王船英

(安徽醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校 安徽合肥 230601)

為了更好地開發(fā)利用桔梗的藥用價(jià)值，國內(nèi)外大批專家學(xué)者對(duì)其提取工藝進(jìn)行了大量的研究[1]。該課題通過設(shè)計(jì)單因素實(shí)驗(yàn)和三因素三水平正交試驗(yàn)對(duì)桔梗提取工藝進(jìn)行考察分析，為桔梗的進(jìn)一步開發(fā)和利用提供參考。

1單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.1加水量的研究

選取加水量為6倍、8倍和10倍時(shí)，稱取5g粉末，提取溫度為80℃，提取次數(shù)為1次，提取時(shí)間為1h時(shí)，研究加水量對(duì)浸膏率的影響，詳見表1和圖2。

表1 加水量對(duì)浸膏率的影響

圖1 加水量對(duì)出膏率的關(guān)系圖

由圖1可以看出，隨著加水量依次升高，浸膏提取率依次增加，在加水量為6倍水時(shí)，提取率較低，加水量為12倍水時(shí)，提取率最高。綜合考慮，選取8倍、10倍、12倍三個(gè)水平進(jìn)行正交試驗(yàn)。

1.2提取時(shí)間的研究

選取提取時(shí)間為0.5h、1h、1.5h和2h時(shí)，提取溫度為80℃，提取次數(shù)為1次，加水量為8倍水時(shí)，研究提取時(shí)間對(duì)浸膏率的影響，見表2和圖2。

表2 提取時(shí)間對(duì)浸膏率的影響

圖2提取時(shí)間對(duì)出膏率的關(guān)系圖

根據(jù)表2和圖2可以看出，隨著提取時(shí)間依次增加，從0.5h到1.5h浸膏率顯著增加，1.5h到2h出膏率增速減緩，提取時(shí)間為2h時(shí)，浸膏率達(dá)到最高。從工廠生產(chǎn)的經(jīng)濟(jì)效益考慮，選取1.5h為最佳提取時(shí)間。綜合考慮，選取0.5h、1h、1.5h三個(gè)水平進(jìn)行正交試驗(yàn)。

1.3提取次數(shù)的研究

選取提取次數(shù)為1次、2次、3次時(shí)，提取溫度為80℃，提取時(shí)間為1h，加水量為8倍水時(shí)，研究提取次數(shù)對(duì)浸膏率的影響，見表3和圖3。

表3 提取時(shí)間對(duì)浸膏率的影響

圖3提取次數(shù)對(duì)出膏率的關(guān)系圖

根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，當(dāng)提取次數(shù)依次增加時(shí)，從1次到3次，浸膏率呈明顯上升趨勢。第3次時(shí)，浸膏率最高，故選取3次為最佳提取次數(shù)。綜合考慮，選取1次、2次、3次進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。結(jié)論：根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，得出最優(yōu)提取條件應(yīng)該是：加水量為10倍，提取時(shí)間為1.5h，提取次數(shù)為3次。

2正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

依據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn),以出膏率為考察指標(biāo),優(yōu)化出桔梗提取物的最佳提取工藝。

經(jīng)過單因素實(shí)驗(yàn)，得出提取時(shí)間為1.5h，提取次數(shù)為3h，加水量為10倍水的最優(yōu)提取條件，由于實(shí)驗(yàn)條件的設(shè)置不精確，實(shí)驗(yàn)變量的設(shè)置不具體，故有必要做一次正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，此正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)以三因素四水平正交表(見表4)，圍繞單因素實(shí)驗(yàn)得出的最優(yōu)條件，上下波動(dòng)取值。因正交表中有空列以計(jì)算實(shí)驗(yàn)誤差項(xiàng)，故每次實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次，取其平均值計(jì)算。

表4 正交試驗(yàn)結(jié)果

2.1正交試驗(yàn)出膏率檢查

表5 正交試驗(yàn)出膏率情況

2.2正交試驗(yàn)中桔梗皂苷D含量測定

2.2.1色譜條件 ①高效液相色譜儀:Waters1525二元高壓泵和Waters2489紫外檢測器。②色譜柱:大連依利特C18色譜柱(4.6mm×250mm,10μm)。③流動(dòng)相:乙腈-水(28:72)[2]。④檢測波長:210nm。⑤流速:1ml/min。⑥柱溫:30℃ 。⑦進(jìn)樣量：20μL。

2.2.2 對(duì)照溶液的制備 精密稱取桔梗皂苷D對(duì)照品2mg，至10mL量瓶中，加甲醇到刻度，再精密吸取1mL，置于10mL量瓶中，加甲醇到刻度，即得濃度為0.02mg/ml的對(duì)照品溶液。

2.2.3 供試品的制備

精密稱定1g浸膏，加水5mL將其超聲溶解，過0.22μm微孔濾膜，即得。

2.2.4桔梗皂苷D含量測定

取9批供試品溶液進(jìn)行HPLC分析。結(jié)果見下表所示。經(jīng)計(jì)算，9批供試品中桔梗皂苷D含量在0.01%-0.05%之間，見表6。

表6 供試品溶液HPLC測定結(jié)果

2.3評(píng)價(jià)指標(biāo)

對(duì)提取得到的干浸膏中的桔梗皂苷D含量及浸膏率進(jìn)行測定，以此為指標(biāo)優(yōu)選桔梗皂苷D的最佳提取工藝，根據(jù)綜合評(píng)分法(綜合評(píng)分=桔梗皂苷含量*70%+出膏率*30%)，計(jì)算綜合評(píng)分，并以該綜合評(píng)分為評(píng)價(jià)指標(biāo)。結(jié)果見表7所示。

表7 桔梗皂苷D提取工藝的綜合評(píng)分

根據(jù)正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，提取次數(shù)和提取時(shí)間對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響最大，加水量對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響最小。故可以得出結(jié)論，以桔梗出膏率和桔梗皂苷D含量為考察指標(biāo)的最佳提取工藝為A1B3C3，即加水量為8倍、提取1.5h、提取3次為最優(yōu)提取方案。