姜東平

摘要：在基層獸醫(yī)工作中，一些疾病是常規(guī)診斷不出來的，必須進行實驗室檢查，這就涉及收集動物的病原體?？茖W地掌握動物病料的采集技術(shù)，是確保疾病診斷準確率的關(guān)鍵。本文從采集前準備、采集時應注意的問題、采集過程中的操作技巧等幾個方面談了一些看法，希望能為基層獸醫(yī)工作者提高采集技術(shù)水平提供一些有益的借鑒。

關(guān)鍵詞：基層獸醫(yī)；送檢病羊；病料；采集原則

動物疫病監(jiān)測是我國動物疫病防治工作中的一個重要環(huán)節(jié)，它直接影響著我國的重大動物疫病防控、公共衛(wèi)生安全和畜牧業(yè)的發(fā)展，也影響著廣大人民群眾的身體健康。動物疫病材料的收集是動物疫病監(jiān)測工作的先決條件，取樣方法、取樣部位、取樣數(shù)量和保存質(zhì)量直接影響到動物疫病診斷、流行病學調(diào)查、免疫監(jiān)測和動物疫病防治。所以，對動物病料進行收集、送檢，是臨床醫(yī)務工作者必須掌握的一門實用技術(shù)。動物疫病監(jiān)測是動物防疫工作的重要內(nèi)容，也是基層獸醫(yī)工作的重點。動物疫病不僅關(guān)系到動物疫病的監(jiān)測是動物疫病防治工作中的一個重要環(huán)節(jié)，也是廣大基層獸醫(yī)工作的重中之重。動物疫病是影響畜牧業(yè)發(fā)展和公眾健康的重要因素，也是影響廣大人民群眾健康的重要因素。

1 采前準備

防護用品（防護服，口罩，眼鏡，手套和橡膠雨靴等），消毒容器（試管，玻璃瓶，塑料瓶，塑料袋，有制冷劑的容器），試驗用具器械（刀，剪，鑷子，吸管，碘酊藥棉，注射器，針頭，采血器，棉拭子等），試驗藥品（酒精，抗凝劑，抗生素等），病料保存液（蒸餾水，生理鹽水，甘油緩沖液，磷酸鹽緩沖液，甲醛緩沖液等），固定液（95%酒精，10%福爾馬林溶液），消毒用品，紗布，取樣單，取樣標簽，記號筆等。

1.1 采集前的準備工作

提前制訂好送檢病羊及病料的收集計劃，備好取樣器具及防護用品。取樣器具有：玻璃試管、塑料瓶以及采血管等滅菌器具；醫(yī)療用具，如剪刀，鑷子，藥棉，注射器，針頭，紗布等；試驗藥物，如酒精、麻醉劑、抗凝劑等；另外，還有取樣單，取樣標簽和標記等。防護用品包括防護服，防護口罩，透明眼鏡，手套，雨鞋。

1.2 采集原則

1.2.1 時間性和新鮮性

病料應盡可能地從活的動物身上采集。如果在動物死后采集時，會導致尸體出現(xiàn)不同程度的腐爛現(xiàn)象，進而會對最終的診斷結(jié)果有一定的影響。而且應該在動物死亡后24小時內(nèi)進行采集工作。

1.2.2 針對性

在采集病料之前，要對患病羊的臨床表現(xiàn)進行分析。根據(jù)患病羊的發(fā)病特點，大致推斷患病羊的病因，并根據(jù)患病羊所患疾病的實驗室診斷方法所需要的相關(guān)的病料，進行有針對性的收集。若患病羊或已死亡的羊沒有明顯的臨床表現(xiàn)，或其發(fā)病特點比較復雜，則需進行全面的病料收集。同時，為避免單一動物的誤診，對多只動物進行病料收集，確保了診斷的正確性。

1.2.3 無菌性和安全性

為避免病原菌通過空氣傳播，從而危及人體健康，對病料的采集應嚴格執(zhí)行消毒措施。在收集的時候，所有的樣品在使用前必須進行滅菌操作。不同類型的患病羊的病料，要分開放置，如有需要，要用密閉容器，以避免空氣傳染?；鶎荧F醫(yī)在收集病料的過程中，要注意在采集時的個人的健康和安全，避免在取樣時受到傳染，從而對自身的健康產(chǎn)生一定程度的影響。

