丁愛君等

摘? 要：為比較來源不同廠家的重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗在哈伯德父母代肉種雞上的應(yīng)用效果，通過頸部皮下注射21日齡和50日齡的哈伯德父母代肉種雞，免疫后1周、2周、3周采血并分別檢測(cè)H5（Re-8）、H7（Re-1）的抗體滴度，同時(shí)比較其抗體消長規(guī)律。試驗(yàn)結(jié)果表明，不同廠家疫苗在H5亞型的免疫效果應(yīng)答上存在差異顯著，在加強(qiáng)免疫后的免疫應(yīng)答也差異顯著;在H7亞型的免疫應(yīng)答上差異顯著，加強(qiáng)免疫后免疫效果差異不顯著。

關(guān)鍵詞：禽流感H5;禽流感H7;滅活疫苗;抗體滴度;效果評(píng)估

許多養(yǎng)殖場(chǎng)在疫苗免疫方面有一些不妥行為，包括有的沒有實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)疫苗免疫后的抗體滴度，有的未系統(tǒng)地對(duì)疫苗免疫應(yīng)答進(jìn)行有效地跟蹤檢測(cè)，有的使用了不合格疫苗產(chǎn)品，有的免疫程序設(shè)計(jì)不合理，導(dǎo)致許多養(yǎng)殖場(chǎng)疫苗免疫失敗，使雞群不能產(chǎn)生有效的抗體保護(hù)。近幾年H5N1亞型禽流感病毒傳播有擴(kuò)散的趨勢(shì)，2017年秋季H7N9禽流感疫苗作為新疫苗被批準(zhǔn)使用，這些都需要通過實(shí)驗(yàn)室抗體滴度進(jìn)行疫苗免疫效果評(píng)估。因著選擇適宜的疫苗對(duì)家禽的安全生產(chǎn)具有重要意義，本試驗(yàn)選擇了三個(gè)廠家的重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗進(jìn)行試驗(yàn)，通過在21日齡首免和50日齡加強(qiáng)免疫，對(duì)禽流感疫苗進(jìn)行免疫效果評(píng)估。本試驗(yàn)采集免疫后血清通過血凝抑制抗體水平評(píng)估來源不同廠家疫苗的免疫應(yīng)答效果，并對(duì)抗體水平的消長規(guī)律進(jìn)行分析。

1? 試驗(yàn)材料

1.1? 疫苗來源? 三個(gè)廠家生產(chǎn)的疫苗：A廠家生產(chǎn)的重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗，批號(hào)2018092;B廠家生產(chǎn)的重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗，批號(hào)2018146;C廠家生產(chǎn)的重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗，批號(hào)2018029。

1.2? 雞群分組? 試驗(yàn)雞群隨機(jī)分為三個(gè)組，每組一個(gè)重復(fù)。三組為A廠家組、B廠家組、C廠家組。疫苗免疫采取頸部皮下的注射方法接種，免疫劑量首免每羽0.3ml，加強(qiáng)免疫每羽0.5ml。試驗(yàn)雞群21日齡進(jìn)行首免，在免疫后1周、2周、3周分別采血;試驗(yàn)雞群50日齡進(jìn)行加強(qiáng)免疫，在免疫后1周、2周、3周分別采血。試驗(yàn)雞群是來自同一種群的哈伯德父母代肉種雞，在同一場(chǎng)區(qū)按照相同的飼養(yǎng)管理模式進(jìn)行管理，每個(gè)舍的飼養(yǎng)規(guī)模為11000羽。其他疫苗按照常規(guī)免疫程序執(zhí)行。

2? 試驗(yàn)方法

2.1? 方法? 血凝和血凝抑制試驗(yàn)方法檢測(cè)滅活疫苗免疫后的H5（Re-8）、H7（Re-1）的抗體滴度，參照GB/T14926.53-2001血凝試驗(yàn)、GB/T14926.54-2001血凝抑制試驗(yàn)執(zhí)行。

