羅永亮

[摘要] 目的 探究在生活飲用水監(jiān)測(cè)中運(yùn)用微生物檢驗(yàn)技術(shù)的價(jià)值。方法 納入2017年4月枯水期93份與2017年8月豐水期93份總共186份生活飲用水樣本于2017年3月—2018年3月開(kāi)展研究。所有生活飲用水樣本均采用濾膜法檢驗(yàn)（研究1組）與多管發(fā)酵法檢驗(yàn)（研究2組），統(tǒng)計(jì)枯水期與豐水期兩組微生物檢出情況。結(jié)果 研究2組枯水期大腸埃希菌與耐熱大腸菌群檢出率分別為94.62%（88/93）、91.40%（85/93），相較于研究1組的79.57%（74/93）、58.06%（54/93）更好;豐水期兩組耐熱大腸菌群檢出率分別為79.57%（74/93）、93.55%（87/93），大腸埃希菌檢出率分別為80.65%（75/93）、96.77%（90/93），組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 該研究中兩種微生物檢驗(yàn)技術(shù)運(yùn)用于生活飲用水中具有重要意義，多管發(fā)酵法相較于濾膜法更佳，更為值得推廣。

[關(guān)鍵詞] 生活飲用水;微生物檢驗(yàn);濾膜法;多管發(fā)酵法

[中圖分類(lèi)號(hào)] R123 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1672-5654（2019）12（b）-0148-03

Analysis on the Application of Microbiological Testing Technology in the Monitoring of Drinking Water

LUO Yong-liang

Yuanzhou District Health Supervision Institute， Guyuan， Ningxia， 756000 China

[Abstract] Objective To explore the value of using microbiological testing techniques in drinking water monitoring. Methods A total of 186 drinking water samples from 93 dry seasons in April 2017 and 93 wet seasons in August 2017 were included in the study from March 2017 to March 2018. All drinking water samples were tested by filter method（study group 1） and multi-tube fermentation method （study group 2）， and the microbial detection status of the two groups in the dry and wet seasons was counted. Results The detection rates of Escherichia coli and heat-resistant coliform bacteria in the two groups were 94.62%（88/93） and 91.40%（85/93）， respectively， compared with 79.57%（74/93），58.06%（54/93） in the study group was better; the detection rates of heat-resistant coliforms in the two groups during the wet season were 79.57%（74/93） and 93.55%（87/93）， respectively. The detection rate of Escherichia coli was respectively 80.65%（75/93）， 96.77%（90/93）， comparison between groups（P<0.05）. Conclusion In this study， two microbial testing techniques are of great significance in the application of water in living applications. The multi-tube fermentation method is better than the membrane method and is worthy of promotion.

[Key words] Drinking water; Microbiological testing; Membrane method; Multi-tube fermentation

水，是人體必不可缺的生命之源。然而隨著工業(yè)化時(shí)代發(fā)展，大量工廠私自排放污水、各種化工產(chǎn)業(yè)產(chǎn)生的有毒氣體導(dǎo)致水資源污染情況越來(lái)越嚴(yán)重，人們的生活環(huán)境也越來(lái)越差[1]。近些年，由于各種環(huán)境因素導(dǎo)致的疾病發(fā)生率逐年遞增，生活飲用水的質(zhì)量問(wèn)題也引起人們的廣泛關(guān)注。既往采取的常規(guī)過(guò)濾、消毒等處理，雖然能降低水中微生物含量，但相關(guān)部門(mén)對(duì)于飲水質(zhì)量的監(jiān)測(cè)能夠有效減少有害微生物對(duì)人體產(chǎn)生的影響[2]，故及時(shí)采取科學(xué)有效的生活飲用水檢驗(yàn)方案是保證飲水質(zhì)量、維護(hù)國(guó)民健康的重要前提，該研究于2017年3月—2018年3月以186份樣本為例展開(kāi)研析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 ?資料與方法

1.1 ?一般資料

納入186份生活飲用水樣本作為檢驗(yàn)對(duì)象開(kāi)展研究。根據(jù)不同檢驗(yàn)方式（濾膜法及多管發(fā)酵法）分為研究1、2組。所有樣本均嚴(yán)格遵循《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法水樣采集與保存》[3]流程進(jìn)行采集與保存，樣本及所使用的設(shè)備、儀器等基線資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

