朱愛(ài)維

(常州市中心血站，江蘇 常州 213004 )

新鮮冰凍血漿（fresh frozen plasma，F(xiàn)FP）是臨床上常用的血液成分之一，具有促進(jìn)組織修復(fù)及止血的作用[1]。冷沉淀（cryoprecipitate，CP）是指將FFP在低溫（1-6℃）解凍后沉淀的白色絮狀物，是FFP中部分凝血因子的濃縮制品。冷沉淀主要含有纖維結(jié)合蛋白（fibronectin，F(xiàn)n）、血管性血友病因子（von willebrand factor，vWF）、纖維蛋白原（fibrinogen，F(xiàn)IB）、凝血因子X(jué)III等，其對(duì)甲型血友病、彌漫性血管內(nèi)凝血及產(chǎn)婦大出血均具有良好的治療效果[2]。目前，如何提高新鮮冰凍血漿冷沉淀的產(chǎn)量及質(zhì)量等問(wèn)題已成為采供血機(jī)構(gòu)的重要研究課題。本次研究主要探討選擇不同的制備時(shí)機(jī)在制備新鮮冰凍血漿時(shí)對(duì)其冷沉淀質(zhì)量的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次研究的對(duì)象為將180份全血。這180份全血均來(lái)源于無(wú)償獻(xiàn)血的健康人群，每份全血的容量約為400 mL，其新鮮冰凍血漿的容量為200 ml。

1.2 研究方法

1）本次研究使用的儀器為全自動(dòng)血凝分析儀（由德國(guó)美創(chuàng)公司生產(chǎn)，型號(hào)為1800）、聯(lián)排熱合機(jī)（由韓國(guó)森通公司生產(chǎn)，型號(hào)為SE260）和血漿速凍機(jī)（由盧森堡公司生產(chǎn)，型號(hào)為MBF21）。本次研究使用的試劑盒為纖維蛋白原測(cè)定試劑盒（由南京建成生物工程研究所提供，貨號(hào)為F010）和凝血因子Ⅷ測(cè)定試劑盒（由德國(guó)西門子公司提供，貨號(hào)為546585A）。2）制備新鮮冰凍血漿的方法是：⑴將400 ml的全血分2次進(jìn)行離心后制備成血漿，即將溫度控制在2℃～6℃，第一次以3500 r的速度對(duì)全血進(jìn)行6 min的離心處理，第二次以4000 r的速度對(duì)全血進(jìn)行7 min的離心處理。⑵將血漿分別保存6 h、8 h和12 h，然后將其速凍40 min后制備成新鮮冰凍血漿，并將其移至溫度為-20℃的低溫冰箱中進(jìn)行保存。100 mlFFP制備的冷沉淀為1個(gè)單位。3）制備冷沉淀的方法是：使用虹吸法制備冷沉淀，將新鮮冰凍血漿的容量控制在40 mL左右（上下不超過(guò)5 mL），對(duì)其進(jìn)行熱合后立即轉(zhuǎn)移至-50℃的速凍機(jī)內(nèi)，在速凍結(jié)束后立即將其轉(zhuǎn)移至-20℃的低溫冰箱中進(jìn)行保存。4）對(duì)新鮮冰凍血漿冷沉淀進(jìn)行檢測(cè)的方法是：按照試劑盒說(shuō)明書中的方法測(cè)量新鮮冰凍血漿冷沉淀中纖維蛋白原和凝血因子Ⅷ的含量，并計(jì)算冷沉淀中凝血因子的合格率。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察在第6 h、第8 h和第12 h制備的新鮮冰凍血漿冷沉淀中FIB的含量和凝血因子Ⅷ的含量及其冷沉淀的合格率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

將本次研究中的數(shù)據(jù)錄入到SPSS17.0軟件中進(jìn)行處理，計(jì)量資料呈正態(tài)分布的定量數(shù)據(jù)用（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)%表示，采用χ2檢驗(yàn)；組間比較采用t檢驗(yàn)，若方差不齊，則采用校正t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 在不同的制備時(shí)間制備的新鮮冰凍血漿冷沉淀中FIB含量和Ⅷ含量的比較

