秦國棟，王述柏*，張彩燕，李 莉，吳雪松，任景樂

（1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山東青島 266109；2.青島市畜牧獸醫(yī)研究所，山東青島 266109）

多年來人工授精技術(shù)在蛋種雞生產(chǎn)中普遍應(yīng)用，近年來在肉種雞生產(chǎn)中的應(yīng)用亦日益增多。目前種雞場(chǎng)的人工授精大多采用原精液進(jìn)行輸精，但原精輸精法存在一定缺陷[1]。公雞單次采精量較少、精子密度較高、母雞數(shù)量多、精液量相對(duì)缺乏，母雞的輸精量平均每次為25～30 μL，生產(chǎn)中難以準(zhǔn)確定量輸精，輸精量不足會(huì)影響受精率，反之造成精液浪費(fèi)[2-3]。對(duì)精液進(jìn)行稀釋后可增加精液量，具有提高精液利用率、提高輸精量的準(zhǔn)確性、提高優(yōu)良種公雞利用率、減少飼養(yǎng)成本、增加經(jīng)濟(jì)效益等優(yōu)點(diǎn)。我國有關(guān)種雞精液稀釋液的研究和報(bào)道較多，不同文獻(xiàn)稀釋液的配方和使用效果不盡一致。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)文獻(xiàn)資料[4-6]設(shè)置了5 種不同組分的稀釋液，分別對(duì)AA+父母代肉種公雞和海蘭褐父母代蛋種公雞的精液進(jìn)行稀釋，檢測(cè)并分析不同種類常溫稀釋液對(duì)精液品質(zhì)的影響，以期探討肉種雞和蛋種雞的適宜精液稀釋液配方，旨在為種公雞精液稀釋技術(shù)方案的完善及提高輸精前的精液質(zhì)量提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及儀器 實(shí)驗(yàn)選擇8 只55 周齡AA+父母代肉種公雞和8 只海蘭褐父母代蛋種公雞，分別由山東民和牧業(yè)股份有限公司和青島畜牧獸醫(yī)研究所奧特種雞場(chǎng)提供。

實(shí)驗(yàn)儀器包括精子質(zhì)量分析儀、OLPUS 顯微鏡、普通顯微鏡、恒溫水浴鍋、采精杯、集精管、移液槍、血球計(jì)數(shù)板、計(jì)數(shù)器、載玻片、蓋玻片等。

1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼養(yǎng)管理 所有實(shí)驗(yàn)雞按種公雞的常規(guī)飼養(yǎng)規(guī)程飼養(yǎng)管理飼養(yǎng)于青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物房，自由飲水，每只雞單籠飼養(yǎng)。每2 d 進(jìn)行1 次人工采精訓(xùn)練，采用背腹式按摩法采精，訓(xùn)練適應(yīng)7 d 后開始進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。于第8 天08:00 采集8 只空腹肉種公雞的精液，將其混勻，混合精液等量分為5 組，每組設(shè)3 個(gè)重復(fù)。1～5 組分別采用5 種常溫稀釋液稀釋150 倍（表1），所有稀釋精液均置于37.5℃恒溫水浴鍋中保存15 min，立即檢測(cè)精子活率及畸形率。蛋種公雞精液的處理方法同上。

表1 精液稀釋液配方 %

1.3 檢測(cè)指標(biāo)與方法 采用OLPUS 顯微鏡觀察精子活力和形態(tài)，共計(jì)數(shù)500 個(gè)精子。精子活率的檢測(cè)參考文獻(xiàn)[7]。精子畸形率的檢測(cè)及畸形精子的判定標(biāo)準(zhǔn)參考文獻(xiàn)[5]。

精子活率=直線運(yùn)動(dòng)精子數(shù)/總精子數(shù)×100%

精子畸形率=畸形精子數(shù)/500×100%

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 用Excel2016 軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行初步處理，用SPSS 20.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，用Duncan′s法進(jìn)行組間差異顯著檢驗(yàn)，結(jié)果以平均值± 標(biāo)準(zhǔn)差表示。P＜0.01 表示差異極顯著，P＜0.05 表示差異顯著，P>0.05 表示差異不顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同常溫精液稀釋液對(duì)肉種雞、蛋種雞公雞精子活率的影響 如表2 所示，1 組稀釋液稀釋的肉種雞精液精子活率最高，較2、3、4、5 組分別高8.82%（P＜0.05）、31.55%（P＜0.01）、10.63%（P＜0.05）、25.04%（P＜0.01）；2、4 組的精子活率高于3、5 組（P＜0.01）；3 組最低，與5 組差異不顯著。1 組稀釋液稀釋的蛋種雞精液精子活率亦最高，分別較2、3、4、5 組高8.83%（P＜0.05）、26.22%（P＜0.01）、10.30%（P＜0.01）、23.78%%（P＜0.01）；組間的差異性與肉種雞一致。

