林 娟，關(guān)紅瓊，王洪偉

(海南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，海南東方 570311)

流產(chǎn)是指產(chǎn)婦妊娠后在孕周不超過28周、且胎兒不超過1kg的條件下發(fā)生的終止妊娠行為[1]。而流產(chǎn)分為很多種，例如早期流產(chǎn)、晚期流產(chǎn)、自然流產(chǎn)還有人工流產(chǎn)等，而稽留流產(chǎn)是指胚胎或者胎兒已經(jīng)死亡而仍稽留于宮腔內(nèi)，正常情況下一般多在癥狀產(chǎn)生后1～2個(gè)月內(nèi)將會(huì)排出的孕產(chǎn)物在停止發(fā)育后2個(gè)月尚未自然排出的情況，稽留流產(chǎn)又稱為過期流產(chǎn)或死胎不下[2-3]。稽留流產(chǎn)是產(chǎn)婦在早期最為常見的并發(fā)癥之一，其發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，臨床上對(duì)此并未有明確的研究進(jìn)展以及有效的防治方法[4]。但是其近年來發(fā)病率不斷高漲的同時(shí)，也導(dǎo)致產(chǎn)婦再次發(fā)生妊娠時(shí)增加其流產(chǎn)概率，嚴(yán)重地影響到了產(chǎn)婦以及產(chǎn)婦家屬的身心健康[5]?；谝陨纤銮闆r，本實(shí)驗(yàn)以40例稽留流產(chǎn)產(chǎn)婦與45例健康產(chǎn)婦作為研究對(duì)象，探討腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白8樣分子2(TIPE2)在稽留流產(chǎn)患者血清、絨毛與蛻膜組織中的表達(dá)及臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 將2015年9月至2018年4月在本院婦產(chǎn)科就診并經(jīng)過臨床診斷的40例稽留流產(chǎn)產(chǎn)婦納入觀察組；另外，將同期在本院行產(chǎn)檢的45例健康產(chǎn)婦納入對(duì)照組。對(duì)照組：年齡20～38歲，體質(zhì)量48～80 kg，孕次1～4次，孕周9～21周。觀察組：年齡19～38歲，體質(zhì)量46～79 kg，孕次1～4次，孕周39～43周。兩組產(chǎn)婦年齡、體質(zhì)量、產(chǎn)婦類型、孕次、孕周等比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性，見表1。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合的稽留流產(chǎn)診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]的產(chǎn)婦；(2)知情同意并簽署自愿參與本次研究相關(guān)文件。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)椎管有畸形、背部皮膚感染或者有外傷史的產(chǎn)婦；(2)有妊娠并發(fā)心臟病、藥物過敏的產(chǎn)婦；(3)有胎盤早剝、前置胎盤、胎兒窘迫等的產(chǎn)婦；(4)有陰道分娩禁忌證和麻醉禁忌證的產(chǎn)婦。

表1 對(duì)照組和觀察組產(chǎn)婦一般資料比較

1.2方法

1.2.1血清、絨毛以及蛻膜組織中各臨床指標(biāo)的測(cè)定 (1)所有受試者均保證清晨空腹，次日早晨約8:00時(shí)抽取肘靜脈5 mL血液，采用硝酸還原酶法以及酶聯(lián)免疫吸附雙抗體夾心法測(cè)定受試者的超氧化物歧化酶(SOD)、轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)、腺苷脫氨酶(ADA)以及誘導(dǎo)型-氧化氫合酶(iNOS)等生化指標(biāo)。(2)采集受試者的絨毛以及蛻膜組織，裝入1.5 mL EP管中，并加入500～1 000 μL 的無液氮型樣品RNA保存液(RNAfixer)，做好相應(yīng)標(biāo)記，置于-80 ℃保存。立刻用 DEPC水沖洗，迅速投入液氮，然后保存于-80 ℃低溫水箱中。采用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR檢測(cè)兩組絨毛、蛻膜組織中SOD、NF-κB、ADA以及iNOS等指標(biāo)mRNA水平，根據(jù)2-ΔΔCT法，得出目的基因的量等于2-ΔΔCT的值[7-8]。

1.2.2血清、絨毛以及蛻膜組織中TIPE2表達(dá)量的測(cè)定 (1)各抽取兩管血清、絨毛及蛻膜組織血置于3.2%枸櫞酸鈉1:9真空抗凝管中放入離心機(jī)，在4 ℃、4 000 r/min下離心15 min后放入空試管中；(2)用TRlzol試劑將miR從血漿中分離；(3)將提取的TIPE2使用miR c DNA第一鏈合成試劑反轉(zhuǎn)錄成單鏈c DNA；(4)應(yīng)用SYBR Green實(shí)時(shí)熒光技術(shù)定量檢測(cè)血清、絨毛及蛻膜組織中TIPE2的表達(dá)量[9]。

2 結(jié)果

2.1比較兩組血清中 TIPE2及各生化指標(biāo)的表達(dá) 兩組受試者血清ADA水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，病例組患者血清TIPE2、SOD、NF-κB及iNOS水平明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，病例組患者血清SOD水平明顯低于對(duì)照組(P<0.05)，見表2。

2.2比較兩組絨毛組織中 TIPE2及各指標(biāo)的mRNA表達(dá) 兩組受試者絨毛組織中ADA mRNA表達(dá)水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，病例組患者絨毛組織中的 TIPE2、NF-κB及iNOS mRNA表達(dá)明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，病例組患者絨毛組織中的 SOD mRNA水平明顯低于對(duì)照組(P<0.05)，見表3。