1.2 ?方案

1.2.1 研究1組 ?選用濾膜法檢驗(yàn)：①準(zhǔn)備相關(guān)儀器及設(shè)備：如試管、微孔濾膜、顯微鏡、無(wú)齒鑷子等。②滅菌：先將微孔濾膜置于燒杯內(nèi)，注入蒸餾水后利用酒精燈煮沸。③飲用水樣本過(guò)濾：利用無(wú)菌鑷子將滅菌濾膜夾起，放至無(wú)菌濾床上方，注意保持濾膜粗糙面向上，隨后將100 mL飲用水樣本注入，打開(kāi)閥門(mén)進(jìn)行抽濾操作;④樣本過(guò)濾完成后進(jìn)行5 s抽氣，再使用無(wú)菌鑷子將濾膜夾起，置于紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上，注意殘留細(xì)菌面朝上，最后送入恒溫箱（溫度調(diào)節(jié)至37°C左右）進(jìn)行培養(yǎng)。

1.2.2 研究2組 ?采取多管發(fā)酵法檢驗(yàn)：①沿用研究1組設(shè)備、儀器;②進(jìn)行總大腸菌群培養(yǎng);③取1 mL飲用水樣本注入裝有10 mL單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液（培養(yǎng)液制備方法：在1 000 mL蒸餾水中加入蛋白胨25 g，氯化鈉、乳糖各15 g，取10g牛肉膏進(jìn)行加熱溶解，將pH值調(diào)整至7.1～7.5范圍，再加入濃度為1.5%的溴甲酚紫乙醇溶液2 mL，完全混勻，分裝于試管之中，再置于110～120°C高壓蒸汽滅菌器內(nèi)15～20 min，充分滅菌后取出放入冰箱內(nèi)貯存?zhèn)溆茫┑脑嚬苤?取10 mL飲用水樣本注入裝有10 mL雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的試管中，再取1 mL飲用水樣本注入裝有9 mL生理鹽水的試管中搖勻后取出1 mL混合液注入單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液，對(duì)于飲用水樣本污染較嚴(yán)重的情況，可適當(dāng)加大稀釋力度;④完成接種后，將所有樣本送入恒溫箱培養(yǎng);時(shí)間為1 d左右。1 d后取出，若試管內(nèi)不存在產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況，則說(shuō)明大腸菌群為陰性;若試管內(nèi)存在產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況，則考慮將試管置于伊紅美藍(lán)瓊脂板（培養(yǎng)基制備方法：在500 mL蒸餾水中加入瓊脂25 g，加熱至完全溶解，再將1.5 g磷酸氫二鉀、8 g蛋白胨，均勻混合并完全溶解，依據(jù)一定的劑量分裝于燒瓶?jī)?nèi)，進(jìn)行滅菌、冷卻、凝固備用）上方轉(zhuǎn)種后再次送入恒溫箱培養(yǎng)，培養(yǎng)結(jié)束后，對(duì)菌落的形態(tài)進(jìn)行觀察，染色顏色較深的中心部位后，利用鏡檢進(jìn)一步核實(shí)。

1.3 ?觀察指標(biāo)

以《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》與《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》為參考依據(jù)[4]，于豐水期及枯水期分別對(duì)比兩組的微生物檢出情況。

1.4 ?統(tǒng)計(jì)方法

應(yīng)用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 ?結(jié)果

2.1 ?枯水期微生物檢出情況

兩組雜菌及大腸菌群檢出率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），研究2組耐熱大腸菌群與大腸埃希菌的微生物檢出率均優(yōu)于研究1組（P<0.05），見(jiàn)表1。

2.2 ?豐水期微生物檢出情況

兩組樣本雜菌及大腸菌群檢出率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），研究2組耐熱大腸菌群與大腸埃希菌的微生物檢出率明顯高于研究1組（P<0.05），見(jiàn)表2。

