楊明月 馬紅艷 李秀清 孫杰 劉曉云

[摘要] 目的 檢測(cè)富AT序列結(jié)合蛋白2（SATB2）在原發(fā)性卵巢黏液性腫瘤和轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸黏液腺癌中的表達(dá)情況，分析SATB2表達(dá)對(duì)臨床病理診斷工作的意義。 方法 選取2010年1月～2017年6月河北省滄州市人民醫(yī)院收治的47例原發(fā)性卵巢黏液性腫瘤患者和48例轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸黏液腺癌患者的腫瘤組織及腹水樣本的石蠟標(biāo)本，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)石蠟標(biāo)本中SATB2、細(xì)胞角蛋白7（CK7）、細(xì)胞角蛋白20（CK20）、尾型同源框轉(zhuǎn)錄因子2（CDX2）的蛋白表達(dá)水平。對(duì)比分析SATB2、CK7、CK20、CDX2在腫瘤組織及腹水樣本中的表達(dá)情況，同時(shí)，分析SATB2聯(lián)合CK7、CK20、CDX2在判定腫瘤來源方面的敏感性、特異性。 結(jié)果 SATB2的表達(dá)與患者年齡、腫瘤直徑無關(guān)（P > 0.05），而與組織分化程度、病理分型、累及卵巢范圍與臨床分期有關(guān)（P < 0.05）。SATB2、CK7、CK20、CDX2的表達(dá)與卵巢黏液性腫瘤來源有關(guān)（P < 0.05）。SATB2聯(lián)合CK7在判定原發(fā)性卵巢黏液性腫瘤及轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸黏液腺癌來源的敏感性、特異性方面明顯高于CK20、CDX2。 結(jié)論 SATB2在鑒別腫瘤來源方面有特異性，對(duì)臨床病理診斷工作有應(yīng)用價(jià)值。

[關(guān)鍵詞] 富AT序列結(jié)合蛋白2;卵巢黏液性腫瘤;臨床病理診斷;腫瘤標(biāo)志物

[中圖分類號(hào)] R737.31? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-7210（2019）07（b）-0129-04

Expression and significance of SATB2 in ovarian mucinous tumors

YANG Mingyue? ?MA Hongyan? ?LI Xiuqing? ?SUN Jie? ?LIU Xiaoyun

Department of Pathology， Cangzhou People′s Hospital， Hebei Province， Cangzhou? ?061000， China

[Abstract] Objective To determine the expression of special AT-rich sequence binding protein 2 （SATB2） in primary ovarian mucinous carcinoma and metastatic ovarian mucinous adenocarcinoma from colon and rectum， and analyze its significance for clinicopathological diagnosis. Methods Forty-seven cases of patients with primary ovarian mucinous tumors and 48 cases of patients with metastatic ovarian mucinous adenocarcinoma from colon and rectum treated in Cangzhou People′s Hospital of Hebei Province from January 2010 to June 2017 was selected. The expression of SATB2， cytokeratin 7 （CK7）， cytokeratin 20 （CK20）， caudal-regulated homeobox transcription factor 2 （CDX2） in paraffin specimens of both tumor tissues and ascites was determined by the immunohistochemical method. The expression of SATB2， CK7， CK20 and CDX2 in tumor tissues and ascites was analyzed and compared. The sensitivity and specificity of SATB2 combined with CK7， CK20 and CDX2 for the diagnosis of the origin of ovarian mucinous tumors was analyzed. Results The expression of SATB2 was not related to patient′s age and tumor diameter （P > 0.05）， but related to the degree of tissue differentiation， pathological classification， ovarian involvement and clinical stage （P < 0.05）. The expression of SATB2， CK7， CK20 and CDX2 was related to the origin of ovarian mucinous tumors （P < 0.05）. The sensitivity and specificity of SATB2 combined with CK7 in determining the origin of primary ovarian mucinous tumors and metastatic colorectal mucinous adenocarcinoma were significantly higher than CK20 and CDX2. Conclusion SATB2 is specific in distinguishing tumor origin， it is valuable for clinical pathological diagnosis.

