郭 彤，田 錦，李凌燕，李曉晨

（1.北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院畜牧獸醫(yī)系，北京 102442；2.北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院食品與生物工程系，北京 102442；3.北京市大興區(qū)畜牧技術(shù)推廣站，北京 102601）

隨著畜牧業(yè)迅猛發(fā)展，畜禽產(chǎn)生的糞尿污染問題日趨嚴重，發(fā)酵床養(yǎng)豬模式應(yīng)運而生。發(fā)酵床養(yǎng)豬是利用微生物原位降解、消納豬糞尿的一種全新環(huán)保養(yǎng)豬模式[1]。與傳統(tǒng)水泥地面相比，發(fā)酵床養(yǎng)豬可明顯提高豬只的生長性能和豬舍環(huán)境[2-3]，但由于近幾年鋸末和稻殼的成本不斷上漲，一定程度上制約了發(fā)酵床的推廣使用。

我國是食用菌生產(chǎn)大國，菌糠是食用菌生產(chǎn)后的廢棄下腳料。研究表明，菌糠中含有豐富氨基酸、礦物質(zhì)元素及菌類多糖，粗蛋白質(zhì)含量較高，粗纖維含量較低，因而營養(yǎng)價值較高[4-5]。但目前將杏鮑菇菌糠作為發(fā)酵床墊料應(yīng)用于生長肥育豬上的研究未見報道。本試驗旨在研究杏鮑菇菌糠對生長肥育豬腸道菌群、部分血清生化指標及免疫功能的影響，以期為菌糠作為發(fā)酵床墊料、降低發(fā)酵床制作成本以及合理利用資源提供試驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 發(fā)酵床菌種（主要是乳酸桿菌和枯草芽孢桿菌）由北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院提供；稻殼和鋸末購自當?shù)厥袌觯恍吁U菇菌糠購自北京永長福生物科技有限公司。

1.2 試驗時間和地點 本試驗于2016 年3—6 月在北京市大興區(qū)某發(fā)酵床養(yǎng)豬場進行，預(yù)試期7 d，正試期90 d。

1.3 試驗設(shè)計及飼養(yǎng)管理 選擇90 頭體況良好、體重為（30.5±0.8）kg 的杜×長×大生長豬（公、母各半），隨機分為5 組，每組3 個重復(fù)，每個重復(fù)6 頭。分別飼養(yǎng)在不同墊料組合的發(fā)酵床上，其中對照組墊料為50 %鋸末+50 % 稻殼，100% 菌糠組墊料為100 % 杏鮑菇菌糠，70% 菌糠組墊料為15% 鋸末+15% 稻殼+70%杏鮑菇菌糠，50% 菌糠組墊料為25% 鋸末+25% 稻殼+50%杏鮑菇菌糠，30%菌糠組墊料為35%鋸末+35%稻殼+30%杏鮑菇菌糠。每組除墊料配比不同外，其他條件完全一致。采用玉米-豆粕型日糧。

試驗兼顧生長豬和育肥豬兩階段的營養(yǎng)需要，采用適中的飼糧組成和營養(yǎng)水平，基礎(chǔ)日糧參照美國NRC（1998）生長肥育豬的營養(yǎng)需要配制成粉狀全價料。日糧組成及主要營養(yǎng)成分見表1。每日記錄豬只采食、排糞、發(fā)病及異常情況。供試豬采取自由采食和自由飲水。發(fā)酵床日常管理見參考文獻[6]。

表1 生長肥育豬基礎(chǔ)日糧組成及主要營養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.5 樣品采集與保存

1.5.1 血液樣品的采集與保存 試驗結(jié)束后，所有供試豬前腔靜脈采血15 mL，室溫凝固后，3 000 r/min 離心30 min 制備血清，于-20℃保存，用于相關(guān)血清生化指標和免疫指標測定。采血前1 天20:00 禁食，使育肥豬空腹12 h。

1.6.2 腸道樣品的采集與保存 從每組每個重復(fù)中隨機選取體重相近的健康育肥豬各4 頭（公、母各半），4%戊巴比妥鈉麻醉后，進行屠宰取樣。嚴格按照無菌要求進行操作，在每頭育肥豬腸道相同部位用酒精棉球消毒各結(jié)扎口，立即結(jié)扎結(jié)腸和盲腸內(nèi)容物約2 g，混合均勻，放入消毒容器中，4℃保存。

