□ 冉瑞玲 張 欽 重慶市萬(wàn)州食品藥品檢驗(yàn)所

目前，四環(huán)素類(lèi)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和進(jìn)出口檢驗(yàn)檢疫相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)中，從需要的儀器設(shè)備、環(huán)境條件條件和檢測(cè)限及精密度要求的角度，GB/T 21317-2007中的高效液相色譜法可在基層檢驗(yàn)部門(mén)得到廣泛應(yīng)用。

表1 加標(biāo)回收率及精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1 樣品前處理

稱(chēng)取均質(zhì)后的樣品5.00g，置于50mL聚丙烯離心管中，分別用15mL、15mL、10mL 0.1moL/LEDTA-Mcllvainc緩沖溶液及5mL三氯甲烷冰水裕超聲提取三次，渦旋冷凍水平離心，合并上清液，加入三氯乙酸定容至50mL，渦旋冷凍水平離心。吸取10mL提取液以1滴/s的速度過(guò)PRIME HLB固相萃取柱，減壓抽干，用10mL30%甲醇乙酸乙酯洗脫，將洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，用30%甲醇三氟乙酸水溶液溶解殘?jiān)?，過(guò)0.45μm濾膜，供液相色譜測(cè)定。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品液液萃取優(yōu)化

本方法增加使用了三氯甲烷，使用高速離心機(jī)分層。GB/T21317-2007只選用了EDTA-Mcllvainc緩沖溶液，無(wú)法除去脂肪。

2.2 濃縮優(yōu)化

GB/T21317-2007中選用的是氮吹儀濃縮洗脫液，且溫度要求低于40℃。眾所周知，氮吹時(shí)的氣流會(huì)帶走一部分目標(biāo)物，使得我們平時(shí)做檢品時(shí)容易無(wú)意識(shí)的放走不合格品。本方法將氮吹方式改為低壓濃縮儀進(jìn)行濃縮樣品液，其目的在于減少流失量，提高回收率，盡可能地使樣品檢出量接近真值。

2.3 上機(jī)前去除蛋白質(zhì)的方法

本方法采用10000rpm/min 5min水平離心機(jī)，相對(duì)普通離心機(jī)而言，更好地使樣品分層，分別為最底層的三氯甲烷、中層樣品纖維等、上層提取液。加入5%三氯乙酸后離心，使得沉淀的蛋白質(zhì)平穩(wěn)地固定在離心管底部，使樣品液通過(guò)PRIME HLB柱更容易。

3 回收率及精密度試驗(yàn)

取陰性樣品，加入水平分別為40、100、200ng/g標(biāo)樣，每組水平 3次平行樣，同樣品處理，進(jìn)行加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如表1所列，金霉素回收率在84%～89%、土霉素回收率在 88%～92%之間、四環(huán)素回收率在86%～88%、強(qiáng)力霉素回收率在85%～90%之間，重復(fù)性較好，RSD值＜3% ，因此該方法的準(zhǔn)確度和精確度均可以滿(mǎn)足平時(shí)大批量樣品的測(cè)定要求。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)在GB/T 21317-2007的基礎(chǔ)上進(jìn)行了改進(jìn)，提取過(guò)程中加入了三氯甲烷及三氯乙酸，有效去除了樣品中的脂肪以及蛋白質(zhì)，達(dá)到很好的過(guò)柱效果。分離時(shí)采用水平離心機(jī)，更好地分離提取液及樣品。結(jié)果表明，GB/T 21317-2007經(jīng)本文改進(jìn)后，操作更容易，方便平時(shí)大批量樣品的處理，回收率及精密度良好，適用于動(dòng)物源性食品中四環(huán)素類(lèi)殘留量的檢測(cè)。