段麗 許巧鳳

（湖南省郴州市第一人民醫(yī)院，郵編423000）

【關(guān)鍵字】非梗阻性無精癥；AMH檢測；臨床；評估

一、研究對象

某醫(yī)院在獲得患者知情同意后，收集了三組不同男性的精漿樣本作為本次研究對象即：正常生育組、梗阻性無精癥組和非梗性無精癥組。依據(jù)世界衛(wèi)生組織標(biāo)準(zhǔn)，每組選取20例，年齡均在35歲左右。

二、儀器與試劑

采用的檢測儀器是由美國進(jìn)口的酶標(biāo)儀和洗板機(jī)以及全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀。還有國產(chǎn)的計(jì)算機(jī)輔助精子分析系統(tǒng)。測定血清促卵泡激素和睪酮的試劑均來自美國西門子診斷的產(chǎn)品。測定精漿或者血清的試劑由美國正規(guī)公司提供。計(jì)算機(jī)輔助精子的分析系統(tǒng)由北京某公司提供。

三、檢測方法

1.檢測樣本的采集。（1）血樣采集。將參與本次研究對象空腹時(shí)，最好在上午8點(diǎn)至10點(diǎn)之間為宜，在研究對象的前臂淺靜脈處抽取5毫升的血樣，將其離心后進(jìn)行血清分離，必須在8小時(shí)內(nèi)檢測出研究對象的血清促卵泡激素睪酮的濃度。（2）精液的采集。參與本次研究對象均在采集精液前一周停止性生活，利用手淫方法將精液采集于無菌容器中，將其放置在水溫為37攝氏度的水浴箱中孵育。參與研究對象在射精1小時(shí)內(nèi)取部分精液樣本，將其進(jìn)行5min的離心處理，精漿分別利用密封管進(jìn)行分裝，并冷凍于冰箱中，但溫度必須控制在負(fù)80攝氏度左右，在一個(gè)月的保存期限內(nèi)測定抗繆勒管激素水平。（3）采集睪丸組織。對研究對象進(jìn)行局部麻醉的情況下，利用常規(guī)檢測方法完成睪丸活檢術(shù)及獲取睪丸精子。

2.檢測方法。等到精液完全液化后，嚴(yán)格按照世界衛(wèi)生組織規(guī)定的檢測標(biāo)準(zhǔn)對精液做標(biāo)準(zhǔn)的分析。血清促卵泡激素與睪酮濃度檢測的最低限度為：0.10IU/L，0.14IU/L。具體檢測范圍為：0.1～170U/L、0.20～15.86nmoI/L。AMH檢測水平選擇雙抗體酶聯(lián)免疫吸附進(jìn)行雙份的重復(fù)測定。檢測的最低限度為3.20pmoI/L，測定范圍規(guī)定在3.20～1072pmoI/L。

3.關(guān)于研究對象睪丸體積的測量。運(yùn)用B超方法進(jìn)行測量，具體數(shù)據(jù)以公式為準(zhǔn)，睪丸的體積=睪丸的前后直徑×左右直徑×上下直徑×0.71。

4.研究對象的睪丸精子獲取術(shù)及對患者睪丸的病理學(xué)檢查。在對患者實(shí)施局部麻醉后，睪丸獲取術(shù)應(yīng)與患者睪丸的活檢同步進(jìn)行。選取患者睪丸較大的一側(cè)，利用常規(guī)切除法，將其切至露出白膜，并避開白膜下面的血管，在患者睪丸的中部將白膜用手術(shù)刀切開0.5～1.0厘米并將其進(jìn)行分離，大約兩50毫克左右的睪丸組織，將其中的一半放置于3毫升的培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)。將剩余的一半送去病理科做活檢，用浸泡液固定睪丸活檢組織，并包埋于石蠟中，將其切片并運(yùn)用蘇木精曙紅進(jìn)行染色，從而找尋生成精子的證據(jù)。

5.檢測報(bào)告。三個(gè)研究小組中各項(xiàng)檢測指標(biāo)顯示，非梗阻性無精癥患者組中睪丸體積的測量與AMH的檢測值明顯很低。而血清促卵泡激素的濃度反而明顯增高。其中睪酮濃度與其他兩組相比較不存在明顯差異。