2.3兩組蛻膜組織中TIPE2及各指標(biāo)mRNA表達(dá)水平的比較 兩組受試者蛻膜組織中ADA表達(dá)水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，病例組患者蛻膜組織中TIPE2、SOD、NF-κB及iNOS的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，病例組患者蛻膜組織中SOD的表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組，見表4。

2.4病例組TIPE2與各項(xiàng)生化指標(biāo)的相關(guān)性分析 在病例組中，血清、絨毛及蛻膜組織中TIPE2與TIPE2、NF-κB及iNOS表達(dá)均呈正相關(guān)，血清、絨毛及蛻膜組織中TIPE2與SOD表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，與年齡之間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表5。

表2 兩組血清TIPE2及各生化指標(biāo)水平的比較

表3 兩組絨毛組織中 TIPE2及各指標(biāo)mRNA表達(dá)水平比較

表4 兩組蛻膜組織中TIPE2及各指標(biāo)的mRNA表達(dá)比較

表5 病例組TIPE2與各項(xiàng)生化指標(biāo)的相關(guān)性分析

3 討論

臨床上導(dǎo)致稽留流產(chǎn)發(fā)生的原因有很多種，例如胎兒染色體的異常、產(chǎn)婦生殖器官的感染、產(chǎn)婦內(nèi)分泌系統(tǒng)的紊亂及解剖異常等各個(gè)方面的問題，同時(shí)還有許多的機(jī)制尚未明確[10]?；袅鳟a(chǎn)對(duì)產(chǎn)婦及家屬造成的影響至關(guān)重要，尤其是對(duì)產(chǎn)婦的身心造成了巨大的傷害，同時(shí)也增加了整個(gè)家庭在心理及經(jīng)濟(jì)等各個(gè)方面的負(fù)擔(dān)[11-12]?；袅鳟a(chǎn)在作為婦產(chǎn)科常見病的同時(shí)，其發(fā)病機(jī)制及病因尚無法闡明，因此在治療及防治該病方面尚無很好的針對(duì)性和有效的措施[13]。

本次實(shí)驗(yàn)采用硝酸還原酶法及酶聯(lián)免疫吸附雙抗體夾心法測(cè)定受試者血清中的SOD、NF-κB、ADA及iNOS等生化指標(biāo)，并且采用免疫組化SP法染色并記錄絨毛及蛻膜組織的SOD、NF-κB、ADA及iNOS等生化指標(biāo)水平。應(yīng)用SYBR Green實(shí)時(shí)熒光技術(shù)定量檢測(cè)血清、絨毛及蛻膜組織中TIPE2表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示兩組受試者血清、絨毛及蛻膜組織中ADA表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；病例組患者血清、絨毛及蛻膜組織中的TIPE2、NF-κB及iNOS表達(dá)明顯高于對(duì)照組，病例組患者絨毛組織中的 SOD水平明顯低于對(duì)照組。其原因可能是因?yàn)門IPE2在正常的妊娠期產(chǎn)婦的體內(nèi)均存在著表達(dá)，起作用主要在于定位絨毛膜細(xì)胞中的滋養(yǎng)細(xì)胞及合成滋養(yǎng)細(xì)胞，而其表達(dá)量隨著產(chǎn)婦妊娠周期的增加而不斷升高，并且通常在在產(chǎn)婦孕周期的第10周達(dá)到最高值，而后急劇下降[14-15]。而稽留流產(chǎn)的產(chǎn)婦由于各個(gè)方面的問題導(dǎo)致其TIPE2表達(dá)量在不斷升高的同時(shí)，不增下降，從而導(dǎo)致滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲力不斷地降低，加速導(dǎo)致了稽留流產(chǎn)的發(fā)生[16]。

而在進(jìn)行比較的同時(shí)，采用相關(guān)性分析方法探討病例組 TIPE2與各項(xiàng)生化指標(biāo)的相關(guān)性。結(jié)果顯示，在病例組中，血清、絨毛及蛻膜組織中TIPE2與TIPE2、NF-κB及iNOS表達(dá)均呈正相關(guān)，血清、絨毛及蛻膜組織中TIPE2與SOD表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，與年齡無相關(guān)性。從上述結(jié)果中可以推斷TIPE2表達(dá)量過高極有可能與稽留流產(chǎn)的發(fā)生相關(guān)，可能是TIPE2介導(dǎo)的某些特殊的細(xì)胞發(fā)生了黏附或者連接，并且通過一系列的作用機(jī)制或者調(diào)節(jié)機(jī)制使得滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲浸潤能力不斷地下降[17]。而上述效應(yīng)使得胎盤在形成過程中動(dòng)脈形態(tài)不良及血管重塑受阻，導(dǎo)致產(chǎn)婦無法形成有效的胎盤血管網(wǎng)、胎盤著床淺，致使胚胎停止了生長發(fā)育等進(jìn)而導(dǎo)致了各種妊娠失敗的結(jié)局[18-19]。

綜上所述，稽留流產(chǎn)可能與產(chǎn)婦血清、絨毛與蛻膜組織中TIPE2表達(dá)水平的升高相關(guān)，與TIPE2、NF-κB及iNOS表達(dá)均呈正相關(guān)，與SOD表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。