2.2? 血清采集? 重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗在雞群21日齡免疫，血清采集免疫后的1周（雞群28日齡）、2周（雞群35日齡）、3周（雞群42日齡），加強(qiáng)免疫在雞群50日齡免疫，血清采集免疫后的1周（雞群57日齡）、2周（雞群64日齡）、3周（雞群71日齡）。每組按照40羽的采樣數(shù)量隨機(jī)抽樣，翅靜脈采血，標(biāo)明組別、樣品數(shù)、種雞品種，待析出血清后及時(shí)分離血清凍存，最后一次采樣結(jié)束后，同時(shí)對(duì)所有的抽樣血清進(jìn)行H5（Re-8）、H7（Re-1）的抗體滴度檢測(cè)。

2.3? 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析? 將測(cè)定的H5（Re-8）、H7（Re-1）抗體滴度的數(shù)據(jù)，用Microsoft Excel軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及作圖，并用SPSS Statistics19.0數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析軟件中的單因素ANOVA分析處理。

3? 試驗(yàn)結(jié)果及分析

3.1? H5（Re-8）抗體的測(cè)定結(jié)果? H5（Re-8）抗體在疫苗首免后1周（28日齡）時(shí)，B廠家組抗體滴度最高，A、B、C廠家三組間抗體滴度結(jié)果差異顯著（P<0.05），首免后2周（35日齡）B廠家組抗體滴度最高，B廠家和C廠家抗體滴度結(jié)果差異不顯著（P>0.05），A廠家和B、C廠家抗體滴度結(jié)果差異顯著（P<0.05）;首免后3周（42日齡）B廠家組抗體滴度最高，A、B、C廠家三組抗體滴度結(jié)果差異顯著（P<0.05）。H5（Re-8）抗體在相同廠家疫苗加強(qiáng)免疫后1周（57日齡）時(shí)，B廠家組抗體滴度最高，A廠家和C廠家抗體滴度結(jié)果差異不顯著（P>0.05），B廠家和A、C廠家抗體滴度結(jié)果差異顯著（P<0.05）;加強(qiáng)免疫后2周（64日齡）時(shí)，B廠家組抗體滴度最高，A廠家和B廠家抗體滴度結(jié)果差異顯著（P<0.05），A、C廠家抗體滴度結(jié)果差異不顯著（P>0.05）B、C廠家抗體滴度結(jié)果差異不顯著（P>0.05）;加強(qiáng)免疫后3周（71日齡）時(shí)，B廠家組抗體滴度最高，滴度結(jié)果差異顯著性同10周的抗體結(jié)果。H5亞型（Re-8）抗體的含量見表1。

從圖1 H5亞型（Re-8）抗體滴度（Log2）消長規(guī)律可以明顯地看出A、B、C廠家組三組抗體滴度的變化，疫苗首免后B廠家組免疫抗體最高，優(yōu)于A、C廠家組，C廠家組免疫抗體高于A廠家組;加強(qiáng)免疫后B廠家組抗體滴度最高，優(yōu)于A、C廠家組，C廠家組抗體滴度高于A廠家組。詳見圖1。

3.2? H7（Re-1）抗體的測(cè)定結(jié)果? H7（Re-1）抗體在疫苗首免后1周（28日齡）A廠家組抗體滴度最高，A、B、C廠家三組抗體滴度結(jié)果差異顯著（P<0.05），首免后2周（35日齡）A廠家組抗體滴度最高，A廠家和B廠家抗體滴度結(jié)果差異不顯著（P>0.05），B廠家和C廠家抗體滴度結(jié)果差異不顯著（P>0.05），A廠家和C廠家抗體滴度結(jié)果差異顯著（P<0.05）;首免后3周（42日齡）C廠家組抗體滴度最高，B廠家和C廠家抗體滴度結(jié)果差異不顯著（P>0.05），A廠家和B、C廠家抗體滴度結(jié)果差異顯著（P<0.05）。H7（Re-1）抗體在相同廠家疫苗加強(qiáng)免疫后1周（57日齡）C廠家組抗體滴度最高，A廠家和C廠家抗體滴度結(jié)果差異顯著（P<0.05），A廠家和B廠家抗體滴度結(jié)果差異不顯著（P>0.05），B廠家和C廠家抗體滴度結(jié)果差異不顯著（P>0.05）;加強(qiáng)免疫后2周（64日齡）A、B廠家組相同抗體滴度最高，A、B、C廠家三組抗體滴度結(jié)果差異不顯著（P>0.05）;加強(qiáng)免疫后3周（71日齡）B廠家組抗體滴度最高，A、B、C廠家三組抗體滴度結(jié)果差異不顯著（P>0.05）。H7（Re-1）抗體的含量見表2。

