肖正俊，阿良，李洪秋，鄧純博

（沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬中心醫(yī)院 骨外2 科，遼寧 沈陽(yáng) 110024）

目前，國(guó)內(nèi)外有三種方法治療骨缺損[1，2]，具體如下：⑴自體骨移植、異體骨移植和異種骨移植。但自體移植存在供區(qū)來源有限，且對(duì)供區(qū)造成損傷，給患者帶來一定的痛苦；異體和異種骨移植會(huì)引起免疫排斥反應(yīng)和傳播疾病等并發(fā)癥；⑵骨延長(zhǎng)術(shù)[3-5]在延長(zhǎng)骨的同時(shí)也有利于缺損軟組織的修復(fù)，顯示了其在治療創(chuàng)傷性復(fù)雜骨缺損的優(yōu)越性。治療周期長(zhǎng)，患者活動(dòng)不便，可能發(fā)生針道感染、松動(dòng)及斷裂等是該項(xiàng)技術(shù)的主要不足；⑶誘導(dǎo)膜技術(shù)（Masquelet 技術(shù)）[6-8]為大段骨缺損治療帶來了新的曙光，其存在治療周期長(zhǎng)和二次手術(shù)的缺點(diǎn)。我們擬定利用羊膜構(gòu)建組織工程骨膜，體外檢測(cè)其可行性。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及材料

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：成年家兔2 只，用于分離培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和建立家兔大段骨缺損研究模型，沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬中心醫(yī)院實(shí)驗(yàn)中心提供。健康人羊膜：由沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬中心醫(yī)院產(chǎn)科提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)器材

冷凍干燥機(jī)（英國(guó)LANCD 型號(hào)）；純水機(jī)（法國(guó)Millipore）；Ph 計(jì)（美國(guó) Orion）；超低溫冰箱（日本SANYO）；微量移液槍（美國(guó) Sigma）；水浴箱（中國(guó)蘇州柏西瓦爾）；培養(yǎng)板（美國(guó)Costar）；臺(tái)式離心機(jī)（美國(guó)Sigma）；漩渦振蕩器（中國(guó)北京優(yōu)晟）；超凈工作臺(tái)（中國(guó)上海祺享智能科技有限公司）；電子天秤（中國(guó)北京西杰）；照相顯微鏡（日本Olympus）；倒置顯微鏡（日本Olympus）；CO2培養(yǎng)箱（美國(guó)Thermo Forma）；掃描電鏡（SEM）（荷蘭 QUANTA200 Philips）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 家兔的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及傳代

首先在無菌條件下應(yīng)用剪刀和鑷子分離出家兔的脛骨，去除肌肉等軟組織，用5 mL 注射器抽取培養(yǎng)基沖洗骨髓，制成單細(xì)胞懸液。調(diào)節(jié)離心機(jī)每分鐘1 200 轉(zhuǎn)持續(xù)5 min 后，棄上清液。選取含有L-DMEM及10%FBS 混合懸細(xì)胞，接種到25 cm2的培養(yǎng)瓶中，溫度為37℃、含5%CO2的培養(yǎng)箱中，間隔2～3 d 更換培養(yǎng)液，于倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及附壁情況，4～6 d 細(xì)胞80%～90%相融合。細(xì)胞傳代時(shí)，倒棄培養(yǎng)液，PBS 緩沖液清洗3 次，加入0.1%EDTA-Na2與0.25%胰酶消化液約2 mL，用力均勻搖動(dòng)培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞表面均有消化液漫過，2～4 min 后，鏡下觀察細(xì)胞變形回縮，棄消化液，滴入血清培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打附于細(xì)胞的管壁，細(xì)胞懸液就此形成。根據(jù)計(jì)數(shù)板上計(jì)出細(xì)胞數(shù)的多少，將細(xì)胞懸液按 1∶2.5 用含 L-DMEM 及 10% FBS 稀釋至4～6 mL，接種到25 cm2的培養(yǎng)瓶中，并置于溫度為37℃、含5%CO2的培養(yǎng)箱中，進(jìn)行傳代培養(yǎng)并于顯微鏡下觀察，重復(fù)上述方法并傳至第三代家兔的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞[9]。

1.3.2 家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨誘導(dǎo)分化鑒定

取第三代家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞約2～3×104個(gè)細(xì)胞/孔密度接種在6 空板血蓋片中，H-DMEM 完全培養(yǎng)基24 h 后換作成骨誘導(dǎo)液，每2～4 天換液一次，第4 周行鈣結(jié)節(jié)茜素紅染色。用PBS 緩沖液沖洗2～3 次，75%乙醇固定12 min，雙蒸水沖洗4 次；0.1%茜素紅Tris-HCL37℃，30 min；蒸餾水沖洗、干燥、快干膠封片[10]，顯微鏡下觀察并采圖。

