河南省焦作市第二人民醫(yī)院（454000）楊金玲

類風濕關節(jié)炎是一類以炎性滑膜炎為主的系統(tǒng)性疾病，具體病因還在研究中，目前未有較明確說法[1]。類風濕關節(jié)炎主要表現(xiàn)為手、足小關節(jié)的對稱性、多關節(jié)、侵襲性關節(jié)炎癥，普遍伴關節(jié)外器官受累以及血清類風濕因子陽性，如嚴重者可致使關節(jié)出現(xiàn)畸形或功能喪失[2]?；谙嚓P研究表明，自身免疫性疾病的產生不光和免疫系統(tǒng)接觸隱蔽抗原有關，免疫功能紊亂也是形成此項疾病的關鍵[3]。本文采用流式細胞儀對類風濕關節(jié)炎患者關節(jié)滑膜液淋巴細胞CD25、HLA-DR的表達特征進行分析，從而對類風濕關節(jié)炎發(fā)病機制行進一步認識，為類風濕關節(jié)炎臨床治療的開展提供一定依據(jù)，現(xiàn)行研究如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院收治的31例類風濕關節(jié)炎患者患者作為本次研究對象，所選31例患者均符合類風濕關節(jié)炎診斷標準。觀察組關節(jié)滑膜液取自我院骨科，行膝關節(jié)置換或滑膜切除。其中女性23例，男性8例，年齡在29～56歲，平均年齡（38.41±6.34）歲。對照組27例，所選人群關節(jié)滑膜液取自由于外傷行截肢的正常人，其中女性18例，男性9例，年齡在23～50歲，平均年齡（36.22±6.41）歲。對照組與觀察組兩組患者資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

附表 滑膜液淋巴細胞CD25、HLA-DR表達對比

1.2 方法 關節(jié)滑膜液淋巴細胞分離。選用20IU/ml肝素抗凝為關節(jié)滑膜液，3000r/min×10min離心，棄上清，在沉淀物中加入PBS重懸，制備淋巴細胞1500r/min×15min，選用淋巴細胞分離液（Ficoll）分離，將細胞的濃度調至1×106/ml，應用流式細胞儀檢測，6h內結束。

免疫熒光染色。在FALCON試管（出品公司：美國BD）內添加20μl異硫氰基熒光素（FITC）標記的抗CD19單抗、藻紅蛋白（PE）標記的抗HLA-DR單抗或抗CD25單抗、葉綠素蛋白（PerCP）標記的抗CD3單抗與三色同型對照免疫球蛋白，將其分別與100μl 1×106/ml細胞數(shù)的關節(jié)滑膜液行充分混勻，置于室溫暗處行15min反應，后加入0.5ml PBS，充分混勻，24h內上流式細胞儀行嚴密分析。

流式細胞分析。采用FACS Calibur流式細胞儀，開機后以CaliBRITE 3熒光微球與FACS Comp自動軟件對儀器靈敏度進行檢查，對實驗的獲取條件行自動設定，其中包括熒光補償以及光電倍增管（PMT）電壓等，接著以CellQuest軟件用樣本對實驗獲取條件行進一步優(yōu)化，并對各組樣本管進行檢測，獲取104個細胞，最后對各類CD分子在淋巴細胞中免疫熒光陽性細胞的百分率行CellQuest軟件分析。

1.3 觀察指標 觀察患者滑膜液淋巴細胞CD25、HLA-DR表達，其中包括T淋巴細胞（CD3+CD25+、CD3+HLA-DR+）與B淋巴細胞（CD19+CD25+、CD19+HLA-DR+）。

1.4 統(tǒng)計學分析 建立Excel數(shù)據(jù)庫對數(shù)據(jù)資料進行分析，分析軟件工具SPSS20.0，計量資料采用均數(shù)方差表示且用t檢驗，計數(shù)資料采用百分率表示且用X2檢驗，有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

2 結果

對觀察組與對照組兩組人群實行滑膜液淋巴細胞CD25、HLA-DR表達對比，具體分析見附表。兩組人群關節(jié)滑膜液表達CD25的B淋巴細胞與表達HLA-DR的T淋巴細胞、B淋巴細胞相比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

3 討論

類風濕關節(jié)炎是一類關節(jié)疾病，其具有慢性、反復發(fā)作等特點，目前發(fā)病機制不明確。從目前研究來看，普遍認為類風濕關節(jié)炎的多發(fā)性關節(jié)炎是由于類風濕因子所引發(fā)[4]。通過研究表明，類風濕關節(jié)炎和免疫功能紊亂有一定 聯(lián)系，在類風濕關節(jié)炎關節(jié)內與全身免疫反應過程中有許多復雜因子的參與[5]。CD25、HLA-DR細胞活化標志，在本實驗中，類風濕關節(jié)炎患者關節(jié)滑膜液表達CD25的B淋巴細胞與表達HLA-DR的T淋巴細胞和B淋巴細胞與對照組相比，出現(xiàn)明顯增多現(xiàn)象，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。其結果表明類風濕關節(jié)炎患者在關節(jié)滑膜液中發(fā)生活化T淋巴細胞、B淋巴細胞明顯增多特征。而免疫活性細胞的增多則表明了患者全身或局部免疫功能亢進。相關學者認為，活化T淋巴細胞在類風濕關節(jié)炎致病機制中有著重要作用，類風濕關節(jié)炎自身免疫反應的激發(fā)與延續(xù)是活化T淋巴細胞對樹突狀細胞、其他抗原細胞遞呈抗原多肽的自身反應造成[6]。B淋巴細胞會被激活動T淋巴細胞促使產生免疫球蛋白，依據(jù)接觸依賴性，非依賴性機制對單核細胞行側記，促使細胞因子的分泌，這在誘導關節(jié)炎癥狀中有著巨大的作用[7]?；罨腂淋巴細胞可產生自身抗體，同時又具備抗原遞呈功能，其在抗原濃度較低的二次免疫反應階段特別重要。淋巴細胞被激活普遍是由于協(xié)同刺激分子和與之相應配體的存在，其重要途徑為CD28和CD80/CD86分子之間的相互作用，有相關文獻報道，CD28和CD80/CD86分子不只是淋巴細胞活化的重要協(xié)同刺激信號，其在淋巴細胞亞群分化例里也有著十分重要的作用[8]。體內的細胞因子也能夠對亞群活化以及淋巴細胞行調節(jié)，研究表明，類風濕關節(jié)炎發(fā)病機制中，抗炎性的白細胞介素4（IL-4）對輔助性T淋巴細胞亞群的激活可以起到有效作用。所以在治療類風濕關節(jié)炎中，對細胞信號傳遞行改變，對促炎性細胞因子與抗炎性細胞因子的分泌維系平衡，阻斷淋巴細胞過度激活等，可以作為治療新思路。

綜上所述，在類風濕關節(jié)炎患者關節(jié)滑膜液淋巴細胞CD25、HLA-DR的表達特征分析中可以發(fā)現(xiàn)，關節(jié)滑膜液淋巴細胞CD25、HLA-DR的表達特征為增高，免疫機能亢進，同時基于研究與相關資料查詢表明，關節(jié)滑膜液淋巴細胞CD25、HLADR在類風濕關節(jié)炎患者發(fā)病機制中有重要作用。