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        基于低場(chǎng)核磁共振技術(shù)的咸鴨蛋腌制過(guò)程水分及質(zhì)構(gòu)特性變化

        2019-04-24 09:18:54張文豪鄭素玲齊安琪
        食品與機(jī)械 2019年2期
        關(guān)鍵詞:咸鴨蛋蛋清質(zhì)構(gòu)

        龍 門(mén) 張文豪 鄭素玲 齊安琪 詹 歌

        (1. 滁州學(xué)院生物與食品工程學(xué)院,安徽 滁州 239000;2. 滁州市食品加工研究院,安徽 滁州 239000)

        咸鴨蛋是中國(guó)傳統(tǒng)蛋制品,其蛋黃沙糯的質(zhì)地和咸香的風(fēng)味深受消費(fèi)者喜愛(ài),除直接食用外,也被廣泛用于中國(guó)傳統(tǒng)食品——月餅、粽子等中[1]。質(zhì)構(gòu)特性和鹽含量是咸鴨蛋成熟的重要品質(zhì)特性,目前研究主要集中在腌制工藝對(duì)其凝膠強(qiáng)度、持水性和鹽含量等指標(biāo)的影響[2];同時(shí)不同的腌制環(huán)境(溫度、濕度)對(duì)咸鴨蛋成熟期有顯著的影響,而凝膠強(qiáng)度、持水性和鹽含量等指標(biāo)的測(cè)定都需要對(duì)咸蛋進(jìn)行破壞性檢測(cè),檢測(cè)周期長(zhǎng),且造成原料損耗。低場(chǎng)核磁共振技術(shù)( low-field nuclear magnetic resonance,LF-NMR)可通過(guò)測(cè)定水分子的弛豫特性T2、與食品組分的結(jié)合狀態(tài)判斷食品中自由水、結(jié)合水、不易流動(dòng)水的遷移[3-4],同時(shí)可獲得氫離子密度圖像,分析食品中不同水分的分布狀況[5-6]。目前,LF-NMR技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于肉制品、果蔬、面制品等食品領(lǐng)域。秦影等[7]在對(duì)大黃魚(yú)魚(yú)糜的研究中發(fā)現(xiàn),水分狀態(tài)及含量與質(zhì)構(gòu)指標(biāo)和保水率之間存在相關(guān)性,鹽離子對(duì)魚(yú)糜凝膠的強(qiáng)度、顯微結(jié)構(gòu)和水分分布都有影響[8];徐雷等[9]研究表明雞蛋的氣室高度、蛋黃指數(shù)等與弛豫參數(shù)之間存在相關(guān)性,可利用弛豫參數(shù)預(yù)測(cè)雞蛋的貨架期,也有學(xué)者[10]發(fā)現(xiàn)白煮蛋表觀品質(zhì)的變化與蛋清和蛋黃中水分分布的變化相關(guān)。咸蛋在腌制過(guò)程中蛋清和蛋黃的質(zhì)構(gòu)特性可能受到鹽離子的影響,同時(shí)又與其水分狀態(tài)及含量變化相關(guān)。

        目前關(guān)于結(jié)合LF-NMR技術(shù)研究腌制食品在加工過(guò)程中水分分布及品質(zhì)變化規(guī)律的報(bào)道甚少?;诖?,本研究擬利用該技術(shù)深入分析咸鴨蛋在腌制過(guò)程中水分分布變化規(guī)律及品質(zhì)的變化,以期應(yīng)用低場(chǎng)核磁技術(shù)預(yù)測(cè)咸鴨蛋成熟度和品質(zhì),以拓展此技術(shù)在腌制類(lèi)食品品質(zhì)評(píng)價(jià)中的應(yīng)用。

        1 材料與方法

        1.1 材料與試劑

        氯化鈉、硝酸銀:分析純,天津科密歐化學(xué)試劑有限公司;

