鐘光芹 王小紅 顧愛玲

解放軍904醫(yī)院(無錫，214000)

研究發(fā)現(xiàn)，部分地區(qū)復(fù)發(fā)性流產(chǎn)發(fā)病率可超過596/萬[1]，在合并有陰道內(nèi)菌群失調(diào)或盆腔慢性炎癥性疾病的患者中發(fā)病率可進(jìn)一步上升[2]。復(fù)發(fā)性流產(chǎn)嚴(yán)重影響妊娠結(jié)局。在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)發(fā)病機(jī)理研究中發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞因子的改變能夠在疾病病情進(jìn)展過程中發(fā)揮作用。干擾素(IFN)不僅參與炎癥反應(yīng)過程，還能夠激活下游自然殺傷性T淋巴細(xì)胞，促進(jìn)其對胚囊的損害，促進(jìn)流產(chǎn)發(fā)生；白細(xì)胞介素-4(IL-4)能通過穩(wěn)定樹突狀T淋巴細(xì)胞的活性，降低胚囊的自身免疫性損傷[3]；白細(xì)胞介素-17(IL-17)能通過募集下游中性粒細(xì)胞，促進(jìn)子宮內(nèi)膜炎癥性損傷，加劇胚囊流產(chǎn)風(fēng)險[4]。為了揭示IFN、IL-4、IL-17的表達(dá)與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)關(guān)系，為預(yù)防流產(chǎn)或控制提供策略，本研究探討IFN、IL-4、IL-17的表達(dá)與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年6月—2018年7月本院治療的復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)患者(觀察組)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①男女雙方染色體正常，男方精液正常；②TORCH感染檢查、自身免疫抗體、封閉抗體均陰性；③年齡>18歲，孕周≤12周；④患者及家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①有生殖道感染或畸形；②內(nèi)分泌激素異常、惡性腫瘤、精神疾病、凝血功能異常等疾??；③母兒血型不合；④有抽煙、酗酒、吸毒等不良習(xí)慣。同時選取正常妊娠早孕孕婦作為對照組。

1.2 實驗方法

采用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測IFN、IL-4、IL-17。采用十字交叉方法測定抗原濃度，碳酸鹽緩沖液稀釋抗原，加入96孔酶標(biāo)板中，蓋蓋置4℃過夜，蒸餾水沖洗3次，每次5min，輕輕叩擊酶標(biāo)板甩干；每孔加入5%脫脂牛奶200μl，4℃過夜，蒸餾水沖洗3次，每次5min；加入稀釋好的抗體(購自Abcam公司，濃度1：800)，蒸餾水沖洗3次，每次5min，每孔中加入100μl的底物，顯色后酶標(biāo)儀上吸光度檢測。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 一般情況

觀察組100例，其中流產(chǎn)2次24例、3次43例，≥4次33例；年齡31.0±4.9歲，孕周8.9±1.0周。對照組100例，年齡30.1±5.2歲，孕周9.1±1.0周。兩組年齡及孕周比較無差異(t=1.298、-1.115，P=0.196、0.266)。

2.2 兩組血清激素比較

觀察組血清IFN和IL-17高于對照組(P<0.05)，IL-4低于對照組(P<0.05)，見表1。

2.3 觀察組不同流產(chǎn)次數(shù)者血清激素比較

觀察組不同流產(chǎn)次數(shù)者血清IFN、IL-4、IL-17比較未見差異(P>0.05)，見表2。

表1 兩組血清激素水平比較

表2 觀察組不同流產(chǎn)次數(shù)者血清激素水平比較

2.4 相關(guān)性分析

將觀察組血清IFN、IL-4、IL-17進(jìn)行相關(guān)分析顯示：IL-4與IFN、IL-17呈負(fù)相關(guān)(r=-0.373和-0.404，P<0.05)，IFN與IL-17呈正相關(guān)(r=0.419，P<0.05)，見圖1。

