王旭 馮星 紀(jì)軍 王華峰 左北瑤

摘要：本文結(jié)合工作實(shí)踐，對(duì)在試驗(yàn)條件簡(jiǎn)陋條件下制作羊的細(xì)管凍精進(jìn)行歸納，形成一個(gè)簡(jiǎn)易的制作羊細(xì)管凍精的方法，以期對(duì)羊的品種資源保護(hù)、高繁殖力種公羊利用等方面發(fā)揮積極作用。

關(guān)鍵詞：羊；細(xì)管凍精；方法

中圖分類號(hào)：S858.26 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B 文章編號(hào)：2096-3637（2017）07-0043-01

20世紀(jì)50年代，國(guó)外開(kāi)始研究羊的冷凍精液，80年代以后，隨著輸精方法的改進(jìn)和輸精器械的改良，羊冷凍精液的受胎率有了較大的提高。目前，國(guó)外關(guān)于羊冷凍精液的研究已有了較大的進(jìn)展，并在畜牧業(yè)較為發(fā)達(dá)的國(guó)家得到廣泛應(yīng)用。國(guó)內(nèi)羊冷凍精液的研究始于20世紀(jì)70年代，但在實(shí)際應(yīng)用和推廣實(shí)踐中，由于受諸多因素的影響，受胎率一直不太理想[1]。本文結(jié)合基層工作實(shí)踐和同行做法，形成一個(gè)羊細(xì)管凍精制作的簡(jiǎn)易方法，希望在羊品種資源保護(hù)、提高高繁殖力種公羊利用率、推廣人工授精技術(shù)等方面上發(fā)揮積極作用。

1 材料選擇

1.1 采精公羊

選擇生長(zhǎng)發(fā)育良好、健康無(wú)疾病、性欲較強(qiáng)、品種特征明顯的種公羊作為采精公羊。種公羊需提前1個(gè)月加強(qiáng)補(bǔ)飼，每只種公羊每天補(bǔ)充精料量為：玉米0.5～1kg，豆粕0.25～0.5kg，胡蘿卜0.5～1kg，雞蛋1～4枚。采精期間增加精料補(bǔ)給量，非采精期間酌情減少，早晚各補(bǔ)飼1次，自由飲水，每天運(yùn)動(dòng)不少于2h [2]。

1.2 稀釋液和冷凍液配制[3]

基礎(chǔ)液：葡萄糖3g+檸檬酸鈉3g+雙蒸水100ml，充分搖勻溶解。

稀釋液：取80ml基礎(chǔ)液+20ml卵黃，同時(shí)加入青霉素鈉和鏈霉素各10萬(wàn)單位，搖半個(gè)小時(shí)，使其充分溶解混合。

冷凍液：取88ml稀釋液+12ml甘油，搖0.5h，使其充分混合。

2 制作流程

2.1 精液采集

使用假陰道采精法采集精液，所有器械在使用前均要高溫消毒或75%酒精消毒。采精時(shí)，半蹲在臺(tái)畜右側(cè)，右手橫握假陰道，閥門靠手掌心，前低后高，待公羊爬跨陰莖頭露出包皮時(shí)，左手托住陰莖包皮，順勢(shì)將陰莖導(dǎo)入假陰道，再把假陰道傾斜，使集精杯朝下，待公羊向前猛沖射精時(shí)，射出的精液就直接進(jìn)入集精杯中，而不是沿著內(nèi)胎再流入集精杯，減少了精液的污染。

2.2 精液稀釋和平衡

精液采集后，首先檢測(cè)精液品密度、活力，只有密度不低于20億/ml，活力不低于0.7才能制作細(xì)管凍精。精液的稀釋采用了二次稀釋法，根據(jù)精液密度可先用稀釋液（提前放到37℃水浴鍋中加熱）稀釋1～2倍，然后4℃冰箱中平衡2h。待平衡后，再加入與稀釋液等量的冷凍液（4℃），這樣就對(duì)原精液稀釋了2～4倍，然后再在4℃冰箱中平衡2h。

2.3 細(xì)管凍精制作

2.3.1封裝

在一個(gè)不高于5℃的操作環(huán)境里進(jìn)行操作，平衡后的精液從4℃冰箱中拿出后，輕微混合，然后將精液吸入0.25ml細(xì)管中，并用封口粉封好。

2.3.2平衡

細(xì)管精液封裝好后，均勻擺放在細(xì)管架上，平衡5min左右。

2.3.3熏蒸

提前準(zhǔn)備好的一個(gè)大的容器內(nèi)倒入液氮，待分裝好的細(xì)管平衡后，迅速將細(xì)管架放入容器內(nèi)，確保細(xì)管與液氮面保持0.8～1cm的距離，蓋上容器蓋子，熏蒸5min左右。

2.3.4冷凍

細(xì)管精液在液氮面上熏蒸完后，將細(xì)管全部浸入液氮中，放置10～30min左右，便完成了細(xì)管凍精制作。

2.4凍精解凍和保存

將制作好的細(xì)管凍精隨機(jī)抽取1～3只，在38～40℃的溫水中解凍13～15s，然后再顯微鏡下觀察解凍后的活力，活力檢測(cè)在0.3以上便可收集保存，否則棄去不用。將制作好的細(xì)管凍精裝入凍精袋，標(biāo)注公羊的品種、凍精數(shù)量，精液活力以及生產(chǎn)日期等信息后便可裝入液氮罐長(zhǎng)期保存。

3 小結(jié)

在條件簡(jiǎn)易的情況下，如果制作細(xì)管凍精的環(huán)境溫度較高，可以準(zhǔn)備一個(gè)大的泡沫箱，在里面放上冰塊，制造一個(gè)低溫的小環(huán)境，便可以完成細(xì)管封裝。

封裝細(xì)管時(shí)，如果沒(méi)有專用的設(shè)備，可以采取以下簡(jiǎn)易做法：將細(xì)管海綿端對(duì)齊，放入口中，另一端放入精液中，先吸少量精液，然后再吸入一小段空氣，最后將細(xì)管吸滿，用封口粉封住即可。

細(xì)管架放入液氮容器時(shí)一定要放平，同時(shí)確保液氮面與細(xì)管的距離適當(dāng)，如果液氮面與細(xì)管太近，細(xì)管內(nèi)的精液會(huì)立即冷凍，距離太遠(yuǎn)，冷凍的速度變慢，都會(huì)對(duì)結(jié)果造成影響。

參考文獻(xiàn)

[1]周芬娜，賀曉珺，智利紅等.羊冷凍精液人工授精技術(shù)研究進(jìn)展[J].獸醫(yī)導(dǎo)刊，2015（14）：66.

[2]紀(jì)軍，王旭，艾爾肯江等. 巴音布魯克種公羊馴化采精探析[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2003，41（7）：2971-2972.

[3]郭志明，馬濤. 綿羊凍精的生產(chǎn)及其影響因素[J].青海畜牧獸醫(yī)雜志， 2003，33（3）：46.