1.2.4 順序性

采集患病羊病料的過程中必須遵循一定的操作順序，首先收集采集的是胸腔臟器，之后采集的是腹腔臟器，并且要注意，首先取樣實質(zhì)器官，再采集管狀器官。采集的患病羊送檢病料的放置儀器，要一一按照先后次序進行編號。

1.2.5 計劃性和送檢單

患病羊病料的采集工作要有計劃地進行操作，切記不能盲目地、無規(guī)范地進行。首先要提前準備好患病羊的病料取樣時所需的試驗器具、消毒用品以及個人防護用品，并對取樣器具進行消毒、滅菌等操作，之后才能進行患病羊的病料采集工作。送檢報告單必須要和相同編號的患病羊病料一起送到化驗室，而且還要附上患病羊病料的詳細資料，例如：患病羊所屬的品種，患病羊的臨床癥狀以及相關(guān)的患病羊病料的采集時間和地點以及患病羊病料的名稱和保存的液體等一系列的信息。同時，還要說明患病羊以及病料送檢的目的。送檢報告單一式三份，一份由相關(guān)的送檢人員保管，一份由檢驗機構(gòu)在檢驗報告上簽字后進行保存，最后一張報告單隨著檢查報告單一并送回。

2 采樣時的注意事項

第一，基層獸醫(yī)在采集患病羊的病料時，必須穿戴防護衣、雨鞋、口罩、手套、眼鏡等，如果采集者的皮膚有損傷，必須要做好相關(guān)的防護措施，防止病原體從受損傷口侵入人體。采集場所必須要采取滅菌及隔離等措施，以避免因人體或空氣傳播致病菌。在進行患病羊病例的操作過程中，要特別小心，不要讓任何生病或死去的動物的血液沾染到其他部位。防止疫情蔓延，造成更大的傷害和經(jīng)濟損失。

第二，對于死亡原因不明確的羊，在進行解剖操作之前，必須先要了解該羊生前的病情和表現(xiàn)癥狀，對其進行細致的檢查，然后進行抽血化驗工作，逐個排除掉患各類疾病的可能性，最終確定造成其死亡的原因，之后就可以對其進行采集工作。

第三，要進行采集工作的病料必須要取自所患病情況較為典型、臨近死亡或者是已死亡的患病羊身上，而且最好是未服用任何藥物的羊體，以提高病料的采集質(zhì)量，從而可以確保最終診斷的準確性。

第四，采集后樣品最優(yōu)的保藏方式是冷凍保存。收集樣品的玻璃容器必須采用合適的方法封好，然后馬上送去檢驗，或者將患病羊病料浸泡在保存液中。若收集到的樣品不能及時送去化驗，必須妥善保管，避免患病羊病料發(fā)生變質(zhì)，從而對最終的檢驗結(jié)果產(chǎn)生一定的影響。

第五，在收集患病羊病料的時候，要特別注重衛(wèi)生健康問題，確保操作過程中的無菌性，而且采集患病羊病料的工具要做到一只牲畜對應一套操作工具。

3 采集工作

保護好自己。病料采集人員應佩戴口罩、手套、護目鏡、穿戴防護衣、雨鞋，尤其是在出現(xiàn)皮膚破損的情況下，應特別注意預防布魯氏桿菌等傳染性疾病的發(fā)生。在確定的收集點，進行滅菌、隔離，避免因病原的傳播。凡是發(fā)現(xiàn)有病的病人，都不要隨意解剖。首先要采集末梢血液涂片，以確定炭疽菌的存在，尤其要注意操作，不要讓血液沾染其他部位，以免引起病菌的擴散和危害。如果懷疑是炭疽桿菌，不能隨便解剖，必須要確認是不是炭疽桿菌后，才可以進行解剖操作。取樣時間，要按照不同的檢測要求、檢測目的以及測試對象，對患病羊病料要在適當?shù)臅r間內(nèi)進行取樣。先采集發(fā)病早期并且有明顯臨床表現(xiàn)以及沒有使用抗生素的病羊。要選擇瀕臨死亡的羊或者是剛剛死去的羊，對于病死的羊，必須立即采樣或者在羊死亡后的6h之內(nèi)取樣。在采集患病羊病料時，由于不同的疫病所需的樣本也不盡相同，因此，要根據(jù)可能的流行病重點取樣，如果懷疑是一種疾病，則要從其經(jīng)常侵犯的地方進行取樣，并有選擇地收集病變典型的臟器或內(nèi)容物，同時兼顧病變與健康組織。若小型反芻動物疫病，可采用羊口鼻棉拭子、淋巴結(jié)或血沉褐黃。敗血癥可以通過心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、淋巴結(jié)、胃腸等疾病來治療。羊腸毒血癥，采集羊的小腸和腸內(nèi)容物，口蹄疫，羊痘，則采集的是羊體的水泡（痘）或結(jié)痂。當羊有神經(jīng)性病癥時，可采集腦以及脊髓等部位。當要檢測血清中的抗體時，如果不知道是什么傳染性疾病或者無法確定可疑的羊體時，可以把所有的病羊都送去檢查或者全部處理，所收集的樣本數(shù)應符合檢驗與再檢驗的要求。

