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        血府逐瘀湯加減方對(duì)冠心病心血瘀阻證患者血漿小分子代謝產(chǎn)物的影響及機(jī)制研究

        2019-09-13 06:25:32鄭娟娟郭佳和馬國(guó)斌林旭輝張統(tǒng)文鄭伯仁
        福建中醫(yī)藥 2019年4期
        關(guān)鍵詞:心血瘀阻丙酮酸血府逐瘀湯

        鄭娟娟,郭佳和,馬國(guó)斌,林旭輝,張統(tǒng)文,鄭伯仁

        (廈門大學(xué)附屬福州第二醫(yī)院,福建 福州 350007)

        冠心病是冠狀動(dòng)脈血管發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化病變而引起血管腔狹窄或阻塞,造成心肌缺血、缺氧或壞死而導(dǎo)致的心臟?。?],嚴(yán)重危害人類健康。相對(duì)于藥物長(zhǎng)期服用后的毒副作用、介入治療昂貴的費(fèi)用和手術(shù)風(fēng)險(xiǎn),中醫(yī)藥治療顯現(xiàn)出獨(dú)特的優(yōu)勢(shì),已成為冠心病治療中的一種新選擇。本課題選用血府逐瘀湯加減方治療冠心病心血瘀阻證患者,運(yùn)用氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜(GC-TOF-MS)聯(lián)用技術(shù)[2]檢測(cè)其治療前后血漿小分子代謝產(chǎn)物的變化,研究冠心病心血瘀阻證的相關(guān)代謝途徑以及其可能的作用機(jī)制,為中醫(yī)藥防治冠心病提供客觀、科學(xué)的理論依據(jù)。

        1 資料與方法

        1.1 診斷標(biāo)準(zhǔn) 西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)WH0制定的《缺血性心臟病的命名及診斷標(biāo)準(zhǔn)》[3],中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn)參考《中醫(yī)病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)》[4]辨為心血瘀阻證。

        1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) ① 年齡 35~80歲;② 符合西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)及中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn)的穩(wěn)定期患者;③ 經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)并簽署知情同意書。

        1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) ① 急性冠脈綜合征;② 心肌炎;③ 非缺血性心臟?。苑卧葱孕呐K病、貧血性心臟病、風(fēng)濕性心臟病等);④ 繼發(fā)性高血壓和不能控制的惡性高血壓;⑤ 其他疾病引起的心絞痛;⑥糖尿?。虎?嚴(yán)重的肝腎功能障礙;⑧ 精神疾病;⑨惡性腫瘤等。

        1.4 一般資料 選擇2017年3月—2019年3月首次在我院心內(nèi)科經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影術(shù)確診的冠心病、并經(jīng)主任中醫(yī)師辨證為心血瘀阻證患者40例,采用隨機(jī)數(shù)字表法分成治療組22例和對(duì)照組18例,40例患者抽取隨機(jī)數(shù)0~9,隨機(jī)數(shù)除以2余數(shù)為1分入治療組,余數(shù)為0分入對(duì)照組。2組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性,見表 1。

        表1 2組一般資料比較()

        表1 2組一般資料比較()

        組別治療組對(duì)照組n 男22 18年齡/歲58.94±9.51 57.39±9.33病程<6個(gè)月10 10病程>6個(gè)月12 8 13 9女 9 9 BMI/(kg/m2)23.85±4.13 24.22±3.944 TC/(mmol/L)4.56±1.07 4.31±0.97 TG/(mmol/L)1.25±0.8 1.41±0.80 HDL-C/(mmol/L)1.17±0.44 1.06±0.36 LDL-C/(mmol/L)3.02±0.97 2.74±0.84 UA/(μmol/L)272.32±64.69 300.31±85.83

        1.5 治療方法 ① 對(duì)照組采用西醫(yī)規(guī)范治療方案[5](雙聯(lián)抗血小板、調(diào)脂穩(wěn)定斑塊):阿司匹林腸溶片(拜耳醫(yī)藥保健有限公司,規(guī)格:0.1 mg×30片,生產(chǎn)批號(hào):BJ18155),每次 0.1 g,每日 1次;硫酸氫氯吡格雷片[賽諾菲(杭州)制藥有限公司,規(guī)格:75 mg×7 片,生產(chǎn)批號(hào):8A392],每次 75 mg,每日1次;阿托伐他汀鈣片(輝瑞制藥有限公司,規(guī)格:20 mg×7 片,生產(chǎn)批號(hào):75837102),每次 20 mg,每日1次。② 治療組采用西醫(yī)規(guī)范治療方案合血府逐瘀湯加減方口服,血府逐瘀湯加減方組成:生地黃10 g,桃仁 10 g,紅花 10 g,紫丹參 20 g,赤芍 10 g,川牛膝 10 g,當(dāng)歸 10 g,川芎 10 g,柴胡 6 g,枳殼10 g,桔梗10 g。中藥由我院中藥房代煎,日服1劑,每次200 mL,分2次溫服。2組均治療30 d后判定療效。

