張書良，張洪勇，劉 慶，韓建東

（1.德州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，山東 德州 253015；2.山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境研究所，農(nóng)業(yè)部廢棄物基質(zhì)化利用重點實驗室，山東 濟南 250100）

茶樹菇 （Agrocybe aegerita） 隸屬于真菌門（Eumycota） 擔(dān)子菌亞門（Basidiomycotina） 傘菌目（Agaricales） 糞繡傘科 （BoIbitiaceae） 田頭菇屬（Agrocybe）[1]，原產(chǎn)于福建和江西，是一種珍稀食（藥） 用菌。由于經(jīng)濟價值高，市場需求量大，種植區(qū)域由南方擴展到北方，目前在國內(nèi)很多省份均有栽培。北方地區(qū)使用的茶樹菇菌種基本上由外地引進(jìn)而來，商品名、學(xué)名、俗名混雜多樣，個體性狀與描述有很大差異，同名異物和同物異名現(xiàn)象較為普遍。本研究從山東、福建、江西等茶樹菇主產(chǎn)區(qū)引進(jìn)收集12個茶樹菇菌株，通過菌株間的拮抗試驗和農(nóng)藝性狀的比較分析，明確茶樹菇不同菌株間的親緣關(guān)系及各菌株農(nóng)藝性狀特點，為茶樹菇種質(zhì)資源分類鑒定、遺傳育種和推廣利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株

試驗供試菌株詳情見表1。

表1 供試茶樹菇菌株Tab.1 Tested strains of Agrocybe aegerita

1.1.2 供試培養(yǎng)基

PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g，水1 000 mL，pH自然。

栽培料：棉籽殼50%、玉米芯20%、麥麩18%、玉米粉5%、豆粕4%、石膏1%、石灰2%，含水量63%。

1.2 試驗方法

1.2.1 菌絲拮抗試驗

參照文獻(xiàn)[2]的方法進(jìn)行。將各菌株分別接種于PDA平板培養(yǎng)基上；培養(yǎng)一定時間后，在無菌條件下，用直徑5 mm的打孔器，在每個培養(yǎng)好的菌落上打取生長一致的帶菌圓餅。隨機取2個菌株的帶菌圓餅，接種至同一PDA平板培養(yǎng)基中的2個區(qū)域，間隔4 cm，在23℃～25℃條件下培養(yǎng)10 d，觀察菌絲生長情況。

1.2.2 農(nóng)藝性狀測定

稱取棉籽殼和玉米芯，分別加水預(yù)濕16 h，再與其他原料混合攪拌均勻，調(diào)節(jié)含水量到63%左右。每袋裝料高度為10 cm，直徑6 cm，裝料均勻，松緊度一致，高壓蒸汽滅菌，冷卻后在無菌環(huán)境下接種。每個菌株設(shè)3組，每組20袋，共60袋。將接種好的栽培袋放入培養(yǎng)室，溫度20℃～22℃，空氣相對濕度70%左右，避光培養(yǎng)至菌絲長滿菌袋。菌絲長滿菌袋后按常規(guī)方法進(jìn)行出菇管理[3]。

菌絲長過菌包肩部1 cm～2 cm時，用記號筆在菌絲生長前端畫線，以后每隔5 d測量一次生長距離，計算日平均生長速度。觀察、記錄發(fā)菌期菌絲的粗細(xì)、色澤和疏密程度等。

出菇過程中，觀察不同菌株子實體的顏色，測量菌蓋的直徑和寬度、菌柄直徑和長度等。

稱量前兩潮菇子實體的鮮重，計算茶樹菇的生物學(xué)效率。

1.2.3 出菇溫度測定

制作不同茶樹菇菌株的出菇菌包，將菌包分別放置在12℃、14℃、16℃、18℃、20℃、26℃、28℃、30℃、32℃，共9個不同溫度條件的出菇房內(nèi)，各出菇房內(nèi)每個菌株放置3組，每組20袋，觀察記錄是否正常出菇。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用Excel和DPS（version 7.05） 對試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同菌株的菌絲拮抗反應(yīng)

對收集到的12個茶樹菇菌株進(jìn)行了拮抗反應(yīng)試驗，結(jié)果見表2，部分菌株間的拮抗反應(yīng)情況見圖1。

表2 不同菌株的菌絲拮抗反應(yīng)Tab.2 Antagonistic reaction among different strains

由表2可以看出，3號、8號、11號菌株與其他菌株間均存在明顯的拮抗反應(yīng)，親緣關(guān)系較遠(yuǎn)；2號、4號、12號菌株間無拮抗反應(yīng)，親緣關(guān)系較近，與其他菌株存在明顯的拮抗反應(yīng)；1號、5號、6號、7號、9號、10號菌株間也無拮抗反應(yīng)，親緣關(guān)系較近，與其他菌株間存在明顯的拮抗反應(yīng)。根據(jù)各菌株間有無拮抗反應(yīng)的情況，可將12個茶樹菇菌株分為5組，3號、8號、11號菌株各歸為1組，2號、4號、12號菌株歸為1組，1號、5號、6號、7號、9號、10號菌株歸為1組。

圖1 部分茶樹菇菌株間的拮抗反應(yīng)Fig.1 Antagonism reaction among some strains

2.2 不同菌株長勢和菌絲生長速度

茶樹菇不同菌株的菌絲長勢和生長速度見表3。

表3 不同菌株菌絲的長勢和生長速度Tab.3 Mycelial growth vigor and growth rate of different strains

