至2018年7月我院診斷為急性髓系白血病的患者，共計(jì)60例，根據(jù)急性髓系白血病WHO修訂的MICM分型，其中M2患者40例；M3患者17例；M5患者3例。將我院未診斷為急性髓系白血病的患者定義為對照組，共計(jì)60例。研究組男33例，女27例，年齡39-69歲,平均年齡（48.32±18.23）歲。對照組男29例，女31例，年齡41-72歲,平均年齡（49.01±19.61）歲。兩組性別和年齡比較無差異?；颊邿o其它血液系統(tǒng)異常，無感染疾病。

1.2 研究方法

1.2.1 主要試劑及儀器

SOX4擬轉(zhuǎn)錄試劑盒及引物、PCR儀、紅細(xì)胞細(xì)胞裂解液等。

1.2.2 SOX4基因

1.2.2.1 總 RNA提取

取骨髓血2-3 mL，加入紅細(xì)胞裂解液，混勻后靜置，充分裂解紅細(xì)胞。加入TRIzol及氯仿，離心后加異丙醇，顛倒混勻，沉淀過夜。加入75%乙醇1 mL，離心5 min，棄上清，風(fēng)干20 min后加入DEPC水20 μl溶解。

1.2.2.2 逆轉(zhuǎn)錄PCR

按cDNA合成試劑盒說明書將提取的總RNA進(jìn)行c DNA的合成。

1.2.2.3 熒光定量 PCR

SOX4引物：上游序列：5-GTGAGCGAGATGATCTCGGG-3，下游序列：5-CAGGTTGGAGATGGACTC-3。

1.3 觀察指標(biāo)

對比研究組和對照組SOX4基因水平；不同生存期患者SOX4基因水平；SOX4基因水平與患者預(yù)后的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)

采用SPSS 17.0軟件，計(jì)數(shù)資料χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有意義。

2 結(jié)果

2.1 研究組和對照組SOX4基因水平

研究組SOX4基因水平明顯高于對照組，兩組結(jié)果比較有差異（P＜0.05），見表1。

表1 研究組和對照組SOX4基因水平

2.2 不同生存期患者SOX4基因水平

1年死亡組SOX4基因水平明顯高于1年存活組，兩組結(jié)果比較有差異（P＜0.05），見表2。

表2 不同生存期患者SOX4基因水平

2.3 SOX4基因水平與患者預(yù)后的關(guān)系

SOX4基因水平與1年死亡組關(guān)系呈負(fù)相關(guān)（r=-0.723，P＜0.05）。

3 討論

正常情況下，人體造血系統(tǒng)每天能產(chǎn)生數(shù)億個(gè)細(xì)胞，其中各種細(xì)胞均來源于造血干細(xì)胞。造血干細(xì)胞能分化為祖細(xì)胞。若此過程中有任何基因受到影響，均會影響造血過程[4]。目前我國白血病的發(fā)病率為3-4/10萬，白血病在男性患者位居第六位，在兒童中則居首位。根據(jù)形態(tài)、免疫表型和遺傳學(xué)異常將急性髓系白血病分為不同的亞型。急性髓細(xì)胞白血病(AML)主要特點(diǎn)為分化障礙和造血干細(xì)胞的異?？寺　Ｄ壳半S著研究的深入，發(fā)現(xiàn)很多生物學(xué)分子參與白血病的發(fā)生、發(fā)展，并可作為白血病的靶向治療位點(diǎn)[5]。

在腫瘤形成過程中，SOX4基因發(fā)揮著關(guān)鍵作用。如SOX4表達(dá)降低與黑色素瘤的轉(zhuǎn)移和不良預(yù)后顯著相關(guān)。SOX4是SOX性別決定區(qū)域的成員，SOX4基因表達(dá)異常在AML發(fā)病中起著重要作用[6]。一些研究指出SOX4可通過逆轉(zhuǎn)錄病毒誘導(dǎo)淋巴瘤的發(fā)生。本文發(fā)現(xiàn)研究組SOX4基因水平明顯高于對照組，兩組結(jié)果比較有差異（P＜0.05）；1年死亡組SOX4基因水平明顯高于1年存活組，兩組結(jié)果比較有差異（P＜0.05）。同樣有研究者采用實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測96例初發(fā)AML患者及26例健康對照組骨髓白細(xì)胞SOX4基因的表達(dá)水平，96例初治AML患者均檢測到SOX4的表達(dá)，其平均表達(dá)水平為（3.35±1.78），健康對照組SOX4表達(dá)水平為（1.91±1.47）。這說明SOX4基因參與AML的發(fā)病。研究指出SOX4屬于高度保守的C組（SoxC）轉(zhuǎn)錄因子，SOX4增加的干細(xì)胞特性、細(xì)胞遷移性[7]。目前大量文獻(xiàn)指出SOX4基因幾乎在所有的人類腫瘤中表達(dá)升高，包括乳腺癌、肺癌、腦腫瘤。同時(shí)SOX4與惡性腫瘤的細(xì)胞增殖及擴(kuò)散有關(guān)。本文還發(fā)現(xiàn)SOX4基因水平與1年死亡組關(guān)系呈負(fù)相關(guān)（r=-0.723，P＜0.05）。這說明SOX4基因表達(dá)增高，可以會減少患者的生存時(shí)間[8-10]。同樣有學(xué)者發(fā)現(xiàn)AML患者以SOX4基因相對表達(dá)量中位數(shù)3.26為界限，將其分為低表達(dá)組(＜3.26)和高表達(dá)組（≥3.26），采用Kaplan-Meier分析法繪制生存曲線。結(jié)果顯示，SOX4高表達(dá)組OS及EFS均較低（P=0.003、P=0.023）。這說明高SOX4高表達(dá)是急性髓系白血病患者的預(yù)后危險(xiǎn)因素之一。

綜上所述，本文認(rèn)為SOX4基因在急性髓系白血病患者骨髓中表達(dá)較正常人高，SOX4基因高表達(dá)可能與預(yù)后差有關(guān)。這就為醫(yī)學(xué)工作者提供一種思路，即通過研究SOX4基因可能為AML患者靶向治療。