高紅旗 支 勇 曹式麗

天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院 天津 300193

系膜增生性腎小球腎炎（MsPGN）是臨床常見的腎小球疾病的病理類型，在我國原發(fā)性腎病綜合征中MsPGN高達(dá)30%，是導(dǎo)致腎小球硬化，發(fā)展為終末期腎臟病的主要疾病。MsPGN的病理學(xué)特征為腎小球系膜細(xì)胞的異常增生和系膜基質(zhì)的病理性積聚。在MsPGN的病變過程中，IL-1、IL-6等細(xì)胞因子起到重要作用。本研究采用抗大鼠胸腺細(xì)胞抗體（Anti-Thy-1）誘發(fā)MsPGN大鼠模型，觀察以辛通暢絡(luò)立法的中藥復(fù)方腎絡(luò)寧對(duì)血清、腎組織IL-1和IL-6表達(dá)的調(diào)節(jié)作用，以及對(duì)腎小球細(xì)胞外基質(zhì)的影響。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：健康雄性日本大耳白兔4只，體重1250±250g，普通級(jí)；遠(yuǎn)交系健康雄性SD大鼠40只（10周齡/體重150±10g），幼齡SD大鼠10只（4周齡），SPF/VAF級(jí)。以上實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所動(dòng)物中心提供(合格證號(hào)：SCXK津2005-0001)。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑：完全福氏佐劑與不完全福氏佐劑（Sigma公司）；IL-1、IL-6試劑盒（尚柏生物醫(yī)學(xué)技術(shù)北京公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)藥物：腎絡(luò)寧：由柴胡12g，生黃芪30g，黃芩、當(dāng)歸、水蛭各10g，女貞子、澤蘭各15g，細(xì)辛3g等組成，煎煮濃縮(含0.85g生藥/ml)，裝瓶密封，置4℃冰箱保存?zhèn)溆?。藥物購自天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院中藥房，加工由天津中醫(yī)藥大學(xué)藥廠協(xié)助完成。貝那普利：瑞士諾華制藥有限公司產(chǎn)品，規(guī)格：10㎎/片，批號(hào)：06031404。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動(dòng)物分組：40只大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，按體重分層隨機(jī)分為正常組、模型組、西藥組和中藥組，每組各10只。實(shí)驗(yàn)全程給予普通飼料喂養(yǎng)，自由進(jìn)水。

2.2 模型復(fù)制：參考有關(guān)文獻(xiàn)復(fù)制抗Thy-1系膜增生性腎炎模型大鼠模型[1-2]。大鼠30只，經(jīng)尾靜脈注射兔抗鼠胸腺細(xì)胞抗體血清（ATS），每周1次，連續(xù)3周，初次注 射 ATS（1:32）1.0ml/只 ，加 強(qiáng) 注 射 ATS（1:16）1.0ml/只。

2.3 給藥方法：自MsPGN模型制備第1天起，中藥組每日1次以3.5g/100g體重灌服腎絡(luò)寧，西藥組每日1次以0.33mg/100g體重灌服貝那普利混懸液，對(duì)照組與模型組每日1次灌服等量生理鹽水，共進(jìn)行6周。實(shí)驗(yàn)全程各組均給予普通飼料喂養(yǎng)，自由進(jìn)水。實(shí)驗(yàn)過程中因灌胃誤入氣管，中藥組于治療第4周初死亡1只，其他各組實(shí)驗(yàn)過程中無動(dòng)物死亡。

2.4 標(biāo)本采集：于給藥后第6周末殺檢全部大鼠，打開腹腔，摘取腎臟，迅速剪取部分腎組織放入凍存管并置于液氮中凍存，用于腎組織IL-1、IL-6檢測(cè)；另再取部分腎臟組織置于10%福爾馬林中固定，用于腎小球細(xì)胞外基質(zhì)的檢測(cè)。

2.5 觀測(cè)指標(biāo)：血清和腎組織IL-1、IL-6檢測(cè)：采用雙抗體夾心ELISA法；腎小球細(xì)胞外基質(zhì)檢測(cè)：采用免疫組化ABC法。