[Key words] Special AT-rich sequence binding protein 2; Ovarian mucinous tumor; Clinicopathological diagnosis; Tumor marker

卵巢黏液性腫瘤是婦科常見的腫瘤，傳統(tǒng)認(rèn)為發(fā)病高峰年齡為60周歲以上，但近年來發(fā)病年齡呈現(xiàn)年輕化趨勢(shì)[1]。卵巢黏液性腫瘤包括卵巢黏液性腺瘤、卵巢交界性黏液性腫瘤和卵巢黏液性腺癌，其中黏液性腺瘤與交界性黏液性腫瘤為良性或低度潛在惡性，黏液性腺癌為惡性腫瘤[2]。卵巢黏液性腫瘤來源眾多，可由卵巢原發(fā)，亦可由其他部位轉(zhuǎn)移而來，轉(zhuǎn)移性的卵巢黏液性腫瘤多為惡性腫瘤、晚期腫瘤，預(yù)后較差[3]，因此合理制訂臨床診療方案必須明確診斷卵巢黏液性腫瘤的來源。在諸多輔助診斷手段之中，免疫組化法由于其較高的敏感性和特異性，已成為目前臨床病理診斷不可或缺的技術(shù)手段之一[4]。本研究選取近期的研究熱點(diǎn)之一，富AT序列結(jié)合蛋白2（special AT-rich sequence binding protein 2，SATB2）作為主要研究對(duì)象，采用免疫組化法檢測(cè)腫瘤組織與腹水中SATB2、細(xì)胞角蛋白7（cytokeratin 7，CK7）、細(xì)胞角蛋白20（cytokeratin 20，CK20）、尾型同源框轉(zhuǎn)錄因子2（caudal-regulated homeobox transcription factor 2，CDX2），以探究患者腹水中SATB2的表達(dá)在卵巢黏液性腫瘤臨床病理診斷方面的作用與臨床應(yīng)用潛力。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取河北省滄州市人民醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱“我院”）病理科存檔蠟塊95例。標(biāo)本取自2010年1月～2017年6月我院收治的卵巢黏液性腫瘤患者，均經(jīng)病理科確診為卵巢黏液性腫瘤。患者年齡31～74歲，平均（57.31±11.09）歲;其中腫瘤最大直徑<10 cm者26例，≥10 cm者69例;原發(fā)性卵巢黏液性腫瘤47例（雙側(cè)黏液性腺瘤10例，交界性黏液性腫瘤22例，黏液性腺癌15例），轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸黏液腺癌48例（均為黏液性腺癌）;累及單側(cè)卵巢者24例，累及雙側(cè)者71例;臨床分期Ⅰ～Ⅱ期者33例，Ⅲ～Ⅳ期者62例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①腫瘤組織、腹水樣本的石蠟標(biāo)本保存完整、充分;②臨床病歷資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并慢性盆腔炎、子宮內(nèi)膜異位癥等其他影響生物學(xué)標(biāo)志物的疾病;②腫瘤組織中混合有畸胎瘤;③合并其他影響免疫組化結(jié)果的疾病;④術(shù)前經(jīng)放、化療等其他抗腫瘤手段治療。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及家屬知情同意。原發(fā)性卵巢黏液性腫瘤和轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸黏液腺癌患者一般情況比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），具有可比性。見表1。

1.2 方法

1.2.1 SP免疫組織化學(xué)法? 將石蠟標(biāo)本常規(guī)脫蠟、水化。PBS沖洗。加入枸櫞酸鹽緩沖溶液，高溫高壓20 min修復(fù)抗原。PBS沖洗。室溫孵育10 min，滴加一抗，4℃冷藏過夜孵育。取出放置至室溫，PBS沖洗，滴加生物素二抗，室溫孵育20 min。PBS沖洗，DAB染色，蘇木精復(fù)染，反藍(lán)。常規(guī)制片、封片。本研究一抗分別為兔SATB2多克隆抗體、鼠抗人CK7多克隆抗體、兔抗人CK20多克隆抗體、兔抗人CDX2單克隆抗體，均購(gòu)自上海煊翎生物科技有限公司。