        硝酸、乙醇、硫酸鐵銨、硫氰酸鉀、亞鐵氰化鉀、乙酸鋅:分析純,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;

        冰乙酸:分析純,天津市津東天正精細(xì)化學(xué)試廠;

        食鹽:食品級(jí),市售;

        新鮮鴨蛋:滁州市白云超市。

        1.2 儀器與設(shè)備

        物性測(cè)試儀:TA-XTplus型,英國(guó)Stasle Micro System公司;

        恒溫加熱磁力攪拌器:Cy-2型,鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司;

        快速水分測(cè)定儀:M2-08型,杭州科博儀器有限公司;

        電子天平:JA5003J型,上海越平科學(xué)儀器有限公司;

        電子分析天平:FA2204B型,上海越平科學(xué)儀器有限公司;

        低場(chǎng)核磁:MeSONMRI3-060V-I型,蘇州(上海)紐邁電子科技有限公司;

        料理機(jī):C010-7067型,九陽(yáng)股份有限公司;

        多功能電磁爐:C21-ST2125型,廣東美的生活電器制造有限公司。

        1.3 試驗(yàn)方法

        1.3.1 咸鴨蛋腌制工藝 按質(zhì)量比為5∶4將洗凈晾干的鴨蛋放入20%的食鹽腌制液中,最上層壓以適量重物以保證所有鴨蛋都浸沒(méi)在腌制液中,在(20±5) ℃下進(jìn)行腌制,每隔3 d翻動(dòng)原料蛋1次。每隔5 d隨機(jī)選取一定數(shù)量的咸鴨蛋,將咸鴨蛋用溫開(kāi)水洗凈后,放于沸水的蒸籠上蒸20 min,測(cè)定各項(xiàng)理化指標(biāo)。

        1.3.2 水分測(cè)定 按GB 5009.3—2016的直接干燥法執(zhí)行。

        1.3.3 NaCl測(cè)定 按GB 5009.44—2016的間接沉淀滴定法執(zhí)行。

        1.3.4 低場(chǎng)核磁共振分析方法 根據(jù)Aursand等[11]的方法略作修改:分別取一定質(zhì)量(m)的蛋清凝膠或蛋黃凝膠放入直徑60 mm的玻璃試管中,將樣品管置于NMR探頭中(保持溫度32 ℃),使用CPMG序列測(cè)試橫向弛豫時(shí)間T2,測(cè)試條件:接收機(jī)帶寬100 kHz,采樣起始點(diǎn)控制參數(shù)0.200 ms,重復(fù)采樣時(shí)間間隔2 500.000 ms,模擬增益 10.0 db,90°和 180°脈寬分別為16, 31 μs,采樣點(diǎn)數(shù)469 804,數(shù)字增益2,數(shù)據(jù)半徑1,累加掃描次數(shù)8,回波個(gè)數(shù)18 000。試驗(yàn)取4份平行,每份平行測(cè)3次。然后對(duì)其進(jìn)行反演,得到T2譜圖,對(duì)峰面積進(jìn)行累計(jì)積分,得到峰面積A。

        1.3.5 低場(chǎng)核磁成像分析方法 根據(jù)劉斯琪[12]的方法略微修改:將咸鴨蛋洗凈后置于NMR探頭中(保持溫度32 ℃),采用多層自旋回波序列(Multi-Slice Echo,MSE)進(jìn)行質(zhì)子加權(quán)成像,Y軸為選層梯度,X軸為相位梯度,Z軸為讀出梯度,90°和 180°軟脈沖均為20.000 ms,重復(fù)采樣時(shí)間為500.000 ms,半回波時(shí)間為20.000 ms,選層梯度脈沖(90°)對(duì)應(yīng)的補(bǔ)償梯度為1.4%,選層梯度脈沖(180°)對(duì)應(yīng)的補(bǔ)償梯度脈沖為6.6%。