從圖2可以很明顯的看出A、B、C廠家生產(chǎn)的疫苗的H7（Re-1）的抗體滴度（Log2）的消長規(guī)律，疫苗首免后A廠家的免疫應(yīng)答最快，B廠家、C廠家組在免疫3周時(shí)稍高于A廠家;加強(qiáng)免疫后A、B、C廠家的抗體滴度曲線基本一致，見圖2。

4? 討論和結(jié)論

4.1? 討論? 為了解雞群免疫不同廠家疫苗產(chǎn)生抗體滴度是否有差異，同時(shí)也為哈伯德父母代肉種雞禽流感疫苗的選擇提供科學(xué)依據(jù)，我們開展重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗免疫效果評(píng)估。因?yàn)椴煌瑥S家疫苗抗原含量、生產(chǎn)工藝、免疫佐劑以及保存運(yùn)輸?shù)确矫娴脑?，?huì)導(dǎo)致疫苗質(zhì)量會(huì)存在一些差異。不同品種的雞群對(duì)疫苗的免疫應(yīng)答也不同。因?yàn)樵囼?yàn)結(jié)果對(duì)疫苗廠家的影響較大，免疫效果評(píng)價(jià)結(jié)果比較敏感，故用A、B、C來區(qū)分不同的疫苗廠家。此次試驗(yàn)是評(píng)估三個(gè)疫苗廠家生產(chǎn)的重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗在哈伯德父母代種雞2次接種免疫后的綜合免疫效果。免疫后H5亞型（Re-8）抗體滴度，疫苗首免后2周的抗體滴度≥4Log2符合免疫抗體保護(hù)標(biāo)準(zhǔn)。H5亞型（Re-8）抗體首免后B廠家組免疫抗體最高抗體滴度為8.23Log2，C廠家組次之，抗體滴度為7.10Log2，均高于A廠家組;加強(qiáng)免疫后B廠家組抗體滴度最高為11.68Log2;A、C廠家組在免疫后1周抗體水平基本一致，在免疫后2周C廠家組抗體滴度（10.87Log2）逐漸稍高于A廠家組的10.11Log2。免疫后H7（Re-1）抗體滴度，疫苗首免后2周的抗體≥6Log2，符合免疫抗體保護(hù)標(biāo)準(zhǔn)。疫苗首免后A廠家免疫應(yīng)答最快，2周高達(dá)7.02Log2，在免疫3周時(shí)B廠家組的抗體滴度7.50Log2、C廠家組的7.63Log2均高于A廠家;在加強(qiáng)免疫后，A、B、C廠家的抗體滴度都達(dá)到11Log2，免疫抗體滴度基本一致。

試驗(yàn)結(jié)果顯示：三個(gè)疫苗廠家的疫苗均能產(chǎn)生很好的免疫效果，達(dá)到疫苗免疫的保護(hù)要求。

4.2? 結(jié)論? 選擇合適的疫苗并對(duì)疫苗的免疫效果進(jìn)行評(píng)估尤其重要。定期開展禽流感的流行病學(xué)調(diào)查和疫苗的免疫效果評(píng)估具有重要的臨床指導(dǎo)意義，有報(bào)道稱免疫抗體高的雞群對(duì)病毒感染的抵抗力更強(qiáng)，造成的產(chǎn)蛋率、死亡率影響較低。在易感季節(jié)，加強(qiáng)消毒防疫措施和生物安全措施能有效阻斷病毒入侵，對(duì)提高機(jī)體免疫抗體滴度的整齊度和高度尤其重要。