四、臨床檢測與評估

本次研究充分利用睪丸獲取術(shù)來證實(shí)精子的成功恢復(fù)，通過對各種樣本的采集，包括血樣采集、精液的采集及睪丸組織的采集。進(jìn)行分析研究，發(fā)現(xiàn)研究對象的精液用AMH檢測在睪丸獲取術(shù)是否成功的判斷價(jià)值方面要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于血清促卵泡激素、睪酮濃度及測量患者睪丸體積大小的各項(xiàng)指標(biāo)，和其他檢測指標(biāo)相比，在正確判斷睪丸精子獲取術(shù)是否成功方面來講，具體較高的準(zhǔn)確性，并且陽性預(yù)測值及陽性依然比也很高。通過三組研究對象的實(shí)驗(yàn)表明，將血清促卵泡激素和睪酮濃度運(yùn)用在檢測和判斷睪丸獲取術(shù)是否成功方面的應(yīng)用價(jià)值很一般，相對于測量患者睪丸體積上無論從診斷還是準(zhǔn)確性方面，應(yīng)用價(jià)值都比較差，很難準(zhǔn)確的判斷患者睪丸精子獲取術(shù)是否取得成功。

通過對三組研究對象的實(shí)驗(yàn)證明，要想檢測睪丸起源的高水平AMH，必須在男性保持生育正常的狀況下方可檢測到準(zhǔn)確數(shù)據(jù)。當(dāng)人進(jìn)入青春期以后，AMH會(huì)優(yōu)先從人體睪丸支持細(xì)胞的最頂端逐步向周圍曲細(xì)精管腔內(nèi)分泌。這種現(xiàn)象可能與人進(jìn)入青春期后，睪丸開始發(fā)揮作用有密切的關(guān)聯(lián)。在生精上皮特定的周期階段很有可能會(huì)使精漿內(nèi)AMH的分泌物增強(qiáng)。然而，在此次研究中，精漿AMH檢測濃底的明顯下降與患者生精功能發(fā)生障礙有直接的關(guān)系。這也同時(shí)預(yù)示著患者AMH分泌程度與精子的成功生成有一定的關(guān)聯(lián)。但我們絕對不可能將最初AMH分泌濃度的逐漸降低有可能反映出睪丸支持細(xì)胞的改變排除在外，這樣一來，很有可能導(dǎo)致患者睪丸的生精速度停滯。AMH檢測是對非梗阻性無精癥患者造成持續(xù)性減少精子生成的一種特殊的非侵入性的標(biāo)志物。在絕大多數(shù)的情況下，一些男性睪丸功能不全或者不育癥患者中了解的人比較少。無精子癥有可能是梗阻性的，也有可能是屬于分泌性的。分泌性的無精子癥患者只能產(chǎn)生部分精子產(chǎn)物，也有可能缺乏完全正常產(chǎn)生精子的產(chǎn)物，這種情況，一般與睪酮濃度的不斷降低和血清促卵泡激素的濃度升高有直接的原因。通過對患者睪丸的活檢可以清楚的顯示出精子生成的不正常或者是完全缺乏精子生成的狀況。目前，國內(nèi)還沒有行之有效的治療方案。然而，臨床上最近出現(xiàn)了一種進(jìn)展較快的治療手段是，在患者卵胞漿內(nèi)實(shí)施單精子注射術(shù)。這樣一來，即便是無精癥患者，也可通過對患者附睪進(jìn)行穿刺手術(shù)或者對睪丸進(jìn)行活檢使無精患者產(chǎn)生充足的精子，在顯微鏡下使單精子注射術(shù)或者睪丸注射術(shù)順利的進(jìn)行并取得良好的進(jìn)展。

小結(jié)

總上所述，臨床上運(yùn)用AMH檢測非硬阻性無精癥者，能夠快速準(zhǔn)確的判斷患者實(shí)施的睪丸獲取術(shù)成功與否，所以，在臨床應(yīng)用中具有一定的應(yīng)用價(jià)值。