3.1 全血樣品的采集

羊自頸靜脈采血并做好標記。用注射器吸5％枸櫞酸鈉溶液0.5～1ml（0.1ml5％枸櫞酸鈉溶液可抗1ml血液），注入滅菌離管中。無菌采血5～l0ml加入離心管混勻，蓋緊離心管蓋，做好標記。

3.2 血清樣品的采集

羊自頸靜脈采血取3～5ml并做好標記。置于無菌的試管內(nèi)，置于傾斜的位置，等血液完全凝固后，即可立起來。當血清完全沉淀后，或經(jīng)離心分離后，用無菌針將血液抽出來，然后將其注射到消毒的離心管內(nèi)，并將其蓋上，做好記號。

3.3 乳汁

用新苯扎氯銨清潔取乳者的雙手，同時對乳房、乳頭進行消毒，并濕潤乳房周圍的毛發(fā)。先將第一次擠出來的奶排出，再將10～20ml的奶注射到消毒過的試管或瓶子里，并做好記號。

3.4 膿汁、水皰液、水腫液和出液

用消毒棉簽沾濕后，將其置于消毒離心處，將外露的部分剪掉，蓋上離心帽，做好記號，然后將無破裂的膿灶密封，用消毒注射器將膿液倒入消毒容器，做好記號，然后密封保存。

3.5 鼻拭子、咽拭子、肛拭

用消毒棉拭子在患病羊的鼻部、咽喉、肛部旋轉(zhuǎn)三周以上，沾上分泌物，然后將其倒入加有1mlPBS或是含有生理鹽水的無菌離心管內(nèi)，將裸露部位切下，蓋上瓶蓋，做好記號，然后冷藏。

3.6 淋巴結(jié)、肝、脾、肺、腎淋

巴結(jié)可全切，其他器官可采明顯的病變部分。用無菌剪刀（肝脾大至豆腐干大小），分別放于消毒儀器內(nèi)，再取少量病料制成的觸片幾張，做好記號，一同送檢。