1.6 測定指標及方法

1.7.1 腸道菌群的測定 腸道菌群采用平板計數(shù)法[7]測定，結(jié)果以對數(shù)形式表示 。

1.7.2 血清生化指標的測定 血清總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）均采用全自動生化分析儀（日立7600-020 型）測定。試劑盒均購自南京建成生物工程研究所，并按試劑盒說明書測定。

1.7.3 免疫功能的測定 血清中免疫球蛋白IgA、IgM、IgG 含量采用免疫透射比濁法測定，白介素-6（IL-6）采用豬的ELISA 試劑盒檢測，檢測方法依據(jù)試劑盒說明書進行。試劑盒購自上海亞太生物科技有限公司。

1.7 統(tǒng)計分析 采用SPSS 16.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進行單因素方差分析，組間差異顯著的用LSD 法進行多重比較，P＜0.05 為差異顯著。所有結(jié)果以平均值±標準差表示。

2 結(jié)果

2.1 發(fā)酵床墊料中使用不同比例菌糠對生長肥育豬腸道菌群的影響 從表2 可知，與對照組相比，100%、70%、50% 菌糠組大腸桿菌數(shù)分別降低了35.4%、24.0%、20.8%（P＜0.05），沙門氏菌數(shù)分別降低了29.4%、19.3%、15.2%（P＜0.05），乳酸桿菌數(shù)分別增加了21.7%、15.9%、12.2%（P＜0.05），雙歧桿菌數(shù)量分別增加了20.2%、16.7%、11.8%（P＜0.05）。30%菌糠組也有降低大腸桿菌和沙門氏菌數(shù)量、增加乳酸桿菌和雙歧桿菌數(shù)量的趨勢（P>0.05）。70%、50%菌糠組間各菌群數(shù)量差異不顯著；與70%、50%、30% 菌糠組相比，100%菌糠組組大腸桿菌和沙門氏菌數(shù)量顯著降低，乳酸桿菌和雙歧桿菌數(shù)量顯著提高。提示杏鮑菇菌糠可作為發(fā)酵床墊料，可以改善生長肥育豬腸道的微生態(tài)環(huán)境，促進有益菌的增殖，抑制有害菌的生長。

表2 發(fā)酵床墊料中添加不同比例的菌糠對生長肥育豬腸道菌群的影響 log CFU/g 腸內(nèi)容物

2.2 發(fā)酵床墊料中添加不同比例菌糠對生長肥育豬部分血清生化指標的影響 從表3 可知，與對照組相比，100%、70%、50%、30%菌糠組血清總蛋白的含量分別增加了30.6%、33.0%、28.0%、18.4%（P＜0.05），血清尿素氮含量分別降低了32.4%、34.5%、33.9%、22.0%（P＜0.05）；100%、70%、50%菌糠組與30%菌糠組血清總蛋白和尿素氮含量差異顯著，100%、70%、50%菌糠組血清總蛋白、血清白蛋白、尿素氮、谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量差異不顯著。各試驗組血清白蛋白、谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶的含量與對照組相比差異不顯著。

2.3 發(fā)酵床墊料中添加不同比例菌糠對生長肥育豬免疫功能的影響 由表4 可知，與對照組相比，4 個菌糠組血清中IgA、IgG、IgM、IL-6 含量均顯著提高；100%、70%菌糠組IgA、IgG、IgM、IL-6 含量顯著高于30% 菌糠組，50% 菌糠組IgA、IgG、IgM、IL-6 與30%菌糠組間差異均不顯著。

2.4 經(jīng)濟效益分析 從表5 可知，對照粗墊料成本最高，隨著菌糠比例降低，墊料及總成本支出逐漸降低；100%、70%、50%、30% 菌糠組分別比對照組節(jié)約了217、172、102、75 元/頭。