圖1 相關(guān)分析圖

3 討論

遺傳性因素、盆腔炎癥性損傷或者染色體異常，均能夠促進(jìn)復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的發(fā)生[5]。IFN是免疫應(yīng)答相關(guān)因子，其能夠通過募集下游CD4+T淋巴細(xì)胞或者CD8+T淋巴細(xì)胞，進(jìn)而誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜微環(huán)境的改變?；A(chǔ)研究認(rèn)為，IFNr的表達(dá)上升還能夠影響到自然殺傷性T淋巴細(xì)胞的活性，加深受精卵或胚囊細(xì)胞毒性損害程度。IL-4是免疫平衡相關(guān)因子，能夠通過改善th1/th2 T淋巴細(xì)胞免疫平衡，降低炎癥性免疫損傷，進(jìn)而降低流產(chǎn)發(fā)生風(fēng)險。IL-17是炎癥性損傷指標(biāo)，通過募集下游炎癥細(xì)胞如單核細(xì)胞激活，影響受精卵著床，導(dǎo)致胚囊種植子宮內(nèi)膜深度下降，促進(jìn)流產(chǎn)發(fā)生[6]。部分研究者探討了IFN，認(rèn)為復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者中IFNr表達(dá)上升[7-8]，但對IL-4、IL-17的分析研究不足。

本次研究發(fā)現(xiàn)，在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者中，IFNr、IL-17的表達(dá)上升，而IL-4表達(dá)下降，提示IFN、IL-4、IL-17均參與到復(fù)發(fā)性流產(chǎn)病情過程。這主要由于不同炎癥或免疫因子病理改變有關(guān)[9-12]：①IFN、IL-17表達(dá)上升，能夠通過誘導(dǎo)局部炎癥信號通路NF-KB的激活，加劇下游炎癥性因子如腫瘤壞死因子a的釋放，促進(jìn)胚囊的損害和流產(chǎn)的發(fā)生；②IL-4的下降失去了對th2 T淋巴細(xì)胞免疫平衡的穩(wěn)定作用，導(dǎo)致絨毛膜滋養(yǎng)細(xì)胞種植能力和分化能力下降，促進(jìn)流產(chǎn)發(fā)生。 李小英 等[13]研究發(fā)現(xiàn)，復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者外周血中IL-4表達(dá)平均下降45%，在流產(chǎn)次數(shù)較多或有流產(chǎn)家族史者中IL-4下降幅度更高。本文不同流產(chǎn)次數(shù)患者中，IFN、IL-4、IL-17的表達(dá)無差別，提示IFN、IL-4、IL-17的表達(dá)與流產(chǎn)數(shù)量并無直接關(guān)系。本文相關(guān)分析，IL-4與IFN、IL-17呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，而IFN與IL-17呈正相關(guān)關(guān)系，提示IFN、IL-4、IL-17在促進(jìn)復(fù)發(fā)性流產(chǎn)中可能具有一定協(xié)調(diào)作用， IL-4的表達(dá)通過影響細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)通路，進(jìn)而影響IFN、IL-17的表達(dá)，而IFN、IL-17可以相互激活，最終影響子宮內(nèi)膜免疫耐受，并促進(jìn)流產(chǎn)的發(fā)生。特別是IFN、IL-17對T或CD8+T淋巴細(xì)胞的協(xié)調(diào)激活作用，能夠加劇對絨毛膜滋養(yǎng)細(xì)胞的損傷，加劇滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡，最終促進(jìn)流產(chǎn)發(fā)生。

綜上所述，在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)外周血中，IL-4的表達(dá)下降， FN-、IL-17表達(dá)上升， IFN、IL-4、IL-17在促進(jìn)復(fù)發(fā)性流產(chǎn)過程中可能發(fā)揮了一定的協(xié)調(diào)作用。本次研究的局限性在于未探討IFN、IL-4、IL-17診斷復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的血清學(xué)價值，而本次研究的創(chuàng)新性在于探討了IFN、IL-4、IL-17的表達(dá)與流產(chǎn)次數(shù)的關(guān)系。