        1.6 觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法 2組患者治療前后在清晨空腹?fàn)顟B(tài)下分別取血3 mL,保存于肝素鈉抗凝管中,經(jīng)離心機(jī)4 000 r/min離心10 min即刻取上清,放置在冰柜中保存,溫度調(diào)節(jié)至-80℃。

        運(yùn)用GC-TOF-MS技術(shù)檢測(cè)其治療前后血漿小分子代謝產(chǎn)物的變化。GC-TOF-MS技術(shù)檢測(cè)由上海百趣生物醫(yī)學(xué)科技有限公司提供,氣相色譜儀器由安捷倫科技公司生產(chǎn),型號(hào):7890A,質(zhì)譜儀品牌由美國(guó)力可分析儀器公司生產(chǎn),型號(hào):PEGASUS HT。使用 MS-DIAL軟件[6]對(duì)質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,在物質(zhì)定性工作中,使用了FiehnBinbase數(shù)據(jù)庫(kù),包括質(zhì)譜匹配及保留時(shí)間指數(shù)匹配。所得的數(shù)據(jù)輸出保存于Excel文件中。

        1.7 數(shù)據(jù)分析 原始數(shù)據(jù)通過(guò)Excel編輯整理,將數(shù)據(jù)導(dǎo)入SIMCA 14.1軟件進(jìn)行多元統(tǒng)計(jì)分析[7]。對(duì)所得的數(shù)據(jù)采用平均中心化(mean centering)進(jìn)行預(yù)處理,處理后的數(shù)據(jù)采用主成分分析法(PCA)[8],應(yīng)用正交偏最小二乘法-判別分析(OPLS-DA)[9]的統(tǒng)計(jì)方法對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析,分析結(jié)果用散點(diǎn)圖(score scatter plot)的形式表示。計(jì)量資料符合正態(tài)分布的以()描述,不符合正態(tài)分布的以中位數(shù)和四分位數(shù)間距(M±QR)描述;符合正態(tài)分布的采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),不符合正態(tài)分布的采用秩和檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn),分別比較組間均值是否存在差異。

        2 結(jié) 果

        采用PCA分析法對(duì)2組治療前后共4組的血漿小分子代謝產(chǎn)物數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,繪制出反映組間離散程度的散點(diǎn)圖。

        通過(guò)數(shù)據(jù)分析,建立數(shù)學(xué)模型,得到用于評(píng)價(jià)模型質(zhì)量的指標(biāo):隱性變量反映自變量X的變異百分比[R2X(cum)]、隱性變量反映因變量Y的變異百分比[R2Y(cum)]和隱性變量用于預(yù)測(cè)X和 Y的百分比[Q2(cum)]。

        2.1 PCA分析結(jié)果 2組治療前后PCA分析結(jié)果見圖1、圖2。從散點(diǎn)圖可見治療組治療前后樣本分開明顯,對(duì)照組治療前后樣本分開不明顯。

        2.2 OPLS-DA分析結(jié)果 2組治療前后OPLS-DA分析結(jié)果見圖3、圖4。從散點(diǎn)圖可見:治療組治療前與治療后可以顯著區(qū)分,表明治療前后兩組樣本的血漿小分子代謝產(chǎn)物存在一定差異,R2X(cum)=15.1%,R2Y(cum)=70.3%,Q2(cum)=70.3%;對(duì)照組治療前后2組區(qū)分不顯著,R2X(cum)=34%,R2Y(cum)=76.5%,Q2(cum)=42.8%。

        圖1 治療組治療前后GC-TOF-MS數(shù)據(jù)的PCA分析

        圖2 對(duì)照組治療前后GC-TOF-MS數(shù)據(jù)的PCA分析

        圖3 治療組治療前后GC-TOF-MS數(shù)據(jù)的OPLS-DA分析

        2.3 差異性代謝產(chǎn)物的識(shí)別與篩選 治療組治療后丙酮酸、磷酸甲酯、2-羥基戊酸、木糖醇、D-半乳糖醛酸較治療前顯著下降,膽固醇較治療前顯著升高,見表2。對(duì)照組治療前后膽固醇、丙酮酸、磷酸甲酯、2-羥基戊酸、木糖醇、D-半乳糖醛酸改變無(wú)明顯差異,見表3。

