董武軍，傅 強，呂慧俠*

（1中國藥科大學(xué)藥學(xué)院，南京211198；2中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所，北京100050）

和厚樸酚（honokiol）為含酚羥基的新木脂素類化合物，是傳統(tǒng)中藥厚樸（Cortex Magnoliae Officinalis）的主要活性成分之一［1］。研究表明，和厚樸酚具有抗菌、抗炎、抗焦慮、中樞性肌肉松弛、抗血小板聚集、抗氧化等藥理作用［2-4］；近年來，大量研究還發(fā)現(xiàn)其能通過逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥性、抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移和增強T細胞介導(dǎo)的腫瘤免疫等作用，對多種腫瘤具有明顯抑制作用［5-8］，對心血管系統(tǒng)具有保護作用［9-10］。但和厚樸酚水溶性差（溶解度僅為 22 mg／L）［11］、易被氧化降解，口服生物利用度低且體內(nèi)代謝迅速［12］，嚴(yán)重制約了其臨床應(yīng)用。為克服這些缺陷，國內(nèi)外相繼報道了和厚樸酚的多種新型藥物遞送系統(tǒng)，包括膠束［13］、納米混懸液［14］、脂質(zhì)體［15］、納米粒［16］、包合物［17］等。這些新型藥物遞送系統(tǒng)大多集中在注射給藥途徑，載藥量不高且制備相對比較復(fù)雜，產(chǎn)業(yè)化面臨較大挑戰(zhàn)。

固體分散體是指藥物以分子、無定形或微晶等狀態(tài)高度均勻分散在固態(tài)載體材料中形成的體系，是改善難溶性藥物體外溶出、促進其在體內(nèi)的吸收和提高療效的一種最為常用且有效的制劑學(xué)手段。近年來，以親水性惰性材料等為載體的新型表面固體分散體（surface solid dispersions）引起了廣泛的關(guān)注，藥物可高度分散在載體材料表面或孔隙中間，載體的高度分散和良好潤濕性可以使藥物溶出速率顯著改善［18-20］。用于表面固體分散體的輔料主要為水不溶但卻具有親水性特征的材料，如交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)聚維酮、羧甲基淀粉鈉、預(yù)膠化淀粉、膠體二氧化硅、微晶纖維素等［21-22］，其中最受關(guān)注的是采用交聯(lián)羧甲基纖維素鈉等崩解劑為載體材料，這些親水崩解劑可使固體分散體更迅速碎裂成更細小的顆粒，顯著改善了藥物的溶出速率［23-24］。與采用水溶性載體材料的常規(guī)固體分散體相比，表面固體分散體不僅能提供更快的溶出，還可以有效解決某些載體（如PVP、PEG）制備而成的固體分散體容易老化、易吸潮、黏度過大難以加工等問題［25］。

本研究利用和厚樸酚熔點低（87.5℃）的特點，以交聯(lián)羧甲基纖維素鈉為載體材料，采用熔融法制備新型和厚樸酚表面固體分散體，并對其物相狀態(tài)和初步穩(wěn)定性進行考察。熔融法操作簡單且無有機溶劑殘留問題，這是其它和厚樸酚納米制劑以及常規(guī)固體分散體所不具備的；交聯(lián)羧甲基纖維素鈉作載體可以使得固體分散體有相對較好的流動性和抗老化能力，并有利于制劑的后處理，如用于直接壓片和膠囊灌裝等工藝，這些優(yōu)點使得和厚樸酚-交聯(lián)羧甲基纖維素鈉表面固體分散體具有良好的應(yīng)用前景和研究價值。

1 材 料

1.1 試 劑

交聯(lián)羧甲基纖維素鈉（批號：140701，安徽山河藥用輔料股份有限公司）；和厚樸酚原料藥（批號：MB5989，含量≥98%，大連美侖生物技術(shù)有限公司）；和厚樸酚對照品（批號：110730-201614，中國食品藥品檢定研究院）；甲醇（色譜純，德國Merck公司）。實驗用水為超純水，其他試劑均為市售分析純。

1.2 儀 器

DSC200F3型差示掃描量熱儀（德國耐馳公司）；Zeiss Merlin型掃描電鏡（德國蔡司公司）；1260型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；UltimaIV HD3651N型組合式多動能水平X射線衍射儀（日本理學(xué)株式會社）。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品的制備

