劉 郁，于 亮，段紹斌

(新疆醫(yī)科大學附屬中醫(yī)醫(yī)院，新疆 烏魯木齊830000)

p75NTR全稱神經生長因子受體p75是由399個氨基酸組成的I 型細胞跨膜糖蛋白。朱曉婷,趙郁,王軼楠等人[1]認為P75NTR在中樞神經系統(tǒng)的神經元和免疫系統(tǒng)的中性粒細胞、T淋巴細胞和B淋巴細胞等廣泛的分布可通過免疫途徑對胃癌細胞的繁殖與擴散產生一定的抑制作用。雖然很多學者從不同角度論述了p75NTR對胃癌轉移有一定的抑制能力，但實驗數據的支撐還很不足，因此急需建立較大的數據庫，并利用統(tǒng)計學對這些數據進行分析。本文目的在于通過制備組織樣本和建立胃癌細胞系來研究p75NTR在胃癌組織中的表達以及其對胃癌細胞侵襲和轉移的抑制能力，探討p75NTR對胃癌轉移抑制的機制。

1 材料與方法

1.1材料

a.組織樣本：選取我院2015年至2016年收治的胃癌患者80例，將其分為兩組，其中一組為無轉移胃癌患者，另一組為有轉移胃癌患者，兩組患者均為40例。所有患者均經病理診斷確診為無轉移胃癌和有轉移胃癌，每位患者各取一份病理組織。

b.胃癌細胞系：利用本院胃癌患者活檢組織進行體外細胞培養(yǎng)，獲得細胞系。

1.2主要試劑與儀器

a.SP試劑盒和DAB顯色試劑盒：北京中山公司；b.RPMI1640培養(yǎng)基：Invitrogen公司；c.ECL Western blot檢測試劑盒：Amersham公司；d.超凈工作臺：賽默飛世爾科技有限公司；e.CO2培養(yǎng)箱：上海喬躍電子科技有限公司；f.核酸蛋白檢測儀：上海嘉鵬科技有限公司；g.光學顯微鏡：Nikon；h.電轉移儀：Bio-Rad公司

1.3方法

首先進行細胞培養(yǎng)：取胃癌患者的活檢組織，剪碎后于RPMI1640培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，3 d傳代一次，隔天換液一次。其次制備組織標本：取患者胃癌組織于福爾馬林溶液中保存48 h后取出，石蠟包埋，切片，HE染色，DAB顯色，染色評分[2]。最后進行western blog檢測：利用Amersham公司的ECL Western blot檢測試劑盒對胃癌組織中的p75NTR的表達進行檢測，計算其表達率。

1.4統(tǒng)計學方法

2 結果

2.1p75NTR在胃癌組織中的表達及胃癌組織的染色評分p75NTR在無轉移胃癌中的表達率為75%，染色評分為(1.25±0.32)；p75NTR在有轉移胃癌中的表達率為17.5%，染色評分為(0.51±0.11)，見表1、圖1。

表1 p75NTR在胃癌組織中的表達及胃癌組織的染色評分

由表1可知，發(fā)生轉移的胃癌組織中p75NTR表達率和染色評分均顯著低于未發(fā)生轉移的胃癌組織，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

2.2胃癌細胞是否轉染p75NTR的侵襲率和轉移率比較轉染p75NTR的胃癌細胞侵襲入細胞外基質的侵襲率為13.5%，胃癌細胞的遷移率為23.6%；未轉染p75NTR的胃癌細胞侵襲入細胞外基質的侵襲率為35.8%，胃癌細胞的遷移率為57.3%，見表2。

由表可知，轉染p75NTR的胃癌細胞侵襲入細胞外基質的侵襲率和轉移率均顯著低于未轉染p75NTR的胃癌細胞，差異均有統(tǒng)計學意義。

a 癌旁組織；b和c 無轉移的胃癌原發(fā)灶；d 有轉移的胃癌原發(fā)灶；e 淋巴結轉移灶；f 陰性對照

表2 胃癌細胞是否轉染p75NTR的侵襲率和轉移率比較

3 討論

胃癌在發(fā)展到一定程度后就會發(fā)生轉移，在胃癌早期多數患者的癥狀不典型，而且胃癌病程較短，有相當一部分胃癌病人在確診之時已有明顯的胃癌轉移癥狀，并很快出現惡病質[3]。胃癌的轉移途徑有很多種，不同患者情況不同，胃癌的轉移途徑也會不一樣。肝臟和腹腔、左側鎖骨上淋巴結都是最多見的胃癌的轉移途徑，胃癌發(fā)生腹腔廣泛轉移可出現腹水，肝臟轉移時可出現肝腫大及相關的癥狀[4]。研究顯示，胃癌的淋巴結轉移是胃癌轉移的重要途徑，而且發(fā)生較早。淋巴結轉移占胃癌轉移的70%，胃下部癌腫常轉移至幽門下、胃下及腹腔動脈旁等淋巴結，而上部癌腫常轉移至胰旁、賁門旁、胃上等淋巴結[5,6]。

近年來，越來越多的研究證實了，p75NTR對于部分腫瘤的發(fā)展有抑制作用，被認為是一種潛在的腫瘤抑制劑[7]。相關報道稱，p75NTR對前列腺癌的生長和增殖有顯著的抑制作用；然而又有學者研究發(fā)現，p75NTR對黑色素瘤細胞的腦轉移又有促進作用[8,9]。兩項報道的結論之間存在著顯著的矛盾，這也提示我們p75NTR發(fā)揮的作用并不是固定的，而可能因環(huán)境與腫瘤的不同而發(fā)揮著不同的作用[10,11]。本文先通過western blot檢測了p75NTR在有轉移胃癌組織和無轉移胃癌組織中的表達，探討了p75NTR的表達與胃癌組織發(fā)生轉移的相關性，又通過顯微鏡觀察了有無p75NTR存在的情況下，胃癌細胞侵襲入細胞外基質的能力和其轉移運動能力[12]。結果顯示,p75NTR在無轉移胃癌中的表達率為75%，染色評分為1.25±0.32；p75NTR在有轉移胃癌中的表達率為17.5%，染色評分為0.51