3 討 論

3.1 不同墊料配比對生長肥育豬腸道菌群的影響 動物的健康與動物腸道菌群平衡密切相關(guān)。正常情況下，動物腸道內(nèi)各種微生物區(qū)系之間保持著動態(tài)平衡，這對于機體消化吸收、阻止病原菌入侵和增強機體免疫功能等方面均有重要作用。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)[7]，不同比例杏鮑菇菌糠發(fā)酵床墊料能促進斷奶仔豬腸道有益菌的增殖。本試驗研究表明，添加100%、70%和50%菌糠組均能顯著降低生長肥育豬腸道中大腸桿菌、沙門氏菌數(shù)量，顯著增加乳酸桿菌、雙歧桿菌數(shù)量，可能是由于杏鮑菇菌糠中除含有大量的菌絲體蛋白、多糖、低聚糖等活性物質(zhì)[8]外，還含有豐富的礦物質(zhì)和維生素，而且菌糠有一種特殊的香味，隨著豬的拱食，將墊料中的杏鮑菇菌糠攝入體內(nèi)，這些營養(yǎng)物質(zhì)為雙歧桿菌和乳酸菌的增殖提供了良好的環(huán)境。由于細菌有占位效應(yīng)，隨著腸道有益菌數(shù)量的增加，有害菌不能再黏附到腸黏膜表面，因而大腸桿菌和沙門氏菌的數(shù)量減少。

表3 發(fā)酵床墊料中添加不同比例的菌糠對血清部分生化指標的影響

表4 發(fā)酵床墊料中添加不同比例的菌糠對生長肥育豬免疫功能的影響

表5 經(jīng)濟效益分析

3.2 不同墊料配比對部分血清生化指標的影響 血清總蛋白是多種蛋白質(zhì)的總稱，其含量高低與動物的代謝水平和免疫力有關(guān)[9]。血清尿素氮可反映動物體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝和日糧氨基酸平衡狀況，尿素氮含量越低則表明氮的利用效率越高[10]。本試驗結(jié)果表明，各試驗組血清總蛋白含量均顯著升高，尿素氮含量均顯著下降，可能是由于豬的拱食特性將杏鮑菇菌糠攝入體內(nèi)后，菌糠中含有的大量有益活菌可提高內(nèi)源消化酶的分泌和活力，從而提高了腸道黏膜對蛋白質(zhì)的消化吸收功能，因此提高了蛋白質(zhì)的利用率，但具體機理有待于進一步研究。谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶在蛋白質(zhì)代謝過程中起著十分重要的作用，其活性高低直接反映肝臟和心臟功能的受損程度[11]。轉(zhuǎn)氨酶活性升高表明豬只利用蛋白質(zhì)的能力下降，肝臟的正常功能受到損傷[12]。本研究表明，各試驗組與對照組相比，血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性差異不顯著，表明墊料中添加不同比例的杏鮑菇菌糠不會對生長肥育豬肝臟和心臟功能造成影響。提示杏鮑菇菌糠可以作為生長肥育豬的墊料不會影響豬只生長。

3.3 不同墊料配比對生長肥育豬免疫功能的影響 許多研究表明，發(fā)酵床養(yǎng)殖條件下或發(fā)酵床不同墊料配比，豬血清中IgA、IgG 濃度會顯著提高，豬只的免疫機能大大改善[13-14]。本研究結(jié)果表明，墊料中添加一定比例的杏鮑菇菌糠可使豬只血清中IgA、IgG、IgM 濃度升高，可能是由于菌糠中含有豐富的礦物質(zhì)元素、氨基酸、菌類多糖和其他活性物質(zhì)，可提高動物機體血清中IgA、IgG、IgM 濃度，進而增強豬只免疫功能。IL-6 可促進動物機體體液免疫和細胞免疫應(yīng)答，最終促進抗體的產(chǎn)生[15]。本試驗結(jié)果表明，各試驗組中IL-6 濃度均顯著高于對照組，這可能與杏鮑菇菌糠中含有的菌糠多糖在豬體內(nèi)起到了類似益生元的作用，從而使T、B 淋巴細胞在豬體內(nèi)數(shù)量升高[16]，因而使動物機體的免疫功能增強，但具體機理還有待于進一步研究。

4 結(jié) 論

發(fā)酵床墊料中添加不同比例的杏鮑菇菌糠，不但可以改善和調(diào)節(jié)豬只的腸道菌群，提高血清總蛋白含量，降低尿素氮含量，還能增強其免疫功能。本試驗結(jié)果提示，杏鮑菇菌糠可部分替代鋸末和稻殼廣泛應(yīng)用于發(fā)酵床養(yǎng)豬生產(chǎn)中，添加70% 杏鮑菇菌糠組是生長肥育豬最佳的墊料配比。