鮑宇宏

摘 要：山杏（Prunus armeniaca） 是我國北方干旱山地丘陵區(qū)特有的經(jīng)濟林樹種，目前對山杏的研究主要集中在對山杏仁的研究，如杏仁中的苦杏仁苷、山杏揮發(fā)油、硒、不飽和脂肪酸和山杏蛋白等方面的研究，未見有對其磷脂類物質(zhì)提取及測定的研究。本研究以山杏內(nèi)種皮為原料，利用高效液相色譜法測定含量，以便為生產(chǎn)中測定山杏內(nèi)種皮磷脂類化合物提供技術(shù)依據(jù)，為山杏資源的充分開發(fā)利用提供參考。

關(guān)鍵詞：磷脂；高效液相色譜；山杏內(nèi)種皮

1.引言

1.1 山杏的介紹

杏，有文字記載的，首為《詩經(jīng)》，其把杏列為五果之首，即杏、李、桃、栗、棗。此外，《齊民要術(shù)》、《王楨農(nóng)書》、《黃帝內(nèi)經(jīng)素問》等書籍中都有對杏的記錄[1]。具記載，我國是整個杏屬植物的原生種的起源地。據(jù)介紹，全國各地約有 1500 多個品種[2]。我國山杏資源十分豐富，是我國北方重要的生態(tài)經(jīng)濟型樹種，主內(nèi)蒙古、北京、遼寧、山西、黑龍江、新疆、西藏等地區(qū)，多分布在半干旱、半濕潤的風(fēng)沙平原、山地和丘陵地區(qū)[3]。

山杏的營養(yǎng)價值較高，據(jù)分析，山杏果肉含蛋白質(zhì)、碳水化合、及多種維生素。此外，山杏果肉中還含有多種礦質(zhì)元素、胡蘿卜素、類黃酮、綠原酸以及焦性兒茶酸等活性物質(zhì)[4]廣泛用于食品、飲料、藥品生產(chǎn)上[5]。但是，目前山杏的開發(fā)主要集中在杏仁上，其他方面有待研究。

1.2 磷脂的概述

磷脂也稱磷脂類、磷脂質(zhì)，磷脂是細(xì)胞的組成成分，是指含有磷酸的脂類，屬于復(fù)合脂。磷脂在生命過程中起結(jié)構(gòu)形成和代謝作用，具有重要而廣泛的生理意義。磷脂主要存在于油料種子中，大部分存在于膠體相內(nèi)，并且廣泛分布在動植物體內(nèi)。

2.材料與方法

2.1 試驗材料與儀器

2.1.1 主要原料與試劑

主要原料和試劑有山杏內(nèi)種皮、甲醇、乙腈、磷脂酰甘油（PG）、磷脂酰乙醇胺（PE）、磷脂酰膽堿（PC）。

2.1.2 試驗儀器

主要儀器設(shè)備有電子天平、紫外-可見分光光度計、高效液相色譜儀。

3.高效液相色譜法測定磷脂類化合物

3.1 制備樣品

稱取樣品1.0000 g，加入正己烷-甲醇（1：1，體積比）試劑15 mL，超聲功率450 W，超聲提取50 min，放置至室溫，加正己烷-乙醇提取試劑補至原重，6 000 r/min離心10 min，取上清液用適量的0.75 %氯化鈉溶液萃取2次，收集有機相。將有機相旋轉(zhuǎn)濃縮至近干，用甲醇定容至10 mL。取樣品溶液1 mL，甲醇稀釋至10 mL，0.45 μm微孔濾膜過濾，待測。

3. 2檢測波長的選擇

波長掃描結(jié)果在201～210nm之間有一個最大吸收峰，為此，測定相同樣品在201～210nm范圍內(nèi)，在每個納米波長下測定其吸收度結(jié)果表明206nm處磷脂有最大吸收度。因此，選用206nm作為檢測波長。

3.3 流動相的選擇

試驗考察了流動相為甲醇、乙腈、甲醇-乙腈等不同流動相組成及比例下3種磷脂標(biāo)準(zhǔn)品的分離情況。流動相為100%甲醇或100%乙腈時，PG和PE保留時間相近，最終確定甲醇-乙腈（15：85，V/V）為流動相。

3.4 流速的選擇

試驗中選取流速分別為0.8mL/min、1.0mL/min及1.5mL/min，考察流速的不同對磷脂各組分的分離度、出峰時間及信號強度的影響。結(jié)果表明流速越小，出峰越慢，且峰型不好，分叉或跟有若干小峰，流速越大出峰時間越快，峰型越好，但PE、 PG與PC保留時間越接近。綜合考慮，確定流速為1.0 mL/min。

3.5最優(yōu)色譜條件

根據(jù)試驗結(jié)果，確定高效液相色譜法分析磷脂類化合物的最優(yōu)條件為：流動相為甲醇-乙腈（15：85，V/V），流速為1.0mL/min，由于柱溫對分離效果影響不大，最終選擇柱溫為35℃。

3. 6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別取磷脂標(biāo)準(zhǔn)品儲備液進(jìn)行稀釋，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積/106為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，三種磷酯標(biāo)準(zhǔn)品的線性方程及相關(guān)系數(shù)見表3-1。

3. 7 精密度試驗

將混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液按3.3色譜條件進(jìn)行測定，重復(fù)測定5次，三種磷脂化合物峰面積的RSD值分別為：PG：1.53%， PC：1.01%， PE：1.17%，表明儀器精密度良好。

3. 8 樣品測定結(jié)果

精密稱取一定量的山杏內(nèi)種皮樣品提取，在已優(yōu)化的色譜條件下測定，平行測定5次，其分析結(jié)果見表3-2。根據(jù)回歸方程計算山杏內(nèi)種皮PE含量為0.3934mg/g。

3.9穩(wěn)定性試驗

將樣品溶液按色譜條件每隔2h測定一次，重復(fù)5次，磷脂類化合物PE峰面積的RSD值為1.23%，說明樣品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定，結(jié)果見表3-3。

4.結(jié)論

本試驗以山杏內(nèi)種皮為原料，建立了高效液相色譜-紫外檢測器的分析方法。以高效液相色譜-紫外檢測器法分析山杏內(nèi)種皮中磷脂酰乙醇胺（PE）的含量，通過優(yōu)化色譜條件，建立標(biāo)準(zhǔn)品回歸方程，并考察試驗方法。確定液相色譜檢測條件為：AGILENT ZORBAX RX-SIL型硅膠柱，流動相為乙腈：甲醇（15：85，v/v），等度洗脫，流速為1mL/min，檢測波長為206nm，柱溫為35℃，進(jìn)樣量為20μL，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線測得山杏內(nèi)種皮中PE的含量為0.3934mg/g，與總磷脂含量相比，山杏內(nèi)種皮中應(yīng)該還有別的磷脂成分。

參考文獻(xiàn)：

[1]中華人民共和國藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1990，176.

[2]王煥華.中藥趣話[M].天津：百花文藝出版社，2006，214-218.

[3]畢武臣，劉志龍.論山杏的生物經(jīng)濟學(xué)特性及發(fā)展前景[J].防護(hù)林科技，2005，（5）：76-77.

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[6]曹棟，裘愛泳，王興國. 磷脂的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、功能及研究現(xiàn)狀（2）[J].糧食與油脂，2004（ 6） ： 13-16.