陳志敏,胡昌江*,胡麟
黃精始載于《名醫(yī)別錄》[1],為百合科植物滇黃精PolygonatumkingianumColl.etHemsl.、黃精PolygonatumsibiricumRed.或多花黃精PolygonatumcyrtonemaHua的干燥根莖[2]。生黃精有麻舌感,且刺激咽喉,通過炮制不僅增強了黃精的補脾潤肺益腎的功能,還可以去除麻舌感,避免刺激咽喉。自古以來有關(guān)黃精炮制方法較多,但均以九蒸九曬為主流。九制黃精作為川幫重要的炮制品,具有巨大的藥用及保健價值,但由于其操作工藝復(fù)雜且缺乏明確的工藝參數(shù),限制了工業(yè)大生產(chǎn),導(dǎo)致市場九制黃精幾近失傳?,F(xiàn)四川省中藥飲片炮制規(guī)范所載制黃精為蒸制5~8小時,缺乏完整工藝參數(shù)。因此,有必要對九制黃精的炮制工藝進行研究,使九制黃精適用于工業(yè)化生產(chǎn)工藝,更好地傳承炮制技藝。
UV-1100紫外可見分光光度計(上海天美科學(xué)儀器有限公司);BP211D電子天平(感量0.01 mg),BS200S電子天平(感量0.001 g),德國Sartorius公司;正德牌遠(yuǎn)紅外可控溫電爐(功率45~2000W);不銹鋼手提式高壓滅菌鍋(型號:YX-280B,執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn):YZB-皖0037-2005)。
黃精藥材購于荷花池藥材市場,經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)胡昌江教授鑒定為滇黃精PolygonatumkingianumColl.et Hemsl.的干燥根莖,各檢查項均符合藥典規(guī)定,藥材質(zhì)量合格,可用于炮制工藝和藥效學(xué)的研究。黑豆購于溫江菜市場,經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)胡昌江教授鑒定為豆科植物大豆Glycine max(L.)Merr.的干燥成熟種子。D-無水葡萄糖(批號:110833-201506)、黃精對照藥材(批號:121341-201404)、滇黃精對照藥材(批號:120998-201004)和黃精(制)對照藥材(批號:121553-201202),中國食品藥品檢定研究院。95%乙醇、正丁醇、甲醇、石油醚(60-90℃)、乙酸乙酯、甲酸、香草醛、硫酸、蒽酮,均購于成都科龍化工試劑廠。
按《中國藥典》2015年版通則2201熱浸法對水溶性和醇溶性(以稀乙醇作溶劑)浸出物進行測定。
2.2.1 對照品溶液的制備…取經(jīng)105 ℃干燥至恒重的無水葡萄糖對照品0.03291 g,置100 mL量瓶中,加水溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得(每1 mL中含無水葡萄糖0.3291 mg)。
2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備…精密量取對照品溶液0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL,分別置10 mL具塞刻度試管中,各加水至2.0 mL,搖勻,在冰水浴中緩緩滴加0.2 %蒽酮-硫酸溶液至刻度,混勻,放冷后置水浴中保溫10分鐘,取出,立即置冰水浴中冷卻10分鐘,取出,以相應(yīng)試劑為空白。照紫外-可見分光光度法(通則0401),在582 nm波長處測定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo),濃度(mg.mL-1)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到回歸方程為:Y=24.899X+0.0479,r=0.9992。結(jié)果表明葡萄糖在0.003291~0.019746 mg.mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
2.2.3 供試液制備及測定…取60 ℃干燥至恒重的樣品細(xì)粉約0.25 g,精密稱定,置圓底燒瓶中,加80%乙醇150 mL,置水浴中加熱回流1 h,趁熱濾過,殘渣用80%熱乙醇洗滌3次,每次10 mL,將殘渣及濾紙置燒瓶中,加水150 mL,置沸水浴中加熱回流1 h,趁熱濾過,殘渣及燒瓶用熱水洗滌4次,每次10 mL,合并濾液與洗液,放冷,轉(zhuǎn)移至250 mL量瓶中,加水至刻度,搖勻。精密量取1 mL,置10 mL具塞干燥試管中,照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下的方法,自“加水至2.0 mL”起,依法測定吸光度,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中含無水葡萄糖的重量(mg),計算,即得。
2.3.1 對照品溶液的制備…取干燥至恒重的葡萄糖對照品50.05 mg,置50 mL容量瓶中,加蒸餾水溶解定容至刻度,搖勻即得(每1 mL中含無水葡萄糖1.001 mg)。精密量取對照品溶液0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1 mL用蒸餾水定容至10 mL,即得每l mL含葡萄糖為0.01001,0.02002,0.04004,0.06006,0.08008,0.1001 mg的對照液,備用。