        圖4 對(duì)照組治療前后GC-TOF-MS數(shù)據(jù)的OPLS-DA分析

        3 討 論

        祖國(guó)醫(yī)學(xué)強(qiáng)調(diào)運(yùn)用整體觀探討疾病發(fā)展的病因、病機(jī)及證治規(guī)律,調(diào)節(jié)整體平衡、把握動(dòng)態(tài)變化是祖國(guó)醫(yī)學(xué)的基本治療原則,而代謝組學(xué)也強(qiáng)調(diào)把人體看成一個(gè)整體來(lái)研究,同時(shí)人體內(nèi)的代謝產(chǎn)物也是動(dòng)態(tài)變化的,代謝組學(xué)通過(guò)人體內(nèi)代謝產(chǎn)物的變化,可以觀察疾病發(fā)生、發(fā)展的基本規(guī)律[10],這與祖國(guó)醫(yī)學(xué)具有異曲同工之處。祖國(guó)醫(yī)學(xué)強(qiáng)調(diào)辨病與辨證相結(jié)合,其中辨證論治是祖國(guó)醫(yī)學(xué)的精髓所在,中醫(yī)證型是對(duì)疾病發(fā)展過(guò)程中的某一階段的病理概括[11]。代謝組學(xué)的研究對(duì)象是生命個(gè)體對(duì)外源性物質(zhì)的刺激、環(huán)境變化或遺傳修飾所做出的所有代謝應(yīng)答和動(dòng)態(tài)變化過(guò)程[9],可以為中醫(yī)辨證論治提供客觀化的依據(jù)。代謝組學(xué)最常用的分析技術(shù)是GC-TOF-MS技術(shù),該技術(shù)始用于上個(gè)世紀(jì)70年代,此后,在疾病的診斷研究中受到廣泛運(yùn)用[12],因其具有分辨率和靈敏度高、適于痕量分析的特點(diǎn),目前仍是代謝組學(xué)分析的最常用技術(shù)之一。

        表2 治療組治療前后差異性代謝產(chǎn)物比較

        表3 對(duì)照組治療前后差異性代謝產(chǎn)物比較

        本研究使用代謝組學(xué)技術(shù)評(píng)價(jià)西醫(yī)規(guī)范治療基礎(chǔ)上合用血府逐瘀湯加減方后冠心病心血瘀阻證患者代謝產(chǎn)物變化,探討血府逐瘀湯加減方的作用機(jī)制。血府逐瘀湯源于清代王清任《醫(yī)林改錯(cuò)》,是近年來(lái)中醫(yī)藥方面研究較多的活血化瘀成方。血府逐瘀湯加減方是原方去甘草,加丹參而成,方中以桃仁、紅花、川芎、赤芍、丹參、當(dāng)歸活血祛瘀;牛膝祛瘀血,通血脈,引血下行;柴胡疏肝解郁,升達(dá)清陽(yáng);桔梗開宣肺氣,載藥上行,合枳殼升降氣機(jī),開胸行氣,使氣行則血行;生地黃涼血清熱,合當(dāng)歸又能養(yǎng)陰潤(rùn)燥,使祛瘀而不傷陰血。諸藥合用,共奏活血祛瘀、行氣止痛之功。代謝組學(xué)檢測(cè)結(jié)果提示:在西醫(yī)規(guī)范治療基礎(chǔ)上加用血府逐瘀湯加減方,較單純西醫(yī)規(guī)范治療有顯著性差異。

        治療組治療后丙酮酸、磷酸甲酯、2-羥基戊酸、木糖醇、D-半乳糖醛酸較治療前下降,這些代謝產(chǎn)物的異常導(dǎo)致了血液黏度增加,這與血瘀證稠、滯、黏、凝的特征不謀而合[13]。丙酮酸是代謝過(guò)程中重要的中間產(chǎn)物,三羧酸循環(huán)主要在線粒體中進(jìn)行,在有足夠氧氣條件下,糖酵解生成的丙酮酸進(jìn)入線粒體,經(jīng)三羧酸循環(huán)被氧化成二氧化碳和水。酵解過(guò)程中產(chǎn)生的還原型輔酶I(NADH),則經(jīng)呼吸鏈氧化產(chǎn)生腺嘌呤核苷三磷酸ATP和水。如果供氧不足,NADH則不會(huì)進(jìn)入呼吸鏈,在某些生物中把丙酮酸還原成乳酸,在某些生物中丙酮酸會(huì)轉(zhuǎn)變?yōu)橐掖?,并釋放出二氧化碳,這取決于不同的生物含有的催化酶種類不一樣。此外,丙酮酸是三大營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)之間相互轉(zhuǎn)換的樞紐,可以通過(guò)氨基酸轉(zhuǎn)換途徑形成新的氨基酸,實(shí)現(xiàn)了糖類到蛋白質(zhì)的相互轉(zhuǎn)化。

        綜上所述,運(yùn)用GC-TOF-MS技術(shù)可以檢測(cè)冠心病心血瘀阻證治療前后患者的血漿小分子代謝產(chǎn)物,同時(shí)可以通過(guò)該技術(shù)對(duì)代謝產(chǎn)物進(jìn)行定量分析,以得到相關(guān)的差異性代謝產(chǎn)物;也能通過(guò)對(duì)血漿小分子代謝產(chǎn)物代謝通路分析,了解其主要代謝途徑,這些通路可作為研究中醫(yī)藥作用靶點(diǎn)的依據(jù)。

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