1.3.3 人脫細(xì)胞羊膜的取材、處理及保存方法

⑴人脫細(xì)胞羊膜的取材與處理[11]：胎盤與胎兒分離后立即取胎盤置于無菌盒中，無菌條件下用生理鹽水沖洗凈胎盤上的血凝塊，通過羊膜與絨毛膜間的潛在間隙鈍性分離獲取羊膜，用無菌PBS 緩沖液洗凈羊膜殘留組織與血塊等雜質(zhì)，抗生素生理鹽水（含慶大霉素1 000u/mL、兩性霉素B 2.5 μg/mL）浸泡 20 min，0.25%胰酶消化 24 h，PBS 緩沖液沖洗 4～5 次。將人脫細(xì)胞羊膜平鋪于無菌濾紙片上，上皮面朝上，剪成20 mm×20 mm 小塊，隨機(jī)分成三組備用。

⑵人脫細(xì)胞羊膜的保存方法[12]：將人脫細(xì)胞羊膜連同濾紙片按下述方法保存，使用前用無菌PBS緩沖液浸泡15 min。

方法一：Hank’s 平衡鹽/ 甘油溶液深低溫保存：將人脫細(xì)胞羊膜片放入裝有4 mL 滅菌Hank’s平衡鹽/甘油溶液(Hank’s 平衡鹽溶液與甘油體積比為3∶1)的中性硅玻璃瓶中，封閉瓶口，-80℃環(huán)境保存，使用前室溫自然解凍。此方法保存人脫細(xì)胞羊膜6 個(gè)月時(shí)細(xì)胞基本完整和連續(xù)。

方法二：純甘油4℃保存：將人脫細(xì)胞羊膜片放入裝有4 mL 滅菌純甘油的中性硅玻璃瓶中，封閉瓶口，4℃冰箱保存。此方法保存人脫細(xì)胞羊膜3 個(gè)月時(shí)細(xì)胞就出現(xiàn)嚴(yán)重皺縮形態(tài)，結(jié)構(gòu)模糊。

將人脫細(xì)胞羊膜固定后行HE 染色，觀察細(xì)胞是否去除干凈；掃描電鏡下觀察人脫細(xì)胞羊膜的結(jié)構(gòu)特征。

⑶家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞負(fù)載于人脫細(xì)胞羊膜上的生長(zhǎng)曲線檢測(cè)：取成年家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞第三代，將細(xì)胞濃度調(diào)整為6×103/mL，種植到48 孔板中，其中24 孔板內(nèi)為提前浸泡無血清培養(yǎng)基的人脫細(xì)胞羊膜，另24 孔板內(nèi)為提前浸泡無血清培養(yǎng)基的無材料組，每孔各加入0.5 mL 第三代家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞懸液。從第二天起，每天相同時(shí)間取6孔加入濃度為4 g/L 的四氮唑鹽溶液40 μL，約在37℃下孵育4 h，停止培養(yǎng)細(xì)胞，棄上清液后，每孔再加入300 μL DMSO，震蕩10 min 后，將上清等量吸出到96 孔板中，510 nm 波長(zhǎng)測(cè)每孔吸光度，并計(jì)算6孔的平均值，橫軸表示時(shí)間，縱軸代表光吸收值，繪制生長(zhǎng)曲線。