1.2.2 結(jié)果判定? 本研究由經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)師以雙盲法在鏡下進(jìn)行觀察判定，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。SATB2蛋白染色定位于細(xì)胞核，CK7蛋白、CK20蛋白定位于細(xì)胞質(zhì)，CDX2蛋白陽(yáng)性則可見細(xì)胞質(zhì)/核均染色，出現(xiàn)棕黃色至褐色顆粒視為陽(yáng)性。隨機(jī)取400倍光學(xué)顯微鏡下5個(gè)視野，每個(gè)視野至少含有50個(gè)細(xì)胞，計(jì)算所有觀察細(xì)胞中陽(yáng)性染色細(xì)胞所占百分比，結(jié)果取所有百分比的算術(shù)平均數(shù)。當(dāng)陽(yáng)性細(xì)胞率≥5%時(shí)，視為陽(yáng)性（+）表達(dá)，<5%時(shí)，視為陰性（-）表達(dá)。敏感性=真陽(yáng)性/（真陽(yáng)性+假陰性）×100%;特異性=真陰性/（真陰性+假陽(yáng)性）×100%。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用軟件SPSS 22.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SATB2在卵巢黏液性腫瘤患者腹水、腫瘤組織中的表達(dá)

免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，來源于同一患者的卵巢黏液性腫瘤組織、腹水樣本中SATB2的表達(dá)結(jié)果判定相同。見圖1（封四）。SATB2的表達(dá)與患者年齡、腫瘤直徑無關(guān)（P > 0.05），而與組織分化程度、病理分型、累及卵巢范圍與臨床分期有關(guān)（P < 0.05）。見表2。

2.2 卵巢黏液性腫瘤組織及腹水樣本中SATB2、CK7、CK20、CDX2的表達(dá)

免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，來源于同一患者的卵巢黏液性腫瘤組織、腹水樣本中CK7、CK20、CDX2的表達(dá)結(jié)果判定相同。見圖2（封四）。SATB2、CK7、CK20、CDX2的表達(dá)與卵巢黏液性腫瘤來源有關(guān)（P < 0.05）。見表3。

SATB2聯(lián)合CK7在判定原發(fā)性卵巢黏液性腫瘤及轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸黏液腺癌來源的敏感性、特異性方面，明顯高于CK20、CDX2。見表4。

3 討論

原發(fā)性卵巢黏液性腫瘤與卵巢轉(zhuǎn)移性腺癌組織形態(tài)學(xué)上十分相似，病理醫(yī)師甚至在組織學(xué)檢查后仍將轉(zhuǎn)移瘤誤診為卵巢原發(fā)性腫瘤，這為臨床的鑒別診斷帶來巨大困難[5-6]，已成為婦科病理診斷的難點(diǎn)之一。明確卵巢黏液性腫瘤的來源，對(duì)于臨床診療工作具有多方重要意義：原發(fā)性卵巢黏液性腫瘤患者，包括良性黏液性腺瘤、交界性黏液性腫瘤與局限于卵巢的早期黏液性腺癌，經(jīng)手術(shù)治療后預(yù)后良好，不需要輔以放、化療等其他抗腫瘤手段治療，術(shù)后5年總生存率達(dá)90%以上[7-9];與此相反，卵巢轉(zhuǎn)移性腺癌患者預(yù)后較差，往往需要聯(lián)合其他抗腫瘤手段[10]，因而目前對(duì)于原發(fā)性卵巢黏液性腫瘤與卵巢轉(zhuǎn)移性腺癌患者的治療方案并不相同。因此為促進(jìn)臨床上合理制訂診療方案，以改善患者預(yù)后，提高患者生活質(zhì)量，尋找操作簡(jiǎn)便、特異性高的鑒別診斷手段是當(dāng)務(wù)之急。

免疫組織化學(xué)法是一種利用特異性的抗原-抗體結(jié)合反應(yīng)來定位和檢測(cè)樣本中特定物質(zhì)的一種技術(shù)手段，近年來隨著技術(shù)的不斷發(fā)展，在臨床診斷中被越來越廣泛的應(yīng)用。卵巢黏液性腫瘤的經(jīng)典免疫組織化學(xué)法一般包括CK7、CK20和CDX2[11-12]。盡管這一聯(lián)合檢測(cè)方案迄今已得到許多研究[13-14]的支持，但其敏感性與特異性仍未達(dá)到理想狀態(tài)，尤其在鑒別診斷卵巢轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸腺癌時(shí)[15]。同時(shí)，腫瘤組織的獲取難度較大，費(fèi)用較高，易給患者造成較大的痛苦，不利于臨床推廣。