        1.3.6 質(zhì)構(gòu)分析方法 將冷卻到室溫的蛋清或者蛋黃切成近似20 mm×20 mm×20 mm的正方體,采用物性測(cè)試儀測(cè)定其質(zhì)構(gòu)參數(shù)。使用型號(hào)為P/36R探頭對(duì)樣品進(jìn)行連續(xù)兩次50%的擠壓。測(cè)定條件:測(cè)前速度1 mm/s;測(cè)試速度4 mm/s;測(cè)后速度4 mm/s;壓縮程度50%;停留時(shí)間5 s;數(shù)據(jù)采集速率400 pps;觸發(fā)值0.196 N。

        1.3.7 持水力測(cè)定 參考Kocher等[13]的方法并略有修改,取3 g冷卻到室溫蛋清凝膠樣品加入離心管中,12 000 r/min 離心15 min,去除離心出的水分,稱(chēng)量凝膠質(zhì)量。按式(1)計(jì)算持水性:

        WCH=(m1-m0)÷(m2-m0)×100%,

        (1)

        式中:

        WCH——凝膠持水力,%;

        m1——離心后凝膠質(zhì)量,g;

        m0——離心管質(zhì)量,g;

        m2——離心前凝膠質(zhì)量,g。

        1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理

        所有數(shù)據(jù)利用Microsoft Excel進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理,采用Origin 9.0進(jìn)行作圖分析。不同平均值之間用SAS 8.2(SAS Institute Inc, Cary, North Carolina, USA)統(tǒng)計(jì)軟件的GLM程序(General Linear Model procedure)中的鄧肯氏多重比較法(Duncan' s Multiple Range Test)進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 咸鴨蛋腌制過(guò)程中鹽分和水分的變化

        由圖1可知,腌制過(guò)程中,蛋清與蛋黃中水分含量顯著降低(P<0.05),而鹽分含量顯著上升(P<0.05),在腌制后期變化逐漸趨于平緩。腌制過(guò)程中,水分和鹽離子從蛋殼上的空隙遷出和遷入,蛋黃中水分的降低程度大于蛋清,而鹽分含量的升高程度小于蛋清,可能是由于:① 蛋清和蛋黃中水分含量的差異導(dǎo)致滲透壓不同,物質(zhì)遷移的速率不同; ② 物質(zhì)遷移過(guò)程中遇到的阻力不同,對(duì)遷移速率的影響不同,蛋黃的密度相比于蛋清更高,內(nèi)部的脂肪等物質(zhì)對(duì)鹽分的阻滯力度更大[14-15];③ 蛋清和蛋黃中不同的蛋白質(zhì)種類(lèi),與水分的結(jié)合程度不同,也會(huì)對(duì)水分的遷移有所影響[16-17]。

        圖1 不同腌制時(shí)期咸鴨蛋蛋黃、蛋白水分和鹽分變化Figure 1 Moisture and salt content of albumin and yolk gel during salting period

        2.2 腌制過(guò)程中蛋清和蛋黃水分分布及遷移的變化

        蛋清凝膠的反演圖譜中共有3個(gè)峰,分別為T(mén)21(0.1~10.0 ms)、T22(10~100 ms)和T23(100~1 000 ms),而蛋黃的反演圖譜有4個(gè)峰,各自是T21(0.1~2.0 ms)、T22a(8~30 ms)、T22b(40~150 ms)和T23(150~500 ms);蛋清和蛋黃中弛豫時(shí)間為T(mén)21的為結(jié)合水,T22、T22a和T22b的為不易流動(dòng)水,T23的為自由水。T2弛豫曲線的積分面積正比于氫質(zhì)子的含量,即水分含量,而不同積分面積占總積分面積的百分比可表示不同狀態(tài)水占總水分的相對(duì)比例[18-21]。