⑷家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞負(fù)載于人脫細(xì)胞羊膜并成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)：消化收集第三代家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，調(diào)節(jié)離心機(jī)每分鐘1 200 轉(zhuǎn)離心，調(diào)整細(xì)胞密度為2×106/mL，使用微量移液器滴加到24 孔板中的人脫細(xì)胞羊膜上（大小為1.5 cm×1.5 cm），每片200 μL 均勻涂抹。將培養(yǎng)板在 37℃、5%C02、飽和濕度條件下靜置3 h，使細(xì)胞附著于人脫細(xì)胞羊膜上，再加入1 mL 成骨誘導(dǎo)液 (包含地塞米松8～10 mmol/L，10%胎牛血清，VitC 50 mg/L，高糖 DMEM，β-磷酸甘油鈉10 mmol/L)培養(yǎng)，對(duì)照組不加入成骨誘導(dǎo)液，每2～4 天更換一次培養(yǎng)液。定期觀察及檢測(cè)對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組的標(biāo)本。大體觀察：家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞負(fù)載于人脫細(xì)胞羊膜培養(yǎng)后定期從培養(yǎng)孔內(nèi)生物材料取出，直視下觀察加成骨誘導(dǎo)劑及未加成骨誘導(dǎo)劑的復(fù)合而成的組織工程骨膜材料的顏色、性狀、質(zhì)地。組織學(xué)觀察：家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞負(fù)載于人脫細(xì)胞羊膜培養(yǎng)后定期從培養(yǎng)孔內(nèi)生物材料取出，4%多聚甲醛固定，石蠟塊進(jìn)行包埋，組織學(xué)切片，行HE 染色，顯微鏡下觀察組織工程骨膜。掃描電鏡(SEM)觀察：家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞負(fù)載于人脫細(xì)胞羊膜培養(yǎng)后定期從培養(yǎng)孔內(nèi)生物材料取出，按照2.5%戊二醛固定，使用酒精脫水，醋酸異戊酯作工作液等步驟，臨界點(diǎn)干燥，表面噴金后上機(jī)觀察家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在人脫細(xì)胞羊膜上的黏附、生長(zhǎng)、分化、增殖情況。鈣結(jié)節(jié)染色檢測(cè)(茜素紅染色、Von kossa 染色)：家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞負(fù)載于人脫細(xì)胞羊膜復(fù)合培養(yǎng)后定期從培養(yǎng)孔內(nèi)生物材料取出，行鈣結(jié)節(jié)茜素紅染色。將標(biāo)本用PBS 緩沖液沖洗2～3 次，使用75%乙醇固定10 min，再用雙蒸水沖洗4～5 次，最后于 37℃下用 0.1%茜素紅 Tris-HCl（PH 8.3）30 min 染色；雙蒸餾水沖洗、干燥、快干膠封片，顯微鏡下觀察并采集圖片。定期取出復(fù)合的組織工程骨膜材料后，先使用4%多聚甲醛固定標(biāo)本，5%硫代硫酸鈉孵育30 min，蒸餾水沖洗，然后再使用1%硝酸銀溶液紫外線下染色30 min，雙蒸餾水沖洗掉細(xì)胞表面的黑色物質(zhì)，最后使用5%硫代硫酸鈉染色2 min 及1%中性紅復(fù)染10 min，雙蒸餾水漂洗后觀察標(biāo)本并采集圖片。主要觀察內(nèi)容及指標(biāo)：家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)及鑒定。HE 染色及掃描電鏡下觀察人羊膜脫細(xì)胞的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞負(fù)載于人脫細(xì)胞羊膜上的生長(zhǎng)曲線的檢測(cè)（MTT）。HE 染色及掃描電鏡下觀察家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞負(fù)載于人脫細(xì)胞羊膜上的附著、生長(zhǎng)、及增殖情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

通過組間F檢驗(yàn)其差別。

2 結(jié)果

2.1 倒置相差顯微鏡下觀察家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)

培養(yǎng)48 h 后細(xì)胞開始貼壁生長(zhǎng)，出現(xiàn)纖維樣細(xì)胞形態(tài)，大小不一細(xì)胞集落逐漸增多，72 h 后基本全部貼壁生長(zhǎng)，緊密排列，細(xì)胞集落及增生灶不斷增加，細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形，其形態(tài)發(fā)生了本質(zhì)性的變化。培養(yǎng)3～4 d 后細(xì)胞增殖加快，90%左右的細(xì)胞開始融合，形成片，并呈現(xiàn)出多變性的體型。一周細(xì)胞生長(zhǎng)鋪滿95%的瓶底，平行排列成“螺旋”狀或“旋渦”狀，細(xì)胞核明顯、清晰，核漿比例增大。第1～2 代細(xì)胞間的貼壁和生長(zhǎng)速度無明顯區(qū)別，呈比原代更均勻的長(zhǎng)梭形，細(xì)胞間隔更均勻，傳至第三代時(shí)無明顯變化。其中傳代1～2 d 為潛伏生長(zhǎng)期，3～6 d 為對(duì)數(shù)增殖期，對(duì)數(shù)增殖期結(jié)束后進(jìn)入平臺(tái)期和下降期。如圖1-3 所示為家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)學(xué)圖片。

圖1 原代細(xì)胞

圖2 第三代細(xì)胞

圖3 酶處理后的細(xì)胞

2.2 家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞的檢測(cè)結(jié)果

家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)成骨誘導(dǎo)液培養(yǎng)，顯微鏡下可見其細(xì)胞聚集成團(tuán)生長(zhǎng)，誘導(dǎo)至2 周左右倒置相差顯微鏡下可見集落生長(zhǎng)的細(xì)胞群體，呈“旋渦”團(tuán)狀向四周放射生長(zhǎng)，形成多個(gè)分布不均、大小不一、形態(tài)各異的鈣素結(jié)節(jié)，逐漸增大，3 周后被茜素紅染成玫瑰紅色。圖4 所示成骨細(xì)胞檢測(cè)的結(jié)果。