2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備…精密量取對照品溶液各2 mL置具塞刻度試管中,在冰水浴中緩緩滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液5 mL,混勻,放冷后置水浴中保溫10 min,取出,再置冰水浴中冷卻5 min,以相應(yīng)試劑為空白。照紫外-可見分光光度法,在620 nm波長處測定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo),濃度(ug.mL-1)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到回歸方程為:Y=23.204X+0.0070,r=0.9991。結(jié)果表明葡萄糖在0.00286~0.0286 mg.mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
2.3.3 供試液制備及測定…取樣品粉末約各1 g,精密稱定,加入蒸餾水50 mL,超聲提取兩次,每次30 min,靜置10 min,濾過,合并濾液,濃縮并定容至50 mL,精密吸取供試液1 mL,用蒸餾水定容至10 mL得供試液。精密吸取2.3.3項下供試液2 mL,置具塞干燥試管中,照2.3.2項下的方法,依法測定吸光度,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中含無水葡萄糖的重量(mg),計算,即得。
參考九制黃精的傳統(tǒng)制備方法:黃精用量20%的黑豆熬汁,分為九份,第一次取一份黑豆汁用水稀釋后與黃精藥材拌勻,潤至透心,圓氣后蒸至數(shù)小時(蒸制過程注意收集黃精汁),取出曬至微干,第二份黑豆汁再以收集的黃精汁液稀釋后拌入(十分重要,此步關(guān)系黃精內(nèi)在成分含量),混勻,再蒸再曬,如此反復(fù)九次蒸至內(nèi)外呈滋潤黑色,切制干燥即得。在每蒸曬一次的過程中都留下一份樣品,分別定名為一制黃精、二制黃精、……、九制黃精。九制黃精由于工藝繁瑣,費時費力,生產(chǎn)周期長,消耗燃料多,并且在蒸制過程中藥汁易流失,不適于大生產(chǎn),因此生產(chǎn)該炮制品的廠家日益減少,處于瀕臨滅絕的境地,故市場上該炮制品種嚴(yán)重匱乏。
表1 生黃精~一至九制黃精的含量測定(n=3)
結(jié)果表明:黃精蒸制后,水、醇浸出物含量均有增加,說明黃精經(jīng)炮制后,藥物的成分溶出增多,利于其藥效的發(fā)揮,且其浸出物隨蒸制時間延長而遞增。一至九制黃精的多糖含量隨著蒸曬次數(shù)的增多而減少,總糖的含量隨著蒸曬次數(shù)的先增多后降低,這可能是因為蒸制使多糖大量水解,增加了溶解率,隨后的降低可能是多糖水解產(chǎn)生了大量的單糖和游離氨基酸,游離氨基與還原糖生成糖胺,經(jīng)Amadori重排形成Amadori中間產(chǎn)物,該中間產(chǎn)物繼續(xù)反應(yīng)最終形成呋喃和5-HMF[4]。
在單因素和文獻查閱的基礎(chǔ)上,以外觀性狀、浸出物、多糖、總糖等為實驗指標(biāo),按L9(34)正交實驗考察壓制溫度、時間和次數(shù),優(yōu)選高壓蒸制黃精的工藝,因素水平見表2。
表2 正交實驗因素及水平設(shè)計
根據(jù)所測成分在黃精中的重要性對試驗進行綜合評分,糖類成分是黃精的主要成分,且多糖為《中國藥典》規(guī)定的黃精的指標(biāo)成分;而浸出物可以判斷黃精的煎出率,又因外觀性狀是對黃精炮制鑒別的傳統(tǒng)方法。因此,考慮多糖30%、總糖25%、水溶性浸出物 20%、醇溶性浸出物 20%、外觀性狀5%的權(quán)重,于是每號試驗的綜合評分=多糖隸屬度×30%+單糖及低聚糖隸屬度×25%+水浸出物隸屬度×20%+醇浸出物隸屬度×20%+外觀形狀及×5%,滿分為 1.00。結(jié)果見表3、表4。
表3 正交試驗設(shè)計表及結(jié)果
6 69.33 71.89 7.28 57.66 8 0.43 7 75.77 78.86 7.68 64.24 9 0.99 8 72.11 76.54 7.57 61.57 8 0.76 9 69.98 71.01 7.23 54.57 8 0.35 K1 0.21 0.46 0.55 K2 0.76 0.54 0.42 K3 0.33 0.30 0.34 R 0.55 0.24 0.21
表4 方差分析表
由表4中極差R值可知,各因素的作用為:A>B>C,方差分析可知因素A、B和C均對試驗結(jié)果有顯著性影響。根據(jù)A因素水平的均數(shù)估計,因綜合評分指標(biāo)越大越好,水平2的均數(shù)值0.76最大,故A因素取水平2好。類似分析B因素取水平2均可,C因素取水平1好,為A2B2C1,即九制黃精的最佳工藝為120 ℃高壓,2 h,壓制一次即可。
按照上述黃精的最佳炮制工藝,取另外購買批次黃精200 g,加入20%的黑豆熬汁,潤透,120 ℃高壓壓制2 h,取出切成小丁狀,烘箱干燥,制成高壓黃精飲片。所獲飲片表面黑色,有光澤。中心深褐色,質(zhì)柔韌,味甜,嚼之黏性足的成品。實驗室泡服,口感好,無生品的副作用,并與生品和傳統(tǒng)方法相比較,高壓黃精與九制黃精差異不大,且糖類含量較高,表明工藝操作簡便,合理可控。結(jié)果見表5。
表 5 高壓黃精和傳統(tǒng)九制黃精質(zhì)量對比
黃精藥食同源,具有極高的食療和藥療價值,并被諸家養(yǎng)生所推崇[5]。黑豆享有“豆中之王”[6]的美稱,其諸多作用與黃精現(xiàn)代藥理作用相似,利用黑豆九制黃精,可使有效成分富集,增強療效。九制黃精,是黃精以黑豆汁為輔料,經(jīng)九蒸九曬后,不僅可以破壞粘液質(zhì)以消除“戟人咽喉”的副作用,而且可以轉(zhuǎn)變藥性,利于有效成分積累,使其滋而不膩,增強補肝腎作用。
傳統(tǒng)九制黃精炮制方法費工耗時,同時化學(xué)成分損失嚴(yán)重,雖消除刺激性也帶走很多有效成分。本文對其進行高壓工藝改革,優(yōu)選出新的炮制工藝,其操作簡便省時,有利于工業(yè)化大生產(chǎn)。但還未進行系統(tǒng)全面的藥效學(xué)驗證,尚需進一步深入分析。