2.1.1 固體分散體的制備 稱取和厚樸酚原料藥置于90℃水浴加熱，使藥物完全熔融。再按藥物與交聯(lián)羧甲基纖維素鈉質(zhì)量比為 1∶1，1∶2，1∶3，分別稱取交聯(lián)羧甲基纖維素鈉加入上述熔融液中，然后攪拌30 min使其混合均勻。靜置冷卻至室溫，然后機械粉碎并過60目篩，收集后置干燥器內(nèi)保存?zhèn)溆谩?/p>

2.1.2 物理混合物的制備 分別稱取和厚樸酚和交聯(lián)羧甲基纖維素鈉適量，按處方質(zhì)量比例，以等量遞加法于研缽中混合均勻，收集后置干燥器內(nèi)保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 體外溶出研究

2.2.1 色譜條件 漢邦C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；柱溫：25℃；流動相：甲醇-水（75∶25）；流速：1.0 mL／min；檢測波長：295 nm；進樣量：10μL。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取和厚樸酚對照品約12.50 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，制成250 mg／L的和厚樸酚對照品貯備液。精密量取適量對照品貯備液，置50 mL量瓶中，分別用甲醇稀釋制成 10，2，0.4，0.2，0.1，0.05 mg／L的和厚樸酚系列對照品溶液。精密量取系列對照品溶液各10μL，分別注入液相色譜儀，按上述擬定色譜條件測定，記錄峰面積，以峰面積（Y）對溶液質(zhì)量濃度（X，mg／L）進行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=1.76×107X-1.52×104（r=0.999 9）。結(jié)果表明，和厚樸酚在 0.05～10 mg／L吸收度與峰面積有良好的線性關(guān)系。

2.2.3 精密度試驗 取0.1 mg／L對照品溶液，按擬定色譜條件進樣測定，記錄峰面積，連續(xù)進樣測定6次，按和厚樸酚峰面積計算RSD為0.83%，精密度良好。

2.2.4 回收率試驗 精密稱取已知含量的固體分散體（約相當(dāng)于和厚樸酚5 mg），置于100 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度。精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度并搖勻，然后過濾即得。精密量取上述溶液9份，分成3組，再分別精密加入和厚樸酚對照品儲備液適量，使制成低、中、高3個濃度水平的供試品溶液，按上述測定方法，依法測定，計算加樣回收率。結(jié)果表明，低、中、高3個濃度水平的加樣回收率分別為98.35%、97.92%和97.16%，平均回收率為97.81%，RSD為1.54%，可見方法的加樣回收率良好。

2.2.5 溶出度測定 取適量供試品，照《中華人民共和國藥典》（2015版）溶出度與釋放度測定方法（通則0931第二法-漿法），以含0.05%吐溫80的pH 1.2鹽酸溶液或含0.05%吐溫80的pH 6.8磷酸鹽緩沖液900 mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速50 r／min，依法操作。分別經(jīng) 5，15，45，60，120 min時，取溶液2 mL用0.45μm微孔濾膜濾過，同時補充同溫度等量新鮮溶出介質(zhì)，精密量取續(xù)濾液適量用甲醇定量稀釋后作為供試品溶液；按照前述色譜方法進樣并記錄峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計算濃度并換算為溶出度。溶出曲線見圖1，由DDSolve軟件［26］計算得到的不同溶出介質(zhì)中原料藥和固體分散體（1∶2）溶出參數(shù)見表1。

由圖1可知，和厚樸酚原料在含0.05%吐溫80的pH 1.2鹽酸溶液和含0.05%吐溫80的pH6.8磷酸鹽溶液中溶出均較慢，在15 min時溶出度僅分別為13.5%、17.8%，120 min時溶出量均低于35%；與原料藥相比，物理混合物溶出無明顯改善，而制成固體分散體后藥物的溶出速度和溶出量均明顯提高，且隨載體材料用量增加溶出增加。當(dāng)藥物與載體材料質(zhì)量比達到1∶2和1∶3時，與原料藥溶出相比，兩者的溶出速率顯著增加，15 min時溶出分別為92.8%和95.6%，基本溶出完全。溶出參數(shù)結(jié)果顯示，表面固體分散體使得平均溶出時間（mean dissolution time，MDT）顯著縮短，僅為原料藥的 1／6～1／7；溶出效率（dissolution efficiency，DE）也顯著增加，約為原料藥的4倍?？梢?，和厚樸酚-基交聯(lián)羧甲基基纖維鈉表面固體分散體顯著提高了藥物的體外溶出，最佳藥物載體質(zhì)量比為 1∶2。