2.3 人脫細(xì)胞羊膜的觀察

經(jīng)物理及化學(xué)等方法處理獲得的人脫細(xì)胞羊膜呈淺乳白色半透明狀膜，冷凍干后的人脫細(xì)胞羊膜成白色紙狀，其表面略顯粗糙。經(jīng)物理及化學(xué)等方法處理獲得的人脫細(xì)胞羊膜，HE 染色及掃描電鏡下觀察顯示大量的粉紅色膠原細(xì)胞外基質(zhì)，呈網(wǎng)狀交錯(cuò)分布，沒有破壞其結(jié)構(gòu)和成分，未見有細(xì)胞形態(tài)的結(jié)構(gòu)（圖5-7）。

2.4 家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞負(fù)載于人脫細(xì)胞羊膜上的生長(zhǎng)曲線

檢測(cè)家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞負(fù)載于人脫細(xì)胞羊膜（實(shí)驗(yàn)組）及無人脫細(xì)胞羊膜（對(duì)照組）上增殖情況，接種后第2 天細(xì)胞開始增殖，第3 天細(xì)胞進(jìn)入快速增長(zhǎng)期，前4 d 實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組細(xì)胞增殖速度無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F＞0.05）。對(duì)照組第5 天達(dá)到了細(xì)胞增殖的高峰，實(shí)驗(yàn)組第7 天細(xì)胞達(dá)增殖高峰，爾后增殖呈下降趨勢(shì)。其中第3 天、5 天實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組增殖細(xì)胞量的組間F檢驗(yàn)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F＜0.05），對(duì)照組增殖細(xì)胞量比實(shí)驗(yàn)組少；第5 和第7 天兩組增殖細(xì)胞量通過組間F檢驗(yàn)顯示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），對(duì)照組增殖細(xì)胞量比實(shí)驗(yàn)組少（表1）。

表1 兩組增殖細(xì)胞的比較

與無人脫細(xì)胞羊膜組相比，F(xiàn)＜0.05，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可以在人脫細(xì)胞羊膜上生長(zhǎng)及增殖，比無人脫細(xì)胞組的細(xì)胞增殖量更多，并且為細(xì)胞提供了良好的生長(zhǎng)空間及環(huán)境。

2.5 家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞負(fù)載于人脫細(xì)胞羊膜并成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)

對(duì)照組中體外復(fù)合培養(yǎng)見家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞粘附于人脫細(xì)胞羊膜，細(xì)胞增殖良好。肉眼觀察復(fù)合而成的組織工程骨膜材料的顏色和組織硬度不變，并且電鏡下觀察未見有大量的成骨組織形成。實(shí)驗(yàn)組體外復(fù)合培養(yǎng)見家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞粘附于人脫細(xì)胞羊膜，分泌大量的細(xì)胞外基質(zhì)，有大量的細(xì)胞分化及增殖。肉眼觀察復(fù)合復(fù)合而成的組織骨膜材料的顏色變白，組織硬度增加，電鏡觀察見有大量的成骨組織形成。鈣結(jié)節(jié)茜素紅染色（+），鈣結(jié)節(jié)Vonkossa 染色（+）（圖8，9）。

3 討論

目前臨床已有多種技術(shù)修復(fù)大段骨缺損，但各種技術(shù)都有其局限性，如自體骨移植存在額外手術(shù)創(chuàng)傷、骨質(zhì)吸收、移植骨數(shù)量有限、形態(tài)不滿意、供區(qū)并發(fā)癥等問題；同種異體骨移植存在傳播疾病風(fēng)險(xiǎn)；誘導(dǎo)膜技術(shù)要求受區(qū)有良好的軟組織條件，需二次手術(shù)取出骨水泥、植入自體松質(zhì)骨。在大段骨缺損的修復(fù)過程中，對(duì)局部環(huán)境有嚴(yán)格的要求：⑴骨缺損區(qū)域的機(jī)械穩(wěn)定環(huán)境，如外固定架、髓內(nèi)針、鋼板等固定技術(shù)；⑵成骨細(xì)胞及多種誘導(dǎo)分子，如β-轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TGF-β）、胰島素樣生長(zhǎng)因子-Ⅰ、Ⅱ（IGF-Ⅰ，Ⅱ），骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP）、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子。在成骨過程中，誘導(dǎo)因子可使聚集的前體細(xì)胞定向分化為成骨細(xì)胞及血管祖細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞增殖、遷移過程及血管化進(jìn)程及成骨細(xì)胞黏附增殖；⑶阻止缺損處纖維組織長(zhǎng)入，如缺損處植骨、骨水泥、鈦網(wǎng)、生物膜等。