3.7 腸

選擇合適的腸段長度在5.08cm左右，將結(jié)扎線的末端進行結(jié)扎，然后放入玻璃瓶或塑料袋內(nèi)。

3.8 膽汁

取全部膽囊置于一個塑料袋中，或用無菌注射器抽取幾毫升的膽汁，然后將其注射到消毒的容器中。

3.9 腦和脊髓

把大腦和脊髓取出來，浸泡在保存液中，或者把整個的頭部切下來，用3%的碳酸鈉浸泡的紗布包好，然后放進一個塑料袋里。

3.10 小家畜、家禽的尸體和流產(chǎn)胎兒

用浸透消毒劑的紗布包好，用一個塑料袋包裝，然后將其整體送往檢查。

4 病料保存

采用病料后，要及時送檢化驗，若無法及時化驗，或必須送交外地化驗，則需添加適當?shù)谋Ａ魟员ＷC病料的新鮮，從而得到準確的結(jié)果。細菌性傳播物質(zhì)的保藏。病料為組織塊，用飽和鹽水或30%的甘油緩沖劑貯存，并用蓋子密封。用試管將病料灌入密封。病毒性物質(zhì)的保存。病料為用50%的甘油緩沖劑或蛋清生理鹽水中的組織塊，用蓋子封住。用試管將病料灌入密封。病料采用棉簽收集，并置于緩沖液中。保存病例標本。將組織塊置于10%福爾馬林或95%乙醇中，其含量應為樣品體積的10倍或更多。每隔24h更換一次固定液。冬季防凍。將已固定的組織塊在送檢時取下，用10%福爾馬林和甘油等比例的溶液進行保存。血液樣本的保存。用于血清學檢測的標本不添加抗凝或去纖維，以防止溶血。低溫儲存，如果有特別要求，可在-5℃低溫下儲存，避免重復凍融。寄生菌的病原。血液寄生蟲（主要是血孢子蟲）需要進行血液和全血檢測，或制作血涂片。未冷凍處理的線蟲糞便標本。線蟲是用福爾馬林或70%乙醇儲存的。

5 病料運送

裝有患病羊病料的容器應按順序一一編號，并注明所送樣本的具體狀況，而且要附上病料的送檢報告單。對有危害的病料，要避免損壞造成散毒的情況，畏熱或者畏寒的病料要有針對性地分別采取相應的措施，防止強烈震動，盡早運輸，遠距離可以安排專人送檢，重要的患病羊病料必須由技術(shù)人員現(xiàn)場送檢。

6 采集病料的原則

6.1 目的明確

動物發(fā)病的病因是多種多樣的，病原也是多種多樣的。對于不同的疾病，需要收集不同的病料進行化驗，以確定是否患有某種流行病時，需要收集相關(guān)的病料。如果有明顯的神經(jīng)癥狀，可以進行腦部、脊髓的采集；若有明顯的嘔吐、腹瀉，可收集胃液和腸系膜淋巴結(jié)。如果不能確定原因，則可以進行完整的收集。

6.2 剖前檢查

如果羊只突然死亡，出現(xiàn)自然孔失血、血液未凝結(jié)以及體內(nèi)含有炭疽桿菌的情況，則不可以將羊體進行解剖，但可以自末梢血管取血來檢查。

6.3 病料力求新鮮

要及時有效地收集患病羊病料。在患病羊死后，應該及時采集病料，最長不超過1h。如有需要，可在發(fā)病前期或在急需屠宰的羊體上采集病料。

6.4 病料選擇

應從有明顯臨床表現(xiàn)或有典型病理改變的病例中選擇。在流行病學調(diào)查以及動物健康評價等方面，樣本的數(shù)量必須符合統(tǒng)計學的要求。

6.5 防止污染環(huán)境

收集患病羊病料時，要注意預防環(huán)境的污染、疾病的蔓延，注意做好個人衛(wèi)生以及個人防護，并合理處置好患病羊的尸體，嚴格預防出現(xiàn)人與動物之間的交叉感染的情況。

6.6 器械消毒

用刀、剪、鑷子等器具煮沸殺菌30min，用103kPa的高壓加壓30min，160℃的條件下烘焙兩個小時，或用0.5%～1%的碳酸氫鈉溶液煮沸10～15min，然后用干凈的紗布擦拭，保存在酒精、乙醚等溶液中。采用一種藥物，用一組儀器和一個容器。對已采集的病料進行消毒，然后進行清潔。

6.7 樣品記錄

送到化驗室的樣本必須附上一式三份檢驗報告，一份與樣本一起送到化驗室，一份之后寄送，一份存檔。抽樣記錄應當包含：畜主姓名、畜場地址、牲畜飼養(yǎng)的種類、數(shù)量、受污染的牲畜種類；第一次和第二次發(fā)生的時間和損失；牲畜中受影響的動物分布；動物死亡、出現(xiàn)臨床癥狀的動物數(shù)量和年齡；包括口腔、眼睛和腿部的癥狀、產(chǎn)卵記錄、死亡、疫苗接種和用藥等。

7 結(jié)語

基層獸醫(yī)應從患病羊或已死亡羊的尸體上采集所需的病料，查明病源，才可以有針對性地采取相應的防治措施，以防止、控制、消滅疾病，也可以降低臨床工作的盲目性，從而可以有效提高基層獸醫(yī)技術(shù)水平，保障廣大養(yǎng)殖戶的利益。

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