3 ?討論

水作為人們?nèi)粘Ｉ钪胁豢苫蛉钡闹匾Y源，在人類(lèi)發(fā)展史中占據(jù)重要地位，生活飲用水的質(zhì)量問(wèn)題與人類(lèi)身體健康及生命安全存在密切聯(lián)系。根據(jù)WHO（世界衛(wèi)生組織）調(diào)查顯示，由于水污染問(wèn)題，易導(dǎo)致全世界大約有12億人出現(xiàn)腸道傳染性疾病，其中有400萬(wàn)兒童死于水污染疾病，因此生活飲用水的質(zhì)量把控尤為重要[5]。盡管近年來(lái)我國(guó)加強(qiáng)對(duì)生活飲用水質(zhì)量的監(jiān)控，使得飲用水經(jīng)過(guò)衛(wèi)生機(jī)構(gòu)及水廠檢測(cè)后，出廠時(shí)微生物含量已符合國(guó)家對(duì)飲用水的相關(guān)規(guī)定（一般為每1 mL飲用水中細(xì)菌總數(shù)不超過(guò)100個(gè)）[6]，但由于運(yùn)輸過(guò)程中存在各種問(wèn)題（如水管爆裂、他人原因等）造成水源二次污染，導(dǎo)致水中微生物含量超標(biāo)。

微生物檢驗(yàn)作為衡量生活飲用水質(zhì)量的重要評(píng)價(jià)指標(biāo)之一，其能夠保證水質(zhì)在流行病學(xué)方面的安全性及可靠性[7]。目前疾病預(yù)防控制中心的微生物檢驗(yàn)方法主要包括以下幾種：濾膜法、多管發(fā)酵法及酶底物法。濾膜法由于操作便利，步驟簡(jiǎn)單，一般適用于雜質(zhì)含量較多的水樣檢驗(yàn)，但是該方法存在準(zhǔn)確性較低的弊端，故臨床運(yùn)用并不廣泛。而多管發(fā)酵法作為檢驗(yàn)水樣中總大腸菌落的常用方法之一，其具有可重復(fù)操作、具體估算大腸桿菌密度、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠等優(yōu)勢(shì)，運(yùn)用該方法計(jì)算飲用水樣本中細(xì)菌含量時(shí)，能夠?qū)㈥幮跃瓣?yáng)性菌同時(shí)顯現(xiàn)出來(lái)，可能與稀釋程度有關(guān)。由于總大腸菌群屬于無(wú)芽孢桿菌，因此將試管置于恒溫箱中培養(yǎng)，使其充分發(fā)酵并產(chǎn)生乳糖，這表示，總大腸菌群不僅存在需氧性，還存在厭氧性[8-9]。盡管多管發(fā)酵法步驟較為繁瑣、耗時(shí)較長(zhǎng)，但從專(zhuān)業(yè)角度出發(fā)，再加上人們對(duì)于飲用水水質(zhì)的要求提高，推薦以多管發(fā)酵法檢驗(yàn)為主。

根據(jù)周秀麗[10]報(bào)告顯示，其于2016年4月枯水期、8月豐水期各抽取30例微生物檢測(cè)指標(biāo)超標(biāo)的水樣作為檢驗(yàn)對(duì)象，分別采用多管發(fā)酵法及濾膜法對(duì)所有水樣進(jìn)行檢驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用多管發(fā)酵法對(duì)水樣樣本進(jìn)行檢驗(yàn)，其檢驗(yàn)準(zhǔn)確率明顯高于采用濾膜法進(jìn)行檢驗(yàn)的準(zhǔn)確率，有利于疾病預(yù)防控制中心對(duì)周?chē)|(zhì)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，與該文結(jié)果相似。該次研究結(jié)果中顯示，研究2組枯水期與豐水期耐熱大腸菌群與大腸埃希菌的微生物檢出率均優(yōu)于研究1組（P<0.05），充分說(shuō)明多管發(fā)酵法對(duì)于適應(yīng)溫度的總腸道菌群的檢出效果更佳。

綜上所述，使用濾膜法及多管發(fā)酵法對(duì)水中微生物進(jìn)行檢驗(yàn)，均具有一定成效，驗(yàn)證多管發(fā)酵法效果更佳，值得臨床推廣與采納。不過(guò)，該次研究由于選取樣本數(shù)量較少、研究時(shí)間較短，存在一定不足，因此，多管發(fā)酵法具體的檢出率是否優(yōu)于濾膜法仍有待進(jìn)一步研究，臨床可適當(dāng)增加樣本數(shù)量，延長(zhǎng)研究。

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（收稿日期：2019-09-18）