表2 不同種類常溫精液稀釋液對(duì)肉種雞、蛋種雞公雞精子活率的影響 %

2.2 不同種類常溫精液稀釋液對(duì)肉種雞、蛋種雞公雞精子畸形率的影響 如表3 所示，1、2、3、5 組稀釋液稀釋的肉種雞精液中，精子畸形率低于4 組（P＜0.05或P＜0.01）；2 組最低，較4 組低4.12%（P＜0.01）。5 種稀釋液稀釋的蛋種雞精液中，精子畸形率1 組最低，4 組最高，1、2、3、5 組極顯著低于4 組，1、2 組顯著低于5 組，1 組分別較4、5 組低7.93%（P＜0.01）、3.66%（P＜0.05）。

3 討 論

3.1 不同種類常溫精液稀釋液對(duì)種公雞精子活率的影響研究表明谷氨酸鈉對(duì)精子有保護(hù)作用，在葡萄糖-磷酸鹽類雞精液稀釋液中，添加谷氨酸鈉優(yōu)于檸檬酸鈉，檸檬酸鈉又優(yōu)于氯化鉀；谷氨酸鈉在單獨(dú)配制稀釋液時(shí)以每100 mL 含 2.40～2.47 g 為宜[8-10]。王世銀等[11]研究表明，稀釋液中的糖類對(duì)精子質(zhì)膜有良好保護(hù)作用，能保證精液短期保存時(shí)精子活率及畸形率指標(biāo)優(yōu)良，而氯化鈉等無機(jī)鹽類對(duì)精子質(zhì)膜有較強(qiáng)的破壞作用。糖類和谷氨酸鈉具有提供能量及保護(hù)精子的作用[12]。金美林等[13]在精液稀釋液中添加Mg2+，維持了精子的活動(dòng)；李潔等[14]在精液稀釋液中添加Mg2+，結(jié)果顯示精液保存效果不佳。本實(shí)驗(yàn)顯示，含有蔗糖和卵黃的1 組稀釋液的精子活率最高，其次是2 組和4 組，3 組和5 組精子活率最低?？梢婋u精液稀釋液中的糖類、谷氨酸鈉等成分有利于精子的體外存活。

表3 不同種類常溫精液稀釋液對(duì)肉種雞、蛋種雞公雞精子畸形率的影響 %

3.2 不同種類常溫精液稀釋液對(duì)種公雞精子畸形率的影響 大量研究表明，畜禽精液稀釋液的組成及各組分的配比對(duì)精子形態(tài)會(huì)產(chǎn)生不同程度的影響。張兆旺等[9]將3 種糖（葡萄糖、蔗糖、果糖）、3 種有機(jī)鹽（檸檬酸鈉、檸檬酸鉀、谷氨酸鈉）、2 種無機(jī)鹽（氯化鈉、氯化鉀）共8 種物質(zhì)作為56 種稀釋液的溶質(zhì)作為稀釋液的溶質(zhì)，蔗糖和谷氨酸鈉液的精子畸形率只有5.29%和5.40 %。李潔等[14]研究表明，與未添加Mg2+稀釋液相比，精液稀釋液中添加Mg2+的公雞精液保存效果并未提高反而有所降低。本實(shí)驗(yàn)中，含有Mg2+的3 號(hào)稀釋液的畸形率評(píng)定指標(biāo)較差。張兆旺[10]研究表明，Na+可提高精子活動(dòng)的興奮性。王世銀等[11]采用果糖和谷氨酸鈉配制的稀釋液精子畸形率只有10.6%。張兆旺等[5]研究表明，母雞的輸卵管中分離出的一種谷氨酸鹽能延長(zhǎng)雞精子在體外的存活時(shí)間。Siudzinska 等[15]和Dourard 等[16]研究表明，利用精液稀釋液低溫保存雞和火雞精液24 h，精子畸形率都顯著增加。有研究表明，谷氨酸鈉對(duì)精子質(zhì)膜有良好的保護(hù)作用，可降低精子發(fā)生畸變的概率，提高受精率[11]。本實(shí)驗(yàn)配制含有Na+的4 種稀釋液中，肉種雞精液經(jīng)稀釋液2 稀釋后的精子畸形率最低，蛋雞精液則經(jīng)稀釋液1 稀釋后的精子畸形率最低，除Na+因素影響外，還可能與谷氨酸鈉有關(guān)。

4 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)中，1 組稀釋液（蔗糖11%、卵黃0.8%、蒸餾水88.2%）稀釋的肉種雞和蛋種雞精液，精子活率最高，1、2 組的精子畸形率最低?？梢?，1 組稀釋液的效果最好，其次是2 組（谷氨酸鈉2.4%、蒸餾水97.6%）。