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        牛冷凍精液的質量檢測與管控

        2019-01-05 23:33:18馬振華
        中國畜禽種業(yè) 2019年1期
        關鍵詞:平皿細管載玻片

        馬振華

        (甘肅省家畜繁育改良管理站733000)

        1 工作準備

        (1)檢測標準,牛冷凍精液檢測標準按照GB4143-2008中的技術要求和判定標準[1],對0.25ml牛冷凍細管精液的容量、有效精子數(shù)、精子活力、畸形率、菌落數(shù)5項指標進項檢測。檢測嚴格按照“牛冷凍精液質量檢測技術操作規(guī)程”完成。

        (2)牛細管冷凍精液來源,甘肅省佳源畜牧生物科技有限責任公司庫房隨機批次抽取。檢測牛品種XM、XL、PA。

        (3)檢測室環(huán)境,室內保持清潔衛(wèi)生,整齊、安靜、無異味。室內配備控溫、控濕設施,保證工作期間室溫能控制在20~25℃,相對濕度控制在35%~55%。工作時應穿潔凈的工作服、鞋子,戴手套、口罩、帽子等。

        (4)儀器設備,檢測儀器設備的數(shù)量、性能和精度能滿足檢測工作要求,完好率為100%。玻璃器皿類刷洗干凈消毒、干燥后備用。

        (5)耗材試劑類,無論是一次性的還是可重復使用的都必須是無菌、無毒的?;瘜W試劑盡量使用分析純,培養(yǎng)基及染色試劑可選擇商品化的半成品。

        2 精液檢測

        2.1 劑量

        每頭牛隨機抽取3支細管冷凍精液室溫解凍,剪去超聲波封口端,用細管專用推針把精液逐一推入小試管內,用玻璃吸管與撿卵器連接后吸盡小試管內的精液,讀取吸管內精液量值,檢測每劑量細管凍精容量不少于0.18ml。

        2.2 精子活力

        2.2.1 精液解凍

        每頭牛取3支細管冷凍精液置于37℃水浴中解凍40s,解凍后擦干水珠,用專用剪剪去超聲波封口端,細管精液專用推針把精液逐一推入試管內,混勻活力≥35%。

        2.2.2 目測法

        用移液器取解凍精液約10uL置于載玻片的一端,為第一樣片,同樣方法取精液約10uL置于載玻片的另一端,為第二樣片,分別蓋上蓋玻片立即在顯微鏡(10×40)下觀察精子運動圖像。載物臺溫度應保持在38℃。觀察部位選擇蓋玻片的中部,每個樣片觀察3個以上視野,觀察不同液層內的精子運動狀態(tài),進行全面評定。至少觀察2個樣片,所有觀察樣片的平均值為最終評定結果。

        2.2.3 前進運動精子數(shù)

        精液解凍方法同2.2。用移液器吸取20μL精液注入盛有0.98ml的3.0%氯化鈉溶液的試管內混勻。血球計數(shù)板用血蓋片將計數(shù)室蓋好,用移液器吸取10μL稀釋精液于血蓋片邊緣,使稀釋精液自行流人計數(shù)室,均勻充滿,無氣泡。

        2.2.4 精子畸形率

        (1)抹片,各牛均取精液1滴,滴于載玻片一端,用另一邊緣光滑的載玻片與有樣品的載玻片呈一定夾角,將樣品均勻地拖布于載玻片上。自然風干5~10min,每樣品制作2個抹片。

        (2)固定,在已風干的抹片上滴上1.0~2.0ml中性福爾馬林固定液,固定15min后用清水緩緩沖去固定液,自然風干。

        (3)染色:將固定好后的抹片反扣在帶有平槽的有機玻璃面上,把姬姆薩染液滴于槽和抹片之間,讓其充滿平槽并使抹片接觸染液,染色1.5h后用清水緩緩沖去染液,晾干待檢。

        (4)鏡檢,將制備好的抹片在顯微鏡(400~600倍)下觀察,每個抹片觀察200個以上的精子(分左、右兩個區(qū)),取兩片的平均值。

        2.2.5 細菌數(shù)在超凈化工作臺內點燃酒精燈,平皿蓋面標記上每個牛的編號,75%酒精棉球擦抹整支細管,細管剪用酒精燈火焰消毒,剪去細管超聲波封口端,用細管推針將整支細管的精液注入平皿內,及時將恒溫53℃的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾倒入平皿內10~15ml,并轉動平皿使其與精液混合均勻。同時將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾倒入一沒有精液的滅菌平皿內作空白對照。待瓊脂凝固后,翻轉平板,放置在恒溫培養(yǎng)箱內,37℃培養(yǎng)48h[2]。為保持箱內濕度和防止水分的過分蒸發(fā),可放置一小燒杯水,到達培養(yǎng)時間立即計數(shù)。

        3 檢測結果

        凍精檢測結果見附表。

        4 小結

        (1)凍精外觀和劑型、劑量檢測結果為100%合格。目前各公牛站均采用精液細管封裝機,只要設備正常使用,不會影響精液質量。檢測精液密度每劑量有效精子數(shù)低于800萬個/劑,可通過精子密度測定儀調整[3]。精液處理室空氣采用負壓通風方式,人員著消毒服進入,生產結束后進行全面清洗消毒操作臺面,細管分裝軟管,創(chuàng)造無菌環(huán)境可有效降低細菌數(shù)。

        (2)做好種公牛早期培育與調教工作,嚴格控制體型防止形成草腹、保證公牛營養(yǎng)均衡合理供給,加強運動不少于2h/d,不得粗暴對待公牛,防止套采,避免公牛應激反應,采精場保持安靜,采精器械、場地嚴格消毒,采取適宜的防滑措施,凡是接觸精液的器具都應嚴格清洗消毒。稀釋液現(xiàn)配現(xiàn)用,雞蛋來源于無疫病的雞場,新鮮潔凈,冷藏保存,產后7d后的雞蛋不宜使用。避免夏季、冬季高溫和極寒冷天氣,陰雨雪和異常氣候天氣、種公牛免疫注射后15d,疾病治療期間均應停止生產,影響精液質量和種公牛健康。

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