—△—Honokiol；—■—Physicalmixture；—●—Solid dispersion（1∶1）；—▽—Solid dispersion（1∶2）；— ×—Solid dispersion（1∶3）Figure 1 In vitro dissolution profiles of honokiol，physical mixture，solid dispersion in pH 1.2（A）and pH 6.8 dissolution medium（B）（±s，n=6）

Table 1 Dissolution parameters of honokiol and its surface solid dispersion

2.3 固體分散體物相表征

2.3.1 差示掃描量熱法（DSC） 取和厚樸酚原料藥、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、和厚樸酚與交聯(lián)羧甲基纖維素鈉物理混合物及固體分散體（和厚樸酚∶交聯(lián)羧甲基纖維素鈉質(zhì)量比為1∶2），于40℃真空干燥過夜，再分別取出約5 mg置于鋁坩堝中進行測定，升溫速率10℃／min，掃描范圍40～250℃，氮氣氣氛。繪制DSC曲線圖，結(jié)果見圖2。

圖2顯示，和厚樸酚原料藥在75℃和85℃附近有兩個明顯的吸熱峰，交聯(lián)羧甲基纖維素鈉無明顯吸熱峰，物理混合物與原料藥DSC曲線相似，固體分散體中僅有1個吸熱峰，而且峰的位置在原料藥2個吸熱峰之間。結(jié)果顯示，固體分散體中和厚樸酚仍呈現(xiàn)結(jié)晶態(tài)，但晶型可能發(fā)生了改變。

Figure 2 DSC thermograms of honokiol powder（A），croscarmellose sodium（B），physicalmixture（C）and surface solid dispersion（D）

2.3.2 X射線粉末衍射（PXRD） 測試條件為Cu-Ka靶石墨單色器，測定管壓 40 kV，管流40 mA；掃描 2θ范圍 4°～60°，掃描速度 1.0°／s。取經(jīng)40℃真空干燥過夜的厚樸酚原料藥、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、和厚樸酚與交聯(lián)羧甲基纖維素鈉物理混合物及相應(yīng)固體分散體（和厚樸酚與交聯(lián)羧甲基纖維素鈉質(zhì)量比為1∶2），分別進行PXRD試驗，結(jié)果見圖3。

圖3顯示，和厚樸酚原料藥有明顯的衍射尖峰，在7°附近有一個強衍射峰，在17.5°附近有一個較強的衍射峰，9°，13.5°，22°附近也有清晰可見的衍射峰，呈現(xiàn)結(jié)晶態(tài)；而交聯(lián)羧甲基纖維素鈉為無定形態(tài)。物理混合物中和厚樸酚衍射峰依然存在，但強度有所降低，說明和厚樸酚仍以與原料藥相同的結(jié)晶態(tài)存在。和厚樸酚形成固體分散體過程中熔融后再冷卻結(jié)晶高度分散在載體材料中，衍射峰發(fā)生了變化，在原料藥7°附近出現(xiàn)兩個特征衍射峰，其他弱衍射峰基本與物理混合物相同。綜合上述結(jié)果表明，固體分散體中和厚樸酚以微晶存在，但晶型可能發(fā)生了改變。

2.3.3 掃描電鏡分析（SEM） 測試條件為真空鍍金70 s，5 kV加速電壓掃描并拍照，用掃描電鏡觀察和厚樸酚原料藥、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、和厚樸酚與交聯(lián)羧甲基纖維素鈉物理混合物及相應(yīng)固體分散體（和厚樸酚∶交聯(lián)羧甲基纖維素鈉質(zhì)量比為1∶2）的表面和晶體結(jié)構(gòu)，結(jié)果見圖4。

Figure 3 PXRD of honokiol powder（A），croscarmellose sodium（B），physicalmixture（C）and surface solid dispersion（D）