        如圖2(a)所示,腌制過(guò)程中,蛋清凝膠的弛豫曲線向右偏移,在腌制后期曲線的變化趨于穩(wěn)定,表明蛋清凝膠中水分受到的束縛力減弱;圖3(a)反映了3種狀態(tài)水的相對(duì)比例變化情況,其中結(jié)合水和不易流動(dòng)水的相對(duì)比例在下降,而自由水的相對(duì)比例在上升;蛋清凝膠對(duì)水分束縛力減弱的原因可能是凝膠結(jié)構(gòu)中孔徑變大[22],同時(shí),蛋白質(zhì)與水分的結(jié)合作用被削弱[23-24]。因?yàn)殡缰七^(guò)程中,滲入蛋清中帶電的鈉離子和氯離子,一方面會(huì)屏蔽蛋白質(zhì)上的電荷,降低蛋白質(zhì)間的斥力,蛋白質(zhì)易于相互靠近[17,25];另一方面會(huì)影響維持蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的二硫鍵、氫鍵和疏水鍵等次級(jí)鍵,并使得蛋白質(zhì)內(nèi)部的疏水鍵暴露,在疏水相互作用和分子間二硫鍵作用下,靠近的蛋白質(zhì)會(huì)相互聚集[24];在熱誘導(dǎo)凝膠的形成過(guò)程中,蛋白質(zhì)之間過(guò)早的靠近和聚集,更易于形成無(wú)規(guī)卷曲結(jié)構(gòu),造成凝膠結(jié)構(gòu)中孔徑較大,凝膠對(duì)不易流動(dòng)水分的束縛力降低,滯留的水分易于轉(zhuǎn)變?yōu)樽杂伤甗17];同時(shí),疏水鍵的暴露也會(huì)減弱蛋白質(zhì)與水分的結(jié)合作用,而鹽離子會(huì)破壞蛋白質(zhì)的親水基團(tuán)與水分子之間的氫鍵等作用力, 結(jié)合水與凝膠結(jié)構(gòu)的結(jié)合度降低,水分的自由度增加[23]。

        由圖2(b)可知,腌制過(guò)程中蛋黃的弛豫曲線向左偏移,表明蛋黃中水分受到的束縛力增強(qiáng),由圖3(b)可得結(jié)合水的相對(duì)含量增加,而自由水的相對(duì)含量前期增加后期降低。蛋黃中水分受到束縛力增強(qiáng)的原因可能是形成了脂蛋白—水—NaCl復(fù)合物,使得水分結(jié)合更加緊密[26]。

        圖2 蛋清和蛋黃凝膠的水分弛豫時(shí)間T2Figure 2 Water relaxation time(T2) of egg white and yolk

        圖3 蛋清和蛋黃凝膠中3種狀態(tài)水分的相對(duì)百分含量Figure 3 Relative content of three states of water in egg white and yolk

        蛋黃由漿液和顆粒組成,隨著鹽離子的滲入,蛋黃顆粒中高密度脂蛋白(HDL)與卵黃高磷蛋白結(jié)合的磷酸鈣橋中的鈣離子被鈉離子取代,破壞了蛋黃的顆粒結(jié)構(gòu)??扇苄缘穆腰S高磷蛋白溶出到漿液中[12,27],漿液中水分含量較高,在鹽離子和脫水作用下黏度增加,其中的蛋白質(zhì)聚集體相互結(jié)合,破壞乳化體系,導(dǎo)致腌制前期部分不易流動(dòng)水轉(zhuǎn)變?yōu)樽杂伤?,自由水的相?duì)比例增加[12],同時(shí),在熱誘導(dǎo)作用下聚集的蛋白質(zhì)與水,形成了脂蛋白—水—NaCl復(fù)合物,使得水分受到的束縛力增強(qiáng)[28]。

