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        混合質(zhì)控菌種盲樣的鑒定分析

        2019-07-18 09:25:20張春鵬徐州市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督綜合檢驗檢測中心
        食品安全導(dǎo)刊 2019年19期
        關(guān)鍵詞:盲樣沙門氏菌瓊脂

        □ 張春鵬 徐州市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督綜合檢驗檢測中心

        1 引言

        微生物盲樣考核是對檢測人員技能、實驗室質(zhì)量控制和管理水平的檢驗,實驗室專業(yè)技術(shù)人員必須考慮實驗室的設(shè)備、培養(yǎng)基、試劑、診斷血清等因素,從接種、培養(yǎng)、分離鑒定等環(huán)節(jié)進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制,減少主觀因素對檢驗結(jié)果的影響,進(jìn)而保證檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。在實驗評審過程中,特別是現(xiàn)場評審中,盲樣測試方式可以更直接地反映被評審實驗室的儀器設(shè)備和技術(shù)素質(zhì)的實際水平[1]。

        2 材料與方法

        2.1 微生物盲樣樣品

        樣品為來自CMA評審專家提供的半固體1支,盲樣編號為MY-WJ-01。盲樣中有兩種或以上菌株,且為食品檢測中常見的致病菌,要求最終報告得出的結(jié)果是所有檢出菌種的名稱。

        2.2 培養(yǎng)基及試劑

        培養(yǎng)基和細(xì)菌生化鑒定管,廣東環(huán)凱微生物科技有限公司;沙門氏菌診斷血清(60種),寧波天潤生物藥業(yè)有限公司;標(biāo)準(zhǔn)菌株,中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心;以上試劑均在有效期內(nèi)。

        2.3 主要儀器

        電熱恒溫水浴鍋(DZKW-D-4),北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司;生化培養(yǎng)箱(SPX-300BSH-II),上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司;厭氧培養(yǎng)箱(DG250),英國DWS;顯微鏡(BX41),奧林巴斯;全自動微生物生化鑒定儀(VITEK2)并配套革蘭氏陰性和革蘭氏陽性細(xì)菌鑒定卡,法國梅里埃;以上所有儀器設(shè)備檢定均在有限期內(nèi)。

        2.4 檢測方法

        食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)GB 4789及CMA評審專家提供的《致病菌檢測作業(yè)指導(dǎo)書》。

        3 結(jié)果與分析

        3.1 增菌培養(yǎng)

        挑取質(zhì)控樣接種到腦心浸出液肉湯(BHI)培養(yǎng)基中,接種兩瓶,分別放在生化培養(yǎng)箱和厭氧培養(yǎng)箱中以36℃培養(yǎng)24h,結(jié)果為兩瓶增菌液均混濁。

        表1 在不同選擇性瓊脂平板上的菌落特征

        表2 在三糖鐵斜面上的生長情況和革蘭氏染色結(jié)果

        3.2 劃線分離

        用接種環(huán)從增菌液中挑取1環(huán)直接劃線接種到BS瓊脂平板、XLD瓊脂平板、沙門氏菌屬顯色瓊脂平板、MAC瓊脂平板、TCBS瓊脂平板、血瓊脂平板、Barid-Parker瓊脂平板、哥倫比亞CNA血瓊脂平板、MYP瓊脂平板、PALCAM瓊脂平板、李斯特氏菌顯色瓊脂平板、CT-SMAC瓊脂平板、大腸埃希氏菌O157顯色瓊脂平板、阪崎腸桿菌顯色瓊脂平板、CN瓊脂平板,觀察菌落特征。在BS瓊脂平板、XLD瓊脂平板、沙門氏菌屬顯色瓊脂平板、血瓊脂平板和Barid-Parker瓊脂平板中發(fā)現(xiàn)2種不同的可疑菌落,分別編為1號菌和2號菌,菌落特征見表1。

        3.3 生化試驗 [2]

        挑取上述平板中的典型菌落接種到三糖鐵瓊脂斜面上,置36℃培養(yǎng)24h,觀察生化特征并涂片染色,結(jié)果見表2。

        1號菌繼續(xù)做其它相關(guān)生化試驗,結(jié)果符合沙門氏菌菌屬,結(jié)果見表3。然后,經(jīng)血清鑒定為鼠傷寒沙門氏菌(1,4,[5],12:i:1,2)。

        3.4 血漿凝固酶試驗[3]

        挑取Baird-Parker平板上的可疑菌落,接種到5mL BHI中,36℃±1℃培養(yǎng)18~24h。取新鮮配制兔血漿0.5mL,放入小試管中,再加入BHI培養(yǎng)物0.2~0.3mL,置于36℃±1℃培養(yǎng),每半小時觀察一次,觀察6h,同時作陰性對照實驗。結(jié)果發(fā)現(xiàn),培養(yǎng)物小試管中呈現(xiàn)凝塊,陰性對照未出現(xiàn)凝塊,因此可判定結(jié)果為陽性,故2號菌可判定為金黃色葡萄球菌。

        3.5 全自動微生物生化鑒定

        從營養(yǎng)瓊脂平板上挑取可疑菌落,用生理鹽水制備成0.5MCF濁度的菌懸液,1號菌和2號菌分別使用革蘭氏陰性和革蘭氏陽性細(xì)菌鑒定卡,置于VITEK2全自動微生物鑒定系統(tǒng)進(jìn)行分析,結(jié)果分別顯示為沙門氏菌和金黃色葡萄球菌。

        表3 1號菌生化試驗結(jié)果

        綜合以上細(xì)菌菌落特征、菌體染色形態(tài)、生化試驗、血清學(xué)和全自動生化鑒定結(jié)果,可判斷該盲樣樣品中檢出2種菌,即鼠傷寒沙門氏菌(1,4,[5],12:i:1,2)和金黃色葡萄球菌。

        4 結(jié)論與討論

        實驗室在收到樣品后,首先要對盲樣樣品狀態(tài)進(jìn)行確認(rèn),如出現(xiàn)包裝破損或其他異常情況應(yīng)及時與實施部門聯(lián)系,這是做好質(zhì)控盲樣的前提[4]。準(zhǔn)備檢測前,應(yīng)仔細(xì)閱讀《作業(yè)指導(dǎo)書》,盡可能制定全面的檢測方案。在分析鑒定過程中,應(yīng)選擇多種分離增菌液和選擇性瓊脂平板,并在選擇性平板上盡可能挑取各種典型菌落[5],以避免漏檢。為做好混合菌種質(zhì)控的鑒定分析工作,可采用常規(guī)生化試驗與全自動微生物生化鑒定儀相結(jié)合的方式[6],進(jìn)而保證對菌種的結(jié)果判定更為準(zhǔn)確、快捷。

        本次混合菌種鑒定項目取得了令人滿意的實驗結(jié)果。盲樣考核是開展CMA/CNAS認(rèn)證評審的重要內(nèi)容,利用盲樣測試進(jìn)行現(xiàn)場評審能直接反映出實驗室的儀器設(shè)備和技術(shù)素質(zhì)的實際水平和出具報告的能力[7],其不僅是衡量實驗室技術(shù)能力的關(guān)鍵指標(biāo),還有利于檢測機構(gòu)重視檢驗水平的提升,不斷提高專業(yè)技術(shù)人員的技能水平,確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

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