2.6 病理圖像分析：采用HMIAS-2000高清晰度彩色病理圖像分析系統(tǒng)，于400倍高倍鏡下，每個(gè)標(biāo)本隨機(jī)選取10個(gè)視域，測(cè)量細(xì)胞外基質(zhì)表達(dá)的陽性反應(yīng)物信號(hào)的總面積和陽性信號(hào)物質(zhì)占腎小球體的面積百分比，評(píng)價(jià)各組腎小球ECM增殖程度。

2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，各組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（xˉ±s）表示，對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，檢驗(yàn)結(jié)果以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 各組血清、腎組織IL-1、IL-6的表達(dá)比較：見表1。

表1 各組血清、腎組織IL-1、IL-6的表達(dá)比較（xˉ± s，pg/ml）

3.2 腎組織細(xì)胞外基質(zhì)分析結(jié)果：見表2。

表2 腎組織細(xì)胞外基質(zhì)增殖程度（xˉ±s，%）

4 討論

IL-1、IL-6是MsPGN中參與免疫調(diào)節(jié)和介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的細(xì)胞因子，也是重要的系膜細(xì)胞增殖促進(jìn)因子，是導(dǎo)致ECM積聚發(fā)展成腎小球硬化的重要原因。IL-1和IL-6是促進(jìn)系膜細(xì)胞增殖的重要細(xì)胞因子，而且系膜細(xì)胞通過自分泌方式產(chǎn)生具有生物活性的IL-1并表達(dá)其受體，如在免疫復(fù)合物性腎炎大鼠腎小球系膜細(xì)胞的IL-1 mRNA表達(dá)量比正常大鼠增加2～3倍，提示系膜細(xì)胞能夠持續(xù)分泌大量的IL-1，刺激系膜細(xì)胞增殖及增加ECM合成[3]。IL-6也是系膜細(xì)胞自分泌調(diào)節(jié)因子，通過參與和維持系膜細(xì)胞高活性狀態(tài)的自分泌途徑，促進(jìn)系膜細(xì)胞和ECM增生，IL-6在腎臟中的高表達(dá)與腎小球系膜基質(zhì)增生呈正相關(guān)[4]。因此，通過調(diào)控IL-1、IL-6的表達(dá)，抑制系膜細(xì)胞增殖，對(duì)防治MsPGN具有重要意義。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，絡(luò)脈是氣血運(yùn)行通道，亦是病邪傳變途徑，具有邪易滯易瘀、邪易入難出、邪易積成形的病理特點(diǎn)[5]，腎絡(luò)郁滯是MsPGN等多種慢性腎臟病的共同病理基礎(chǔ)，腎絡(luò)寧是以“辛通腎絡(luò)，標(biāo)本兼治”為治法的中藥復(fù)方制劑。方中柴胡、黃芩疏利少陽，樞轉(zhuǎn)氣機(jī)；黃芪、當(dāng)歸、女貞子補(bǔ)益脾腎，扶正理虛；澤蘭、細(xì)辛、水蛭辛通暢絡(luò)，化瘀消滯。諸藥協(xié)同，疏導(dǎo)調(diào)節(jié)，養(yǎng)臟和絡(luò)，促進(jìn)腎絡(luò)氣血調(diào)暢。本課題前期研究提示，以辛通暢絡(luò)立法的中藥復(fù)方腎絡(luò)寧，具有減輕腎小球FN、LN、ColIV等ECM成分的表達(dá)量，改善系膜基質(zhì)增生的作用[6-7]。本研究結(jié)果顯示,腎絡(luò)寧能夠顯著降低MsPGN大鼠血清和腎組織IL-1、IL-6的表達(dá)量，減輕腎組織細(xì)胞外基質(zhì)的增殖程度，提示抑制MsPGN大鼠IL-1、IL-6的表達(dá)，減輕其對(duì)系膜細(xì)胞增殖的病理性作用，阻抑腎小球系膜基質(zhì)增生，是腎絡(luò)寧防治MsPGN的重要機(jī)制。

5 參考文獻(xiàn)

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