電鏡圖顯示，原料藥以光滑且顆粒分明的晶體形態(tài)存在；交聯(lián)羧甲基纖維素鈉在電鏡下則是粗糙的無定形狀態(tài)；物理混合物圖像中沒有觀察到藥物覆蓋于載體表面，可能是由于交聯(lián)羧甲基纖維素鈉的量為和厚樸酚的2倍，所以所見基本上與交聯(lián)羧甲基纖維素鈉電鏡圖相似；固體分散體中和厚樸酚覆蓋在載體材料交聯(lián)羧甲基纖維素鈉表面，這種在崩解劑載體材料表面的高度分散性，使其溶出度得到顯著改善。

Figure 4 SEM micrographs of honokiol powder（A），croscarmellose sodium（B），physicalmixture（C）and surface solid dispersion（D）

2.4 固體分散體的穩(wěn)定性試驗

分別取適量和厚樸酚原料藥、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、和厚樸酚與交聯(lián)羧甲基纖維素鈉物理混合物及相應(yīng)固體分散體（和厚樸酚∶交聯(lián)羧甲基纖維素鈉質(zhì)量比為1∶2），在25℃，相對濕度60%條件下放置6個月，分別測定在含0.05%吐溫80的pH 1.2鹽酸溶液或0.05%吐溫80的pH 6.8磷酸鹽緩沖液溶出介質(zhì)中的溶出度，初步考察固體分散體的穩(wěn)定性。

放置1、2、3和6個月后，在兩種溶出介質(zhì)中固體分散體的溶出速率與0月相比，并無明顯變化，具體結(jié)果如圖5所示。

Figure 5 In vitro dissolution profilesofhonokiol solid dispersion in pH 1.2（A）and pH 6.8（B）dissolution medium after 1，2，3，6 months（±s，n=6）

這說明此固體分散體有較好的溶出穩(wěn)定性，推測交聯(lián)羧甲基纖維素鈉具有良好的抗老化能力。

3 討 論

近年來有不少采用交聯(lián)羧甲基纖維素鈉為載體材料的固體分散體研究報道，一般采用溶劑法或溶劑沉積法制備［24，27-29］。唐嵐等［29］采用溶劑法將和厚樸酚的同分異構(gòu)體厚樸酚與交聯(lián)羧甲基纖維素鈉制備成表面固體分散體，藥物主要以無定形覆蓋在交聯(lián)羧甲基纖維素鈉表面，制成固體分散體后藥物120 min溶出度是原料藥的約6.9倍，體外溶出速率得到了極大提高。Castro等［24］同樣采用溶劑法，制備了吲哚美辛-基交聯(lián)羧甲基基纖維鈉表面固體分散體，溶出度提高了3.2倍，物相表征顯示吲哚美辛以微晶形態(tài)存在，而且晶型發(fā)生了改變。本研究利用和厚樸酚熔點較低，采用熔融法制備固體分散體（工業(yè)化大生產(chǎn)中也可以嘗試采用熱熔擠出設(shè)備進行生產(chǎn)），與文獻報道的溶劑法制備厚樸酚-交聯(lián)羧甲基纖維素鈉表面固體分散體相比，本法制得固體分散體不僅無溶劑殘留問題，而且載藥量更高（從16.7%提高至33.3%），溶出速度更快，因此工業(yè)化前景更好。

本研究以交聯(lián)羧甲基纖維素鈉為載體材料，首次采用簡單的熔融法制備了和厚樸酚-交聯(lián)羧甲基纖維素鈉表面固體分散體，顯著縮短了藥物平均溶出時間和提高了溶出效率 （15 min，溶出度 ＞90%）；DSC、PXRD結(jié)果顯示表面固體分散體中和厚樸酚仍以晶體狀態(tài)存在，SEM結(jié)果顯示藥物高度熔融后分散附著于載體材料的表面；放置6個月后藥物的溶出速率未發(fā)生明顯變化，表明本法制得的和厚樸酚-交聯(lián)羧甲基纖維素鈉表面固體分散體具有良好的穩(wěn)定性。此外新型和厚樸酚-交聯(lián)羧甲基纖維素鈉表面固體分散體還具有黏度小、流動性好等優(yōu)點，此研究同時也可為難溶性藥物固體分散體的制備提供一種新的研究思路和方法。