與在第12 h制備新鮮冰凍血漿冷沉淀相比，在第6 h和第8 h制備的新鮮冰凍血漿冷沉淀中凝血因子Ⅷ的含量均更高，P＜0.05；在第6 h、第8 h和第12 h，制備的新鮮冰凍血漿冷沉淀中FIB的含量相比，P＞0.05。詳見(jiàn)表1。

表1 在不同的制備時(shí)間制備的新鮮冰凍血漿冷沉淀中FIB、Ⅷ含量的比較（±s ）

表1 在不同的制備時(shí)間制備的新鮮冰凍血漿冷沉淀中FIB、Ⅷ含量的比較（±s ）

注：*與第12 h時(shí)相比，P＜0.05。

時(shí)間 份數(shù) FIB的含量（g/L） Ⅷ的含量（IU/mL）第6 h 60 8.14±0.28 75.18±0.73*第8 h 60 8.20±0.46 74.99±0.81*第12 h 60 8.04±0.54 56.45±0.52

2.2 在不同的制備時(shí)間制備的新鮮冰凍血漿冷沉淀合格率的比較

與在第12 h制備的新鮮冰凍血漿冷沉淀相比，在第6 h和第8 h制備的新鮮冰凍血漿冷沉淀的合格率均更高，P＜0.05；在第6 h和第8 h制備的新鮮冰凍血漿冷沉淀的合格率相比，P＞0.05。詳見(jiàn)表2。

表2 在不同的制備時(shí)間制備的新鮮冰凍血漿冷沉淀合格率的比較[n（%）]

3 討論

在2012年頒布的GB19469-2012《全血及成分血質(zhì)量要求》中，新鮮冰凍血漿是指將存放于冷藏環(huán)境的全血在6 h（保養(yǎng)液為ACD）或8 h（保養(yǎng)液為CPDA-1或CPD）分離出血漿后速凍成固態(tài)的成分血[3]。血漿是血液內(nèi)的非細(xì)胞成分，主要包含蛋白質(zhì)、無(wú)機(jī)物、糖類、水分及非蛋白含氮化合物等[4]。臨床上應(yīng)用的血漿主要由血站提供，血漿制品主要包括普通冰凍血漿、病毒滅活冰凍血漿及新鮮冰凍血漿等。相關(guān)的研究表明，以新鮮冰凍血漿為原材料制備的冷沉淀，其凝血因子Ⅷ會(huì)受到制備時(shí)間的影響，而影響冷沉淀質(zhì)量的主要因素為不穩(wěn)定的凝血因子[5]。有研究發(fā)現(xiàn)，凝血因子Ⅷ的半衰期約為8 h，超過(guò)此時(shí)間其易失去活性。另外，凝血因子Ⅷ的活性還可受到獻(xiàn)血者自身凝血因子的水平、采集血液的時(shí)間、全血運(yùn)輸時(shí)的溫度、血漿制備的方法和時(shí)間等因素的影響[6]。本次研究的結(jié)果顯示，與在第12 h制備新鮮冰凍血漿冷沉淀相比，在第6 h和第8 h制備的新鮮冰凍血漿冷沉淀中凝血因子Ⅷ的含量均更高，P＜0.05；在6 h、8 h和12 h制備所得的新鮮冰凍血漿冷沉淀中FIB的含量相比，P＞0.05。與在第12 h制備的新鮮冰凍血漿冷沉淀相比，在第6 h和第8 h制備的新鮮冰凍血漿冷沉淀的合格率均更高，P＜0.05；在第6 h和第8 h制備的新鮮冰凍血漿冷沉淀的合格率相比，P＞0.05。此研究結(jié)果符合《血站技術(shù)操作規(guī)程》（2012版）中有關(guān)抽檢樣本質(zhì)量控制指標(biāo)的范圍，可作為血液采集及制備的受控要求。

綜上所述，在第6 h和第8 h制備的新鮮冰凍血漿冷沉淀的質(zhì)量較好。