試驗結(jié)果顯示，1號、4號、5號、6號、8號、9號和10號菌株長勢較好，菌絲潔白、粗壯、濃密；2號、3號、7號、11號和12號菌株菌絲長勢稍差，菌絲潔白、粗壯。6號、8號和9號菌株的菌絲生長速度最快，均為1.89 mm·d-1，其次是1號菌株，菌絲生長速度為1.85 mm·d-1，4個菌株之間差異不顯著；11號菌絲生長速度最慢，為1.61 mm·d-1；其余菌株生長速度在 1.67 mm·d-1～1.79 mm·d-1。

表4 不同菌株的子實體形態(tài)特征Tab.4 Fruiting body morphology character of different strains

2.3 不同菌株的子實體形態(tài)特征

不同菌株的子實體形態(tài)特征見表4，部分菌株的子實體形態(tài)見圖2。

從表4可以看出，供試12個茶樹菇菌株均為叢生。菌蓋顏色除3號是白色外，其余均為褐色或紅色，但有深淺之別。各菌株菌蓋直徑在2.08 cm～2.97 cm，其中1號、6號和9號菌株的菌蓋直徑最大，3個菌株間差異不顯著，但顯著高于其他菌株；3號菌株菌蓋直徑最小，平均為2.08 cm，顯著低于其他菌株。各菌株菌蓋厚度在0.97 cm～1.33 cm，其中1號菌株菌蓋厚度最大，平均為1.33 cm，與6號和9號菌株相比差異不顯著，但顯著高于其他菌株；2號和8號菌株的菌蓋厚度最小，分別為0.98 cm和0.97 cm。各菌株菌柄長度在13.42 cm～19.19 cm，其中9號菌株的菌柄長度最長，為16.19 cm，與3號、4號、5號、6號和8號菌株相比差異不顯著，與1號、2號、7號、10號、11號和12號菌株相比差異顯著；2號、11號和12號菌株的菌柄長度較短，均為13.50 cm左右。各菌株的菌柄直徑在0.66 cm～0.87 cm，其中3號、4號、6號和9號菌株的菌柄直徑最長，為0.85 cm～0.87 cm，與1號、2號、7號和8號菌株相比差異不顯著，與5號、10號、11號和12號菌株相比差異顯著；10號、11號和12號菌株的菌柄直徑最小，為0.67 cm～0.73 cm，均顯著低于其他菌株。

圖2 部分菌株的子實體形態(tài)Fig.2 Fruiting body morphology of some strains

2.4 不同菌株子實體的出菇溫度

由于定向選育的結(jié)果，茶樹菇的出菇溫度可分為不同溫型[4]，具體見表5。

由表5可以得出，1號菌株子實體適宜生長溫度為20℃～30℃，較其他菌株偏高；5號和10號菌株子實體生長適宜溫度較廣，為14℃～30℃；2號、8號和12號菌株子實體生長適宜溫度為18℃～28℃；3號、6號、9號和11號菌株子實體生長適宜溫度為16℃～26℃；4號和7號菌株子實體生長適宜溫度14℃～26℃，較其他菌株偏低。

2.5 不同菌株的產(chǎn)量和生物學(xué)效率

茶樹菇一般采收三潮至四潮菇，前兩潮菇的產(chǎn)量占到85%以上，對前兩潮鮮菇的產(chǎn)量進(jìn)行統(tǒng)計，結(jié)果見表6。

表5 不同菌株子實體的適宜生長溫度Tab.5 Suitable growth temperature of different strains in fruiting body formation stage

表6 不同菌株的產(chǎn)量和生物學(xué)效率Tab.6 The yield and biological efficiency of different strains

從表6可以看出，1號、4號、6號、8號和9號菌株的鮮菇產(chǎn)量較高，達(dá)到277.24 g/包～284.4 g/包，生物學(xué)效率為86.64%～88.88%，與其他菌株相比達(dá)到顯著差異；3號菌株產(chǎn)量最低，平均為205.94 g/包，生物學(xué)效率為64.35%，與其他菌株相比達(dá)到極顯著差異；其余菌株鮮菇產(chǎn)量在230.45 g/包～258.08 g/包，生物學(xué)效率為72.02%～80.65%。

3 結(jié)論

真菌的拮抗反應(yīng)是體細(xì)胞不親和的直接體現(xiàn)，也是最常用的食用菌菌種鑒定方法[5]。如果2個菌株的菌落有拮抗現(xiàn)象，表明是不同菌株；如果沒有拮抗現(xiàn)象，表明兩者可能是同一菌種，也存在不是同一菌種的可能[6]。通過拮抗試驗?zāi)軌虺醪絽^(qū)分和識別市場上不同來源的茶樹菇菌株。本研究中不同來源的12個茶樹菇菌株，通過拮抗試驗分為了5組，說明有些菌株親緣關(guān)系較近，可能為同一菌種。

通過對12個茶樹菇菌株農(nóng)藝性狀進(jìn)行的測定和分析，結(jié)果表明不同菌株的農(nóng)藝性狀存在顯著性差異，其中1號、4號、6號、8號和9號菌株的綜合性狀較好，菌絲生長速度快，子實體形態(tài)特征優(yōu)良，生物學(xué)效率均在86%以上，優(yōu)于其他菌株。3號菌株為白色品系，產(chǎn)量顯著低于其他菌株，為茶樹菇品種多樣性改良提供了育種材料。根據(jù)茶樹菇子實體生長的適宜溫度，在不同時間選擇適宜品種進(jìn)行栽培，既有利于茶樹菇的生長，又能減少資源的消耗，對利用自然條件栽培茶樹菇具有重要意義。供試的12個菌株中，1號和8號茶樹菇菌株綜合性狀優(yōu)良，子實體生長適宜溫度相對較高，可選擇在夏秋季栽培；4號菌株子實體生長的適宜溫度相對較低，綜合性狀優(yōu)良，可作為春季栽培的菌株。