邢士剛

（臨沂市中心醫(yī)院 山東 臨沂 276400）

近年來(lái)，隨著臨床器官移植、腫瘤化療患者的增多，廣譜抗生素、免疫抑制劑、抗腫瘤藥物和化療等臨床治療手段的廣泛開(kāi)展，以及我國(guó)人口老齡化進(jìn)程加快，免疫受損病人數(shù)量日益增多，重癥下呼吸道感染的比例呈明顯上升趨勢(shì)；與此同時(shí)，感染的病原微生物呈現(xiàn)多樣化和復(fù)雜化，細(xì)菌耐藥問(wèn)題日益突出，重癥下呼吸道感染的臨床救治業(yè)已成為研究焦點(diǎn)。重癥下呼吸道感染病原體通常不明確，當(dāng)前主要采用抗原/抗體免疫學(xué)方法、傳統(tǒng)微生物培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行診斷，但這些方法多存在培養(yǎng)周期長(zhǎng)、培養(yǎng)陽(yáng)性率低的問(wèn)題，同時(shí)非培養(yǎng)技術(shù)基于醫(yī)務(wù)人員對(duì)疾病的傾向性診斷，復(fù)雜疑難感染性疾病對(duì)病原普全面檢測(cè)需要通常無(wú)法得到滿(mǎn)足。二代測(cè)序技術(shù)是新型DNA/RNA測(cè)序方法，一方面具有更高通量和測(cè)速速度，另一方面理論上能夠?qū)⑺袧撛诓≡w無(wú)偏倚檢測(cè)出來(lái)，所以在重癥下呼吸道感染診斷中該技術(shù)具有重要應(yīng)用價(jià)值。本研究選擇我院收治重癥下呼吸道感染患者120例，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和常規(guī)組，常規(guī)組采用美羅培南降階梯經(jīng)驗(yàn)性廣譜抗菌治療，實(shí)驗(yàn)組采用NGS技術(shù)測(cè)定BALF和痰液明確病原微生物后選用相應(yīng)的抗菌藥物進(jìn)行治療。

1.資料與方法

1.1 一般資料

本次研究分析我院收治的120例重癥下呼吸道感染患者，男性患者75例，女性患者55例，患者最小年齡28歲，最大年齡67歲，平均年齡（48.14±4.84）歲。將患者分成實(shí)驗(yàn)組和常規(guī)組，兩組各60例，兩組患者臨床資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具備可比性（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 常規(guī)組治療

常規(guī)組患者采用美羅培南進(jìn)行治療，采用靜脈注射的方式，將100ml 5%的葡萄糖溶液與0.45g美羅培南混合，每天2～4次，連續(xù)治療兩周。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)組檢測(cè)和治療

（1）樣本護(hù)理和DNA提?。喝?.5～3ml痰夜，經(jīng)玻璃珠混合震蕩后依據(jù)TIANamp Micro DNA Kit試劑盒步驟提取DNA。（2）文庫(kù)構(gòu)建和測(cè)序：應(yīng)用Agilent 2100 Bioanalyzer質(zhì)控文庫(kù)片段大小，應(yīng)用Qubit dsDNA HS Assay Kit質(zhì)控分析DNA文庫(kù)濃度，環(huán)化形成單鏈環(huán)形結(jié)構(gòu)。文庫(kù)環(huán)化后經(jīng)滾環(huán)復(fù)制生成DNB納米球，將其加載到測(cè)序芯片，通過(guò)BGISEQ-500測(cè)序。（3）數(shù)據(jù)分析：將長(zhǎng)度小于35bp和低質(zhì)量數(shù)據(jù)去除，通過(guò)BWA對(duì)比，去除高質(zhì)量數(shù)據(jù)中比對(duì)上人參考基因序列，剩下數(shù)據(jù)將低復(fù)雜度reads去除后，和專(zhuān)用微生物大數(shù)據(jù)比對(duì)，按照細(xì)菌、病毒、真菌、寄生蟲(chóng)將比對(duì)后數(shù)據(jù)進(jìn)行分類(lèi)和排列。依據(jù)檢出毒力基因、耐藥基因的信息應(yīng)用抗菌藥物治療。

