李玲姣 程曉娟 胡雄鵬 蘇春 童輝 龍昱

【摘要】[目的]探討補(bǔ)鋅對(duì)鄰苯二甲酸二（2-乙基）已酯（DEHP）致雄性大鼠睪丸萎縮的影響作用研究。[方法]選擇2周齡KM雄性小鼠25只隨機(jī)分組為5組：對(duì)照組（玉米油）、DEHP染毒組、低劑量鋅組、中劑量鋅組、高劑量鋅組。DEHP和鋅灌胃染毒，連續(xù)隔天灌胃30天，處死小鼠并迅速剝離睪丸組織，計(jì)算臟器系數(shù)，測(cè)定MDA.[結(jié)果]與玉米油對(duì)照組相比，DEHP雄鼠睪丸系數(shù)下降有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）;與DEHP組相比，玉米油、低劑量鋅、高劑量鋅組MDA下降有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）;與玉米油組相比，DEHP、中劑量鋅和高劑量鋅組MDA升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。鋅對(duì)睪丸組織脂質(zhì)過(guò)氧化損傷有一定的保護(hù)作用。[結(jié)論]補(bǔ)鋅對(duì)DEHP致睪丸萎縮有一定的保護(hù)作用。

【關(guān)鍵詞】鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯鋅生殖毒性

鄰苯二甲酸二乙基己酯[di-（2-ethylhexyl）phtha]ate，DEHP]屬于鄰苯二甲酸酯類（PAEs）化合物，是使用最廣和產(chǎn)量最大的塑化劑，以增加塑料的可塑性和韌性，提高塑料強(qiáng)度。廣泛用于油漆、橡膠管、血袋、化妝品、包裝食物的材料及小孩玩具等。DEHP與塑料之間是氫鍵或范德華力結(jié)合，易于擴(kuò)散至周?chē)h(huán)境中，造成空氣、水源和食物等污染。DEHP可通過(guò)飲食、呼吸、皮膚接觸等途徑進(jìn)入人體，長(zhǎng)期接觸可引起血液系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)及腎臟、肺臟等器官損害。DEHP對(duì)雄性生殖系統(tǒng)的損害最為顯著，其主要靶器官是睪丸，可影響性腺和生殖器官的發(fā)育，損害生殖功能。DEttP是一種典型的環(huán)境內(nèi)分泌干擾物（environmental endocrine disruptors，EEDs），具有擬雌激素或抗雄激素作用。DEHP可引起男/雄性動(dòng)物生殖內(nèi)分泌激素紊亂、睪丸萎縮、生精障礙等，然而，對(duì)于補(bǔ)鋅對(duì)DEHP致睪丸萎縮的影響作用研究較少，且結(jié)論尚不一致。因此，本研究采用DEHP染毒青春期雄性小鼠，觀察小鼠睪丸組織MDA水平變化以及臟器系數(shù)，探討補(bǔ)鋅對(duì)DEHP致雄性小鼠睪丸萎縮的影響。

一、材料與方法

（1）主要試劑與儀器。DEHP（分析純，無(wú)錫市亞泰聯(lián)合化工有限公司，中國(guó)）純度99.5%，溶劑為玉米油;硫酸鋅（國(guó)藥試劑集團(tuán)），丙二醛（malondialdehyde，MDA）檢測(cè)試劑盒（南京建成生物工程研究所，中國(guó)），電子天平、可見(jiàn)分光光度計(jì)、高速離心機(jī)、恒溫水浴鍋、灌胃器、EP管等。

（2）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。25只2周齡昆明小鼠，性別雄，體重25.5～35.5g。

（3）分組與處理。隨機(jī)分為5組，每組5只，依次為A組（玉米油對(duì)照組，10ml/kg）、B組（DEHP高劑量組，1000mg/kg）、c組[補(bǔ)低鋅組（1000mg/kgDEHP+15mg/kg鋅）]、D組[補(bǔ)中鋅組（1000mg/kgDEHP+30mg/kg鋅）]、E組[補(bǔ)高鋅組（1000mg/kgDEHP+60mg/kg鋅）]。連續(xù)隔天染毒30d。于末次染毒次日，頸部脫臼處死小鼠。

（4）指標(biāo)與方法。分離睪丸，除去其表面血漬并稱重，計(jì)算臟器系數(shù)。臟器系數(shù)（%）=[器官濕重（g）/體重（g）]×100%。丙二醛含量通過(guò)硫代巴比妥酸法（TRA）測(cè)定;10%睪丸組織勻漿與試劑95℃水浴40min，3500r/min離心10min，取上清液532nm處測(cè)吸光度（A）值。

（5）統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)用x±s表示，采用SPSS20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用最小顯著差法，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、結(jié)果

（1）臟器系數(shù)的變化。

（2）MDA的變化。

與DEHP組比較*p<0.05：與玉米油相比#P<0.05，與DEHP組相比，低劑量、中劑量和高劑量鋅組體重下降均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），與玉米油組相比，高劑量鋅組體重下降有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）;與DEHP組相比，玉米油睪丸臟器系數(shù)升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），與玉米油相比，DEHP和低中高劑量鋅組下降均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。與DEHP組相比，玉米油、低劑量鋅、高劑量鋅組MI）A下降有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）;與玉米油組相比，DEHP、中劑量鋅和高劑量鋅組MDA升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。

三、討論

正常狀態(tài)下臟器系數(shù)比值恒定，動(dòng)物在某些因素暴露后因臟器受損可能發(fā)生變化，臟器系數(shù)增大見(jiàn)于臟器充血、水腫或增生肥大等，減小則是由于臟器萎縮和其他退行性改變。本研究結(jié)果表明，DEHP組睪丸系數(shù)較溶劑對(duì)照組有所降低，提示睪丸是DEHP作用的靶器官?；钚匝酰╮eactive oxygen species，ROS）在許多生理過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，常作為第二信使調(diào)節(jié)細(xì)胞的氧化還原反應(yīng)，ROS還可作用于多不飽和脂肪酸，引起脂質(zhì)過(guò)氧化作用，產(chǎn)生過(guò)氧化自由基（如M1）A），MDA的高低可以反映機(jī)體的脂質(zhì)過(guò)氧化程度和機(jī)體受自由基攻擊的程度。本次研究表示：DEHP組的MDA較溶劑對(duì)照組有所升高，補(bǔ)低劑量鋅和高劑量鋅的MDA較DEHP組有所下降。鋅是機(jī)體必需微量元素之一，與生殖系統(tǒng)發(fā)育和功能密切相關(guān)，本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)DEHP+硫酸鋅組，對(duì)預(yù)防DEHP導(dǎo)致的睪丸毒性損傷作初步研究。實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)：補(bǔ)低劑量鋅能在一定程度上改善DEHP致睪丸萎縮的影響。

以上結(jié)果提示適量鋅對(duì)DEHP所導(dǎo)致的睪丸生殖毒性作用有拮抗和逆轉(zhuǎn)效應(yīng)，相關(guān)機(jī)制有待進(jìn)一步研究。