白云鳳 馬輝
(銀川市中醫(yī)醫(yī)院 銀川 寧夏 750001)
燥濕止帶合劑為我院治療濕熱帶下婦女帶下病有效方[1],由延胡索、連翹等十味中藥組成,方中各藥配伍使用具有清熱解毒、燥濕止帶的功效。大孔樹(shù)脂是由許多微觀小球組成的多孔球狀聚合物,可廣泛用于中藥提取液的除雜和有效成分的富集[1]。由于原制劑為水煎劑,工藝僅為煎煮后濾過(guò)包裝,儲(chǔ)存過(guò)程中沉淀較多,影響了患者服藥的順應(yīng)性,為增加制劑穩(wěn)定性,在有效成分充分保留的前提下,以君藥指標(biāo)成分連翹苷轉(zhuǎn)移率為考察指標(biāo),目前有文獻(xiàn)通過(guò)D101、AB-8樹(shù)脂進(jìn)行連翹藥材中連翹苷的富集純化研究報(bào)道[2-3],尚無(wú)對(duì)多種樹(shù)脂應(yīng)用于連翹苷吸附特性進(jìn)行系統(tǒng)研究,本文以連翹苷轉(zhuǎn)移率為考察指標(biāo),通過(guò)靜態(tài)吸附試驗(yàn)對(duì)六種不同型號(hào)大孔樹(shù)脂考察,優(yōu)選出最佳樹(shù)脂,通過(guò)正交試驗(yàn)對(duì)除雜工藝進(jìn)行研究與優(yōu)選,為消燥濕止帶合劑產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)提供依據(jù)。
Agilent1100高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫公司);KQ-250型超聲波清洗器( 昆山市超聲儀器有限公司);十萬(wàn)分子之一電子天平(METTTOLEDOXS205 )。
連翹苷對(duì)照品 (中國(guó)藥品生物制品鑒定所,批號(hào):110821-200609);AB-8、HPD722、HPD500、HPD600、HP20、AB-8 型大孔樹(shù)脂(滄州寶恩吸附材料科技有限公司);燥濕止帶合劑(自制);乙腈(色譜純,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);水(超純水);其他試劑均為分析純。
參照文獻(xiàn)[4],采用HPLC測(cè)定。色譜柱:DiamonsilTM (鉆石)C18柱(4.6×250mm,5μm);乙腈:甲醇(30∶70),檢測(cè)波長(zhǎng):277nm,流速1.0ml/min,柱溫25℃;進(jìn)樣量10μL。
精密稱取連翹苷對(duì)照品適量,用甲醇稀釋成質(zhì)量濃度為50、25、12.5、6.125、3.125、1.5625ug/mL,分別進(jìn)樣10 μL,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以濃度(X)為橫坐標(biāo),峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸,得回歸方程為 Y=40.3X+36.58(r=0.9999)。結(jié)果表明,連翹苷在1.5625~50ug/mL濃度范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。分析方法的日內(nèi)、日間精密度RSD<3%(n=5),加樣回收率在99%~102%之間,均符合要求。
取已處理的6種型號(hào)樹(shù)脂,其中AB-8、HPD722弱極性樹(shù)脂;HPD500、HPD600極性樹(shù)脂;HP20、AB-8非極性樹(shù)脂各10g,放置于100ml錐形瓶中,加入消炎止帶合劑1ml,其中連翹苷含量為45.24ug/mL,計(jì)算各樹(shù)脂不同時(shí)間點(diǎn)下連翹苷吸附量、總吸附量及吸附率,見(jiàn)表1。
表1 6種樹(shù)脂對(duì)燥濕止帶合劑連翹苷的靜態(tài)吸附數(shù)值表
由表1靜態(tài)吸附結(jié)果顯示樹(shù)脂AB-8對(duì)燥濕止帶合劑中連翹苷有較強(qiáng)的親和力,故選擇AB-8應(yīng)用于消炎止帶合劑除雜工藝。
2.4.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì):根據(jù)靜態(tài)吸附試驗(yàn),優(yōu)選AB-8樹(shù)脂進(jìn)行試驗(yàn),以上樣液濃度、大孔樹(shù)脂用量、乙醇洗脫劑濃度及洗脫劑用量為考察因數(shù),以洗脫液中連翹苷回收率為考察進(jìn)行4因數(shù)3水平設(shè)計(jì)方案,見(jiàn)表2,正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。
表2 因數(shù)水平表
A-上樣液濃度(g/mL);B-大孔樹(shù)脂用量;C-乙醇洗脫劑濃度(%);
D-洗脫劑與上樣量(mL)比
表3 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果
表4 方差分析
結(jié)果表明,以連翹苷回收率作為考察指標(biāo),洗脫劑乙醇濃度對(duì)連翹苷回收率有顯著影響,從表4中可知:A2>A1>A3,B3>B1>B2,C3>C2>C1,D2>D3>D1,故最佳樹(shù)脂除雜工藝應(yīng)為A2B3C3D2,
由實(shí)驗(yàn)結(jié)果得知:通過(guò)對(duì)三類型極性差異的大孔樹(shù)脂進(jìn)行消炎止帶合劑除雜工藝的比較,大孔樹(shù)脂AB-8效果最佳,最優(yōu)化的大孔吸附樹(shù)脂的純化條件為:A2B3C3D即上樣量為1g/mL藥液,濕樹(shù)脂量(g)與上樣量(mL) 比為4∶1,洗脫劑乙醇濃度為60%,洗脫溶劑用量(mL) 與上樣量(mL) 比為8∶1。
消燥濕止帶合劑為水煎液,含有大量雜質(zhì)成分,嚴(yán)重影響成品質(zhì)量,實(shí)驗(yàn)過(guò)程中同時(shí)比較了傳統(tǒng)醇沉法與絮凝劑殼聚糖除雜工藝的考察,結(jié)果顯示水煎液經(jīng)三種除雜工藝處理后,藥液在留樣觀察中沉淀物均大大減少,均能有較好的澄清度,考慮到傳統(tǒng)醇沉法與絮凝劑殼聚糖除雜在去除藥液中雜質(zhì)的同時(shí),方劑中活性成分連翹苷的損失也較大,故推薦大孔樹(shù)脂進(jìn)行藥液除雜,考慮樹(shù)脂殘留為課題后續(xù)研究的重點(diǎn)與難點(diǎn)。