白云鳳 馬輝

(銀川市中醫(yī)醫(yī)院 銀川 寧夏 750001)

燥濕止帶合劑為我院治療濕熱帶下婦女帶下病有效方[1]，由延胡索、連翹等十味中藥組成，方中各藥配伍使用具有清熱解毒、燥濕止帶的功效。大孔樹(shù)脂是由許多微觀小球組成的多孔球狀聚合物,可廣泛用于中藥提取液的除雜和有效成分的富集[1]。由于原制劑為水煎劑，工藝僅為煎煮后濾過(guò)包裝，儲(chǔ)存過(guò)程中沉淀較多，影響了患者服藥的順應(yīng)性，為增加制劑穩(wěn)定性，在有效成分充分保留的前提下，以君藥指標(biāo)成分連翹苷轉(zhuǎn)移率為考察指標(biāo)，目前有文獻(xiàn)通過(guò)D101、AB-8樹(shù)脂進(jìn)行連翹藥材中連翹苷的富集純化研究報(bào)道[2-3]，尚無(wú)對(duì)多種樹(shù)脂應(yīng)用于連翹苷吸附特性進(jìn)行系統(tǒng)研究，本文以連翹苷轉(zhuǎn)移率為考察指標(biāo)，通過(guò)靜態(tài)吸附試驗(yàn)對(duì)六種不同型號(hào)大孔樹(shù)脂考察，優(yōu)選出最佳樹(shù)脂，通過(guò)正交試驗(yàn)對(duì)除雜工藝進(jìn)行研究與優(yōu)選，為消燥濕止帶合劑產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)提供依據(jù)。

1.儀器與材料

1.1 儀器

Agilent1100高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）；KQ-250型超聲波清洗器( 昆山市超聲儀器有限公司)；十萬(wàn)分子之一電子天平（METTTOLEDOXS205 ）。

1.2 試藥

連翹苷對(duì)照品 (中國(guó)藥品生物制品鑒定所，批號(hào)：110821-200609）；AB-8、HPD722、HPD500、HPD600、HP20、AB-8 型大孔樹(shù)脂（滄州寶恩吸附材料科技有限公司）；燥濕止帶合劑（自制）；乙腈（色譜純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；水（超純水）；其他試劑均為分析純。

2.方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

參照文獻(xiàn)[4]，采用HPLC測(cè)定。色譜柱：DiamonsilTM (鉆石)C18柱（4.6×250mm，5μm）；乙腈：甲醇（30∶70），檢測(cè)波長(zhǎng)：277nm，流速1.0ml/min，柱溫25℃；進(jìn)樣量10μL。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密稱取連翹苷對(duì)照品適量，用甲醇稀釋成質(zhì)量濃度為50、25、12.5、6.125、3.125、1.5625ug/mL，分別進(jìn)樣10 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以濃度（X）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為 Y＝40.3X+36.58(r＝0.9999）。結(jié)果表明，連翹苷在1.5625～50ug/mL濃度范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。分析方法的日內(nèi)、日間精密度RSD＜3%（n＝5），加樣回收率在99%～102%之間，均符合要求。

2.3 大孔樹(shù)脂型號(hào)的篩選

取已處理的6種型號(hào)樹(shù)脂，其中AB-8、HPD722弱極性樹(shù)脂；HPD500、HPD600極性樹(shù)脂；HP20、AB-8非極性樹(shù)脂各10g,放置于100ml錐形瓶中，加入消炎止帶合劑1ml，其中連翹苷含量為45.24ug/mL,計(jì)算各樹(shù)脂不同時(shí)間點(diǎn)下連翹苷吸附量、總吸附量及吸附率，見(jiàn)表1。

表1 6種樹(shù)脂對(duì)燥濕止帶合劑連翹苷的靜態(tài)吸附數(shù)值表

由表1靜態(tài)吸附結(jié)果顯示樹(shù)脂AB-8對(duì)燥濕止帶合劑中連翹苷有較強(qiáng)的親和力，故選擇AB-8應(yīng)用于消炎止帶合劑除雜工藝。

2.4 工藝參數(shù)考察與優(yōu)化

2.4.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)：根據(jù)靜態(tài)吸附試驗(yàn),優(yōu)選AB-8樹(shù)脂進(jìn)行試驗(yàn)，以上樣液濃度、大孔樹(shù)脂用量、乙醇洗脫劑濃度及洗脫劑用量為考察因數(shù)，以洗脫液中連翹苷回收率為考察進(jìn)行4因數(shù)3水平設(shè)計(jì)方案，見(jiàn)表2，正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。

表2 因數(shù)水平表

A-上樣液濃度(g/mL)；B-大孔樹(shù)脂用量；C-乙醇洗脫劑濃度（%）；

D-洗脫劑與上樣量(mL)比

表3 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

表4 方差分析

結(jié)果表明，以連翹苷回收率作為考察指標(biāo)，洗脫劑乙醇濃度對(duì)連翹苷回收率有顯著影響，從表4中可知：A2＞A1＞A3,B3＞B1＞B2,C3＞C2＞C1,D2＞D3＞D1，故最佳樹(shù)脂除雜工藝應(yīng)為A2B3C3D2，

3.討論

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果得知：通過(guò)對(duì)三類型極性差異的大孔樹(shù)脂進(jìn)行消炎止帶合劑除雜工藝的比較，大孔樹(shù)脂AB-8效果最佳，最優(yōu)化的大孔吸附樹(shù)脂的純化條件為：A2B3C3D即上樣量為1g/mL藥液，濕樹(shù)脂量(g)與上樣量(mL) 比為4∶1，洗脫劑乙醇濃度為60%，洗脫溶劑用量(mL) 與上樣量(mL) 比為8∶1。

消燥濕止帶合劑為水煎液，含有大量雜質(zhì)成分，嚴(yán)重影響成品質(zhì)量，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中同時(shí)比較了傳統(tǒng)醇沉法與絮凝劑殼聚糖除雜工藝的考察，結(jié)果顯示水煎液經(jīng)三種除雜工藝處理后，藥液在留樣觀察中沉淀物均大大減少，均能有較好的澄清度，考慮到傳統(tǒng)醇沉法與絮凝劑殼聚糖除雜在去除藥液中雜質(zhì)的同時(shí)，方劑中活性成分連翹苷的損失也較大，故推薦大孔樹(shù)脂進(jìn)行藥液除雜，考慮樹(shù)脂殘留為課題后續(xù)研究的重點(diǎn)與難點(diǎn)。