1.3 觀察指標(biāo)

對(duì)兩組患者的治療效果和不良反應(yīng)發(fā)生情況進(jìn)行對(duì)照。

1.4 療效判定標(biāo)準(zhǔn)

患者下呼吸道感染癥狀完全消退，生命體征正常為有效；患者下呼吸道感染癥狀得到改善，生命體征正常為改善；患者下呼吸道感染癥狀沒(méi)有任何改善，生命體征不正常為無(wú)效。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本次研究采用SPSS22.0進(jìn)行相關(guān)數(shù)據(jù)分析，采用標(biāo)準(zhǔn)差進(jìn)行計(jì)量資料分析，采用（%）進(jìn)行計(jì)數(shù)資料分析，結(jié)合χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 兩組臨床治療效果對(duì)照

實(shí)驗(yàn)組的治療有效率高于常規(guī)組，差異明顯（P＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 兩組臨床治療效果對(duì)照

2.2 兩組不良反應(yīng)發(fā)生率對(duì)照

實(shí)驗(yàn)組不良反應(yīng)發(fā)生率顯著低于常規(guī)組，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 兩組不良反應(yīng)發(fā)生率對(duì)照

3.討論

重癥下呼吸道感染在重癥監(jiān)護(hù)病房具有較高發(fā)生率，該患者發(fā)病后需及時(shí)接受有效治療，否則會(huì)嚴(yán)重威脅患者健康和安全。下呼吸道感染的癥狀包括呼吸短促、虛弱、發(fā)燒、咳嗽和疲勞[3]。有許多癥狀符合下呼吸道感染的特征，最常見(jiàn)的兩種是支氣管炎和水腫，流感也對(duì)上呼吸道和下呼吸道產(chǎn)生影響。具體治療中醫(yī)生應(yīng)該在掌握導(dǎo)致感染的病原體的基礎(chǔ)上，合理的采用抗菌藥物[2]。臨床治療中一般都是采用抗生素治療，但是醫(yī)院內(nèi)大量的使用頭孢菌素，導(dǎo)致假單孢銅綠桿菌的耐藥性增強(qiáng)，在治療中更加困難。所以，在采用抗生素治療前，首先應(yīng)明確病原體，并依據(jù)毒力基因、耐藥基因確定治療方案。

重癥下呼吸道感染病原體通常不明確，當(dāng)前主要采用抗原/抗體免疫學(xué)方法、傳統(tǒng)微生物培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行診斷，但這些方法多存在培養(yǎng)周期長(zhǎng)、培養(yǎng)陽(yáng)性率低的問(wèn)題。二代測(cè)序技術(shù)是新型DNA/RNA測(cè)序方法，該技術(shù)基于對(duì)核酸分子的檢測(cè)，敏感性高，耗時(shí)短，不依賴(lài)于傳統(tǒng)的病原學(xué)培養(yǎng)，前期抗生素應(yīng)用對(duì)檢測(cè)影響??；能夠同時(shí)檢測(cè)細(xì)菌、真菌、病毒、寄生蟲(chóng)等各類(lèi)病原體，特異性高，同時(shí)可以檢出毒力基因、耐藥基因的信息；檢測(cè)通量極大，一次可以檢測(cè)出超過(guò)1千萬(wàn)條序列，理論上檢測(cè)病原體通量可以達(dá)到1千萬(wàn)；不僅可以發(fā)現(xiàn)已知病原體，而且可以發(fā)現(xiàn)完全未知的病原體。

本研究中，實(shí)驗(yàn)組采用NGS技術(shù)測(cè)定BALF和痰液明確病原微生物后選用相應(yīng)的抗菌藥物進(jìn)行治療。實(shí)驗(yàn)組治療效果明顯好于常規(guī)組，實(shí)驗(yàn)組不良反應(yīng)發(fā)生率低于常規(guī)組，兩組差異顯著（P＜0.05）。可見(jiàn)，在重癥下呼吸道感染治療中采用二代測(cè)序技術(shù)，可以指導(dǎo)抗菌藥物應(yīng)用，做到精準(zhǔn)治療，從而降低耐藥菌株的耐藥性，提升治療效果，具有較高推廣價(jià)值。