李濤 屈平平 孫霞 王志遠

（山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院 261061）

1 試驗材料

1.1 檢測樣品來源

110 份病料樣品均來自30 個豬場不同批次的發(fā)病哺乳仔豬。

1.2 試劑與儀器

普通營養(yǎng)瓊脂、伊紅美藍瓊脂、麥康凱瓊脂、LB 肉湯培養(yǎng)基，北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)；革蘭氏染色液，杭州濱和微生物試劑有限公司生產(chǎn)；微量生化發(fā)酵管及配套試劑，青島海博生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)；SK-1 快速渦勻器，中外合資深圳天南海北有限公司生產(chǎn)；PCR 儀、電泳儀、Gel Doc XR 凝膠成像系統(tǒng)，BIO-RAD 公司生產(chǎn)；BS-210S 型電子分析天平，北京賽多利斯天平有限公司生產(chǎn)；BHC-1300ⅡA/B3 型生物潔凈安全柜，蘇州潔凈設(shè)備有限公司生產(chǎn)；PYX-DHS-X 型隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱，上海市躍進醫(yī)療器械廠生產(chǎn)；可調(diào)微量移液器，德國Eppendorf 公司生產(chǎn)；高壓蒸汽滅菌器，日本Panasonic 公司生產(chǎn)。

2 試驗方法

2.1 病料中細菌的分離培養(yǎng)鑒定

2.1.1 細菌分離培養(yǎng)

取采集的病料樣品，在鮮血瓊脂、伊紅美藍或麥康凱平板上進行分區(qū)劃線，倒置于37℃恒溫箱培養(yǎng)18～24h 后，挑取疑似單個菌落，于普通瓊脂平板上分區(qū)劃線進行純培養(yǎng)，倒置放于37℃恒溫箱，培養(yǎng)18～24h 后，將平板放置于4℃中保存，待用[1-2]。

2.1.2 革蘭氏染色鏡檢

取潔凈的玻片在火焰上反復(fù)通過幾次，用接種環(huán)挑取1～2環(huán)生理鹽水，用接種環(huán)挑取純培養(yǎng)的菌落邊緣少許細菌，與玻片上的生理鹽水混勻，涂抹均勻，自然干燥，火焰固定。按常規(guī)步驟進行染色，油鏡觀察待檢菌的形態(tài)、大小、顏色、排列方式[3-4]。

2.1.3 生化鑒定

對分離的細菌進行生化實驗，用青島海博革蘭氏陰性細菌鑒定系統(tǒng)進行21 項生化實驗，并把生化反應(yīng)的結(jié)果轉(zhuǎn)換為一個8 進制數(shù)，通過提供的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫查詢系統(tǒng)可得到實驗菌株歸屬的相對概率、T 值和R 值，對菌株的歸屬進行鑒定[5-6]。

將細菌各項生化反應(yīng)結(jié)果填入附贈的記錄卡中，依次每3項為一組，若這3 項反應(yīng)均為陽性，則分別記為1、2、4，若為陰性，則相應(yīng)項記為0。將每組3 項的數(shù)值相加，共7 組，組成一個7 位數(shù)。將所得7 位數(shù)輸入數(shù)據(jù)庫系統(tǒng)中即可進行查詢。使用前，所有試劑（21±3） ℃放置直至達到此溫度。打開包裝，取出微孔板。

2.2 病料中病毒的PCR 檢測

取病死豬的脾、肺、淋巴結(jié)、扁桃體、腸及內(nèi)容物等用生理鹽水按照1∶5 比例勻漿，反復(fù)凍融3 次以便于病原釋放，提取核酸及PCR 檢測[7]。

2.3 寄生蟲的檢測

將發(fā)病的哺乳仔豬剖檢，取其腸道及內(nèi)容物，置于干凈的載玻片上，滴加適量生理鹽水，蓋上蓋玻片，分別用顯微鏡的低倍鏡、高倍鏡和油鏡觀察是否有寄生蟲的存在[8]。

3 試驗結(jié)果

3.1 病料中細菌的檢測結(jié)果

細菌引起的哺乳仔豬腹瀉檢出率為11.82%，其中主要是大腸桿菌感染引起的仔豬黃白痢，魏氏梭菌感染引起的仔豬紅痢也有發(fā)生，見圖1～2，表1。豬黃痢是新生仔豬的一種急性致死性較高的傳染病，常發(fā)生于出生后7d 之內(nèi)，又名早發(fā)性大腸桿菌病。仔豬白痢，常發(fā)生于10～30 日齡，又稱遲發(fā)性大腸桿菌病，病程較短，長的1 周左右，有的仔豬能自行康復(fù)，病死率低。仔豬紅痢又名仔豬傳染性壞死性腸炎，仔豬腸毒血癥，主要發(fā)生于1 周齡以內(nèi)的新生仔豬，以排出紅色帶血的稀便為特征。本病發(fā)生快，病程短，病死率高。