        2.3 腌制過(guò)程咸鴨蛋核磁成像變化

        圖4為咸鴨蛋低場(chǎng)核磁共振成像圖,亮度越高,氫質(zhì)子的密度越高,水分含量越高[4,26]。由圖4可知,未腌制時(shí),蛋清中整體較亮,水分分布較均勻,相比于內(nèi)層濃厚蛋白,外層稀薄蛋白中水分含量更高;而蛋黃中的亮度較暗,其中外層亮度較高,表明外層漿液水分含量更高;隨著腌制時(shí)間的延長(zhǎng),蛋清中的亮度逐漸降低,亮區(qū)逐漸減少到只剩邊緣,表明整體水分不斷減少,而內(nèi)層水分向外層遷移;蛋黃中的外層亮度不斷降低,外層水分逐漸向蛋清遷移,而內(nèi)部脂質(zhì)中氫質(zhì)子的亮區(qū)逐漸集中而亮度不斷增加,表明在脫水和鹽離子作用下,蛋黃中的脂蛋白顆粒在內(nèi)部聚集并結(jié)合地更加緊密,在腌制后期,蛋清和蛋黃中亮度的變化逐漸趨于穩(wěn)定,水分的變化也趨于穩(wěn)定。

        圖4 咸鴨蛋低場(chǎng)核磁共振成像圖Figure 4 Magnetic resonance image of duck egg during salting period

        2.4 蛋清和蛋黃質(zhì)構(gòu)特性變化

        由表1可知,在腌制過(guò)程中,蛋清凝膠的硬度、彈性、內(nèi)聚性和咀嚼性都在顯著降低(P<0.05),后期逐漸穩(wěn)定,而凝膠持水力前期顯著降低(P<0.05),后期略有升高;硬度、彈性、內(nèi)聚性、咀嚼性和凝膠持水力的顯著降低(P<0.05),可能是蛋清凝膠中的孔徑增大和交聯(lián)度的降低[22-24],而這可能與鹽離子和熱誘導(dǎo)作用有關(guān),帶電的鹽離子會(huì)破壞蛋白質(zhì)的次級(jí)鍵,影響蛋白質(zhì)的極性基團(tuán)與水分的結(jié)合,導(dǎo)致蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)β-折疊的含量增加,α-螺旋和β-轉(zhuǎn)角的含量下降,同時(shí),內(nèi)部的疏水鍵暴露[19],使相鄰蛋白質(zhì)更易聚集,形成較高分子量的蛋白質(zhì)單體[29-30],在熱變性階段高分子量的單體不能完全展開(kāi),熱交聯(lián)過(guò)程中更易于形成隨機(jī)無(wú)序結(jié)構(gòu),導(dǎo)致形成的蛋清凝膠結(jié)構(gòu)疏松,單體較大而分布不均勻,交聯(lián)度低空洞大[31],且隨著鹽離子含量增高,凝膠結(jié)構(gòu)可能越疏松,而孔徑可能越大,而后期凝膠持水力的增加可能與水分含量的顯著降低有關(guān)(P<0.05)[32]。

        如表2所示,在腌制過(guò)程中,咸蛋黃的硬度、內(nèi)聚性和咀嚼性都在顯著增加(P<0.05),而彈性在降低,質(zhì)構(gòu)指標(biāo)在后期逐漸穩(wěn)定;硬度、內(nèi)聚性和咀嚼性的增加,可能是鹽離子和熱誘導(dǎo)作用,使得蛋黃中成分的在疏水相互作用和二硫鍵等次級(jí)鍵的作用下結(jié)合的更加緊密[17,33],其中,鹽離子導(dǎo)致蛋黃顆粒中的脂蛋白結(jié)構(gòu)改變,可溶性蛋白質(zhì)脫離,而脫水作用導(dǎo)致漿液的黏度增加,蛋白質(zhì)等成分因此相互靠近并結(jié)合形成聚集體[12,17];熱誘導(dǎo)作用導(dǎo)致水分子運(yùn)動(dòng)加劇,脂蛋白質(zhì)聚集體因體積較大,發(fā)生變性后的疏水鍵和巰基暴露的也較多,在熱誘導(dǎo)凝膠形成過(guò)程中,數(shù)量較多的疏水鍵和巰基結(jié)合形成緊密的脂蛋白—水—NaCl復(fù)合物[26],因此,硬度、內(nèi)聚性和咀嚼性不斷增加。而彈性的降低可能與蛋黃中水分含量的降低和蛋黃硬度的增加有關(guān)[34],而在腌制后期由于蛋白質(zhì)聚集體的增大和結(jié)構(gòu)緊密,焓變溫度增高,耐熱性增加,熱誘導(dǎo)對(duì)質(zhì)構(gòu)結(jié)構(gòu)的影響程度降低,質(zhì)構(gòu)特性的變化趨于穩(wěn)定[35]。

        表1 蛋清質(zhì)構(gòu)特性變化?

        ? 同列不同字母代表樣品存在顯著差異(P<0.05)。

        表2 蛋黃質(zhì)構(gòu)特性變化?

        ? 同列不同字母代表樣品存在顯著差異(P<0.05)。

        2.5 各指標(biāo)相關(guān)性分析

        由表3可知,蛋清硬度、內(nèi)聚性和咀嚼性與不易流動(dòng)水(T22)和自由水(T23)存在顯著的相關(guān)性(P<0.05)[36]。蛋清凝膠中不易流動(dòng)水截留在蛋清凝膠中,而自由水在凝膠孔徑中[21],不易流動(dòng)水和自由水與凝膠結(jié)合程度下降,凝膠三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的交聯(lián)度降低及其孔徑變大,因此凝膠的強(qiáng)度下降,維持其網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的能力和內(nèi)部結(jié)合力變?nèi)鮗23];持水性與自由水的積分面積、弛豫時(shí)間T23和水分含量存在顯著的相關(guān)性(P<0.05),自由水的流動(dòng)性較大越容易失去,鹽離子對(duì)蛋清蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的影響,導(dǎo)致凝膠中的自由水的相對(duì)含量增加,凝膠的持水性因此下降[34],而后期由于水分含量的顯著降低(P<0.05),凝膠的持水力也略有增加。

        由表2可知,不易流動(dòng)水(T22)和自由水(T23)的弛豫時(shí)間與蛋黃凝膠的硬度、內(nèi)聚性和咀嚼性存在顯著相關(guān)性(P<0.05);腌制過(guò)程中,結(jié)合水的結(jié)合越來(lái)越緊密,表明蛋黃中的脂蛋白—水—NaCl凝膠結(jié)構(gòu)更加致密[29],凝膠的強(qiáng)度,分子間結(jié)合力和咀嚼性也因此增加。彈性與水分含量存在顯著相關(guān)性(P<0.05),說(shuō)明蛋黃凝膠的水分含量的減少,能夠在一定范圍內(nèi)解釋凝膠彈性的降低。

        ? *表示P<0.05 水平差異顯著;**表示P<0.01 水平差異顯著。

        表4 蛋黃各指標(biāo)間的相關(guān)性?

        ? *表示P<0.05 水平差異顯著;**表示P<0.01 水平差異顯著。

        3 結(jié)論

        本研究利用LF-NMR測(cè)定在腌制過(guò)程中咸鴨蛋水分分布狀態(tài),并研究鹽離子對(duì)咸鴨蛋蛋清和蛋黃凝膠特性的影響,且發(fā)現(xiàn)凝膠持性與宏觀的質(zhì)構(gòu)和持水性等評(píng)價(jià)指標(biāo)存在相關(guān)性。結(jié)果表明,利用LF-NMR技術(shù)對(duì)咸鴨蛋水分含量及狀態(tài)的測(cè)定可作為預(yù)測(cè)咸鴨蛋成熟度和品質(zhì)的參考指標(biāo),縮短咸鴨蛋檢測(cè)周期,減少原料損耗,可為工業(yè)化生產(chǎn)咸鴨蛋降低成本提供幫助。

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