SATB2是一種核基質(zhì)結(jié)合蛋白，作為轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，其對(duì)基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控可能通過改變?nèi)旧|(zhì)構(gòu)象而實(shí)現(xiàn)[16]。近年來的研究顯示，SATB2的異常表達(dá)可能與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展密切相關(guān)。SATB2在口腔鱗癌中高表達(dá)[17];而在非小細(xì)胞肺癌中則低表達(dá)[18]。Seong等[19]發(fā)現(xiàn)，SATB2在骨肉瘤中起促進(jìn)癌細(xì)胞侵襲與轉(zhuǎn)移的作用。更為重要的是，SATB2在下消化道的表達(dá)呈現(xiàn)高豐度[20]，因此推測(cè)SATB2可以作為結(jié)直腸原發(fā)灶的免疫標(biāo)志物。

本研究結(jié)果顯示，SATB2的表達(dá)情況與卵巢黏液性腫瘤的組織分化程度、病理分型、累及卵巢范圍與臨床分期有關(guān)，且在原發(fā)性卵巢黏液性腫瘤與卵巢轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸腺癌中的表達(dá)差異顯著，因此SATB2可能參與了卵巢黏液性腫瘤的發(fā)生與惡性發(fā)展過程。而SATB2在黏液性癌腫瘤組織與腹水中陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于其余類型，因此可以推測(cè)SATB2在卵巢黏液性腫瘤中的作用與Seong等[19]發(fā)現(xiàn)的骨肉瘤類似，即促進(jìn)腫瘤的惡性進(jìn)展過程。

通過與經(jīng)典免疫指標(biāo)對(duì)比，本研究發(fā)現(xiàn)將SATB2加入免疫組織化學(xué)法檢測(cè)的對(duì)象中，能夠顯著提高鑒別卵巢黏液性腫瘤來源的敏感性與特異性。SATB2表達(dá)陽(yáng)性，提示腫瘤很可能為結(jié)直腸來源，若與其他指標(biāo)結(jié)合檢測(cè)，則能將敏感性與特異性進(jìn)一步提升，與Dragomir等[21]和何興狀等[22]的臨床前瞻性研究結(jié)果相同。因而增加SATB2作為檢測(cè)卵巢黏液性腫瘤來源的免疫指標(biāo)很有價(jià)值。同時(shí)，本研究結(jié)果中原發(fā)性卵巢黏液性腫瘤中僅有1例呈SATB2蛋白表達(dá)陽(yáng)性，回顧該患者影像學(xué)資料發(fā)現(xiàn)，該患者腫瘤組織中清晰可見成熟畸胎瘤成分，因此可以推測(cè)，當(dāng)不見成熟畸胎瘤成分時(shí)，SATB2蛋白表達(dá)陽(yáng)性的腫瘤不可能來源于卵巢。

更為重要的是，通過對(duì)比來源于同一患者的腫瘤組織與腹水的檢測(cè)結(jié)果，本研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤組織與腹水的免疫組織化學(xué)顯色類似，結(jié)果判定相同，因此可以用腹水的免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果替代腫瘤組織的檢測(cè)結(jié)果。相較于腫瘤組織，腹水獲取方便，能夠有效避免不必要的二次手術(shù)，是更易施行的檢測(cè)手段。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)，SATB2可能參與了卵巢黏液性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展，且在腹水與腫瘤組織中的免疫組化結(jié)果判定相同。將檢測(cè)患者腹水中SATB2的表達(dá)情況加入經(jīng)典免疫組化檢測(cè)方案，有助于提高卵巢黏液性腫瘤來源鑒別診斷的敏感性與特異性，因此聯(lián)合檢測(cè)SATB2有臨床應(yīng)用價(jià)值。

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