圖1 大腸桿菌

圖2 魏氏梭菌

表1 病料中細菌的檢測結(jié)果

3.2 病料中病毒PCR 檢測結(jié)果

病毒引起的哺乳仔豬腹瀉檢出率為88.18%，主要有豬瘟病毒、豬偽狂犬病毒、豬流行性腹瀉病毒和豬傳染性胃腸炎病毒，其中豬流行性腹瀉病毒感染率最高，豬傳染性胃腸炎病毒感染率較低，參見圖3，表2。

圖3 部分病料病毒的PCR 擴增結(jié)果

表2 病料中病毒PCR 檢測結(jié)果

3.3 病料中寄生蟲的檢測結(jié)果

寄生蟲引起的哺乳仔豬腹瀉檢出率為15.45%，主要有球蟲、小袋纖毛蟲和滴蟲。豬小袋纖毛蟲病是由結(jié)腸小袋蟲寄生于豬大腸，導(dǎo)致患豬出現(xiàn)腹瀉癥狀的一種人畜共患原蟲病，一般呈陰性感染。當(dāng)仔豬感染傳染性胃腸炎、豬瘟、沙門氏菌病時，腸黏膜發(fā)生炎癥反應(yīng)，蟲體隨即侵襲到黏膜內(nèi)大量繁殖，導(dǎo)致潰瘍性結(jié)腸炎，而發(fā)生腹瀉，參見圖4～5，表3。

圖4 豬等孢球蟲

圖5 經(jīng)瑞氏-吉姆薩染色的小袋纖毛蟲

表3 病料中寄生蟲的檢測結(jié)果

4 綜合防控措施的制定

4.1 細菌性腹瀉

進行藥敏試驗，選擇最敏感的抗菌素。大腸桿菌性腹瀉，從藥敏試驗中篩選氯霉素類、氨基糖苷類、頭孢類等抗生素藥物進行治療，梭菌性腸炎選擇青霉素類、頭孢類抗生素進行治療[9]。

4.2 病毒性腹瀉

綜合防控，防止繼發(fā)感染，降低死亡率。哺乳仔豬的病毒性腹瀉沒有特效藥物可以治療，主要通過加強飼養(yǎng)管理和疫苗預(yù)防來防控。對癥療法、口服微生態(tài)制劑，通過藥敏試驗選用敏感抗菌素等防止繼發(fā)感染，可以降低哺乳仔豬病毒性腹瀉的死亡率。對豬輪狀病毒病，在盡早喂給足量初乳后，用母乳喂養(yǎng)，使用口服補液鹽可防止脫水，補充養(yǎng)分；對傳染性胃腸炎和流行性腹瀉，給予口服補液鹽[10]。

4.3 寄生蟲性腹瀉

驅(qū)蟲是重點，球蟲性腸炎可內(nèi)服氨丙啉或磺胺二甲基嘧啶治療[11]。

5 結(jié)論

根據(jù)對哺乳仔豬腹瀉原因的傳染性因素調(diào)查結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，傳染性因素方面主要集中在豬瘟、流行性腹瀉、偽狂犬、傳染性胃腸炎、仔豬黃白痢等幾種疾病，陽性率分別達到25.45%、33.64%、20.91%、8.18%、10.91%，這幾種疾病仍然是引起哺乳仔豬腹瀉的主要疾病。

但不可忽視的是，一些以前發(fā)生較少的寄生蟲病在這次檢測過程中有所上升，如小袋纖毛蟲的檢出率達到了8.18%，豬毛滴蟲也檢出了2 例，而且這些寄生蟲很多情況下是繼發(fā)于病毒性傳染病，加重了仔豬腹瀉的程度，造成更高的死亡率和更大的損失。

上述調(diào)查和檢測結(jié)果提示，養(yǎng)殖場的技術(shù)人員要關(guān)注疾病發(fā)生和流行的動態(tài)，抓好飼養(yǎng)管理，預(yù)防老病新發(fā)與新流行疾病對養(yǎng)殖場造成的危害。