圖4 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨的鑒定

圖5 人脫細(xì)胞羊膜

圖6 HE 染色圖片

圖7 電鏡下觀察

圖8 BMSCs 與HAAM復(fù)合培養(yǎng)5 d

圖9 BMSCs 與HAAM 復(fù)合培養(yǎng)7 d

骨膜是皮質(zhì)骨外表面的纖維狀血管膜，作為祖細(xì)胞的重要貯存之一，在骨形成和再生中起著重要作用。該膜由兩層膜組成：包含成纖維細(xì)胞的纖維層和包含多能間充質(zhì)干細(xì)胞和成骨細(xì)胞的內(nèi)層。此外骨膜是局部生長(zhǎng)因子的來源，如VEGF 和BMP-2，一些體內(nèi)研究顯示，當(dāng)骨膜被移除時(shí)，骨修復(fù)受到顯著影響。其他研究表明骨膜細(xì)胞在自體皮質(zhì)骨移植物的愈合中具有關(guān)鍵作用，并且骨膜自體移植物可以促進(jìn)骨折愈合。

羊膜位于胎盤的最內(nèi)層，多個(gè)體外實(shí)驗(yàn)已經(jīng)表明人羊膜具有成骨特性，BMP-2 已經(jīng)在足月新生兒未分化的人羊膜中被檢測(cè)到，這種生長(zhǎng)因子可誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞的分化以及內(nèi)皮細(xì)胞和宿主成骨細(xì)胞的增殖和遷移。研究表明，羊膜提取物或羊膜/絨毛膜提取物中含有與成骨有關(guān)的生長(zhǎng)因子，如成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子，它們可能促進(jìn)MG-63 細(xì)胞的成骨分化。人脫細(xì)胞羊膜與家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，我們看到大量新生的骨組織，骨組織內(nèi)可見血管網(wǎng)及不規(guī)則髓腔。

骨膜和人羊膜具有若干相似的特征，包括干細(xì)胞的存在、生長(zhǎng)因子、體外證明的成骨能力，二者都具有滲透性；然而，重要的是要表明骨膜血管化程度很大，而HAAM 是無血管的。一些研究發(fā)現(xiàn)骨骼?。?dòng)蛋白）分泌的可溶性因子影響骨代謝。肌肉也是促進(jìn)骨愈合的細(xì)胞和生長(zhǎng)因子的重要來源。在骨膜處植入人羊膜可作為肌肉-骨骼間的屏障，使肌動(dòng)蛋白不能在組織之間移動(dòng)，此外，⑴羊膜通透性良好，允許營(yíng)養(yǎng)因子及組織液通過；⑵羊膜在骨缺損周圍形成機(jī)械屏障阻止組織長(zhǎng)入；⑶羊膜本身具有干細(xì)胞及多種生長(zhǎng)因子；⑷羊膜抗原性低，不引起排斥反應(yīng)；⑸羊膜易于獲得，術(shù)中操作簡(jiǎn)單?？梢姡蚰け旧砭褪且环N良好的生物材料[13]，HAAM 材料屬于可吸收膠原類材料，能夠作為種子細(xì)胞的支架復(fù)合構(gòu)成組織工程骨膜，為臨床應(yīng)用修復(fù)骨缺損帶來了曙光[14]。

BMSCs 具有多向分化及自我復(fù)制的能力[15]，雖是非造血干細(xì)胞，但是在應(yīng)激等一定的條件刺激及誘導(dǎo)下可以分化為成熟的細(xì)胞，如軟骨及成骨細(xì)胞，供臨床及科研的應(yīng)用，并且免疫原性較低。兩者相結(jié)合，提供適宜的環(huán)境，不改變細(xì)胞相容性和人脫細(xì)胞羊膜原本的特性，置于骨缺損區(qū)域誘導(dǎo)成骨的生長(zhǎng)。

組織工程骨膜有良好的生物降解性、透明性等特性，作為修復(fù)大段骨缺損的材料有其獨(dú)特的優(yōu)越性。骨組織工程技術(shù)是將種子細(xì)胞經(jīng)過體外培養(yǎng)，復(fù)合于支架材料，然后將細(xì)胞-支架復(fù)合體植入體內(nèi)骨缺損部位。在誘導(dǎo)分子的作用下，前體細(xì)胞聚集、增殖、分化、黏附，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)成骨過程。