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1.貴陽中醫(yī)學院，貴州 貴陽 550002；2.貴州省骨科醫(yī)院，貴州 貴陽 550002

目前我國已逐步邁進老齡化社會時期。據中國國家統(tǒng)計局數據，中國60歲及以上人口將由2016年的2.3億余逐步增加至2050年的4.8億余，屆時，約占40%的亞洲老年人口，25%的全球老年人口。衰老的一個主要特征就是學習記憶功能下降，分為器質性健忘和功能性健忘兩類。生理性健忘多與年齡相關，臨床上尤以40～60歲的人最為多見，且近年來隨著社會壓力的增加呈年輕化趨勢；器質性健忘多由腦神經血管性疾病造成，以老年癡呆為代表，在整個人群中發(fā)病率達4%～5%[1]。

中醫(yī)認為，機體記憶力和腦髓功能關系密切，“小兒善忘，腦未滿也；老人健忘，腦漸空也”，“著腦為元神之府，靈機記性在腦”(《醫(yī)林改錯》)。而腦髓的生成與其功能的正常運行需要“精與血”的濡養(yǎng)?！鹅`樞經脈》云：“人始生，先成精，精成而腦髓生?！?《景岳全書·血證》云：“血即精之屬也，但精藏于腎，所蘊不多，而血富于沖，所至皆是”。血液在腎中與腎精相合，為腎所藏之(陰)精，機體血盛則精旺，血虛則精枯?！澳I，主骨，生髓”出自《素問·陰陽應象大論》。腎所藏之精可以生髓，而腦為髓之海，若腎(陰)精虧損不能生髓，則髓海漸失所養(yǎng)，進而引發(fā)記憶衰退、思維遲鈍等。因此，基于精、血、髓之間的聯系，一是血能直接充養(yǎng)腦髓，二是血能生精，精能化髓，血具有補養(yǎng)腦與髓的雙重作用。中醫(yī)認為氣血是腦部執(zhí)行各種生理機能的物質基礎，腦部疾病主要病機之一便是“氣血虧虛”，因此，“補氣生血”是治療腦部疾患的基本方法。Morris 水迷宮(Morris water maze, MWM)廣泛用于大鼠空間學習和記憶能力的評價等實驗研究[2-3]。本研究擬采用Morris水迷宮法觀察補氣生血法代表方劑——當歸補血湯對衰老大鼠模型的記憶能力的影響。

1 材料和方法

1.1 動物及分組 清潔級雄性SD大鼠，(200±20)g，購自長沙市天勤生物技術有限公司(許可證號：SCXK(湘)2014-0011，合格證編號：43006700013547)。篩選出50只達到學習標準的大鼠，隨機分為5組，分別為：正常組、模型組、當歸補血湯低劑量組(2 g/kg)、當歸補血湯中劑量組(4 g/kg)、當歸補血湯高劑量組(8 g/kg)。

1.2 藥品 D-半乳糖(批號：210E052，北京索萊寶科技有限公司)。當歸補血湯藥材出自《內外傷辨惑論》，由黃芪、當歸按5∶1比例組成。組方藥材購自貴陽中醫(yī)學院一附院，黃芪500 g：當歸100 g，加純水浸泡30 min，煎煮30 min，過濾，濾渣加純水適量，繼續(xù)煎煮30 min，合并濾液，將其濃縮為300 mL母液(濃度為2 g/mL)，備用。

1.3 儀器 DNS-2型動物神經精神行為測定：Morris水迷宮由不銹鋼水池(圓柱狀)、可移動平臺和圖像自動采集、處理系統(tǒng)等組成。MH30002C精密電子天平(上海茂宏電子科技有限公司)。

1.4 定位航行試驗 Morris水迷宮主要用于實驗動物對空間位置感和方向感的學習記憶能力測試[4]。定位航行實驗中“逃避潛伏期”是評價動物的學習與記憶能力評價的主要指標[5]。本實驗在實驗前期，采用每天第1次訓練的成績作為評價指標以反應大鼠對前一天訓練結果的記憶[6]，連續(xù)訓練5 d，篩選出50只“逃避潛伏期”無顯著性差異的大鼠進行分組。除正常組外的其他各組大鼠，分別給予D-半乳糖120 mg/kg/d，腹腔注射9周，正常組給予等量生理鹽水，同時每天分別灌胃給予當歸補血湯低、中、高劑量組大鼠當歸補血湯2 g/kg、4 g/kg、8 g/kg，模型組與正常組給予等量生理鹽水。分別于第3周、第6周、第9周注射D-半乳糖24 h后再次進行逃避潛伏期測試并記錄。

1.5 腦指數的測定 大鼠稱重后，斷頭，解剖頭部，取腦，稱取新鮮完整的大鼠腦組織濕重，計算腦指數。腦指數=腦濕重/體重(mg/g)。

2 結果

2.1 大鼠造模前逃避潛伏期情況 造模前，大鼠“逃避潛伏期”在第1～3天無明顯變化(P>0.05)；訓練第4天，各組大鼠基本可在90 s內尋找到平臺，組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；訓練第5天各組逃避潛伏期顯著縮短，組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。以上表明各組大鼠空間學習及記憶能力無明顯差異，符合本次實驗入選標準及隨機分組原則。見表1。

表1 大鼠造模前逃避潛伏期結果

2.2 對D-半乳糖誘導的衰老大鼠逃避潛伏期的影響 應用D半乳糖造成衰老大鼠模型第3、6、9周結果顯示，第3周模型組大鼠逃避潛伏期呈上升趨勢，與正常組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；與正常組比較，第6周、第9周模型組大鼠逃避潛伏期顯著增高 (P<0.05)，當歸補血湯低、中、高劑量組均可在一定程度上降低衰老大鼠逃避潛伏期，與正常組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；第9周當歸補血湯高劑量組逃避潛伏期顯著低于模型組(P<0.05)。這表明腹腔注射D半乳糖6周時大鼠空間記憶能力顯著下降，已形成衰老大鼠模型，灌胃給予當歸補血湯可在不同程度上改善衰老大鼠空間記憶能力，且呈劑量依賴性，以第9周當歸補血湯高劑量組效果最為顯著。見表2。

表2 當歸補血湯對D-半乳糖誘導的衰老大鼠逃避潛伏期的影響

注：與正常組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05。

2.3 對D-半乳糖誘導衰老大鼠腦指數的影響 應用D半乳糖造成衰老大鼠模型第9周結果顯示，模型組大鼠體重與腦指數顯著低于正常組(P<0.05)，當歸補血湯高劑量組可顯著提高衰老大鼠體重與腦指數(P<0.05)。表明大鼠應用D半乳糖9周可明顯損傷大鼠腦組織，形成衰老大鼠模型，當歸補血湯可在一定程度上對抗此進程，尤以高劑量組較為顯著。見表3。

表3 當歸補血湯對D-半乳糖誘導衰老大鼠腦指數的影響

注：與正常組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05。

3 討論

氣能生血，氣盛則血旺，氣虛則血少。血液是精神意識活動的重要物質基礎?！鹅`樞·營衛(wèi)生會》指出：“血者，神氣也?！毖獨獬溆?，則精力旺，記憶力強。當歸補血湯出自李皋《內外傷辨惑論》，為補氣生血法代表方劑，主治“血虛發(fā)熱證”，但同時也廣泛用于各類疾病氣虛、血虛或氣血兩虛證的治療?！夺t(yī)方考》稱其“曰補血湯者”，是“有形之血生于無形之氣故也”。現代研究表明，該方可有效改善患者血液微環(huán)境，提高機體造血細胞的造血功能，促進骨髓基質細胞以及巨核細胞的生長，防止巨核細胞凋亡[7]。當歸補血湯含藥血清實驗研究發(fā)現，其具有促骨髓有核細胞DNA合成、促骨髓粒系及紅系造血祖細胞增殖、分化的能力[8]、增強免疫功能亦是其功效之一[9]。當歸補血湯亦可通過抑制自由基生成及細胞凋亡，以保護大腦皮質神經元[10-11]。同時，補氣中藥具改善癡呆小鼠學習記憶功能的作用[12]。

近年來，D-半乳糖所致雄性SD大鼠衰老模型因其敏感性較高而被廣為應用，且SD 大鼠神經系統(tǒng)與人類相似，因此一般首選雄性SD大鼠作為動物來源[13]。此外，D-半乳糖可以造成類似自然衰老實驗鼠齒狀回區(qū)的神經元細胞損傷[14]，且D-半乳糖通過腹腔注射，吸收力較強，操作較為方便，安全性較佳，大鼠存活率高[15]。因此，本實驗給予SD雄性大鼠連續(xù)9周腹腔注射D-半乳糖120 mg/kg/d，形成衰老模型，觀察當歸補血湯對衰老大鼠空間記憶力的影響。結果表明，造模前各組大鼠每天定位航行實驗訓練的逃避潛伏期無顯著差異，表明各組大鼠空間學習及記憶能力相當。造模第3周，模型組大鼠逃避潛伏期呈上升趨勢，但與正常組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；第6周與第9周模型組大鼠逃避潛伏期顯著高于正常組 (P<0.05)，當歸補血湯低、中、高劑量組均可在一定程度上降低衰老大鼠逃避潛伏期，與正常組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；第9周當歸補血湯高劑量組逃避潛伏期顯著低于模型組(P<0.05)，且當歸補血湯高劑量組衰老大鼠體重與腦指數顯著提高 (P<0.05)。

綜上所述，給藥雄性大鼠腹腔注射D-半乳糖6～9周可形成較為顯著的空間記憶力減退的衰老大鼠模型，當歸補血湯可改善模型大鼠空間記憶能力，以高劑量較為顯著?？傊敋w補血湯可作為益氣補血、生髓養(yǎng)腦之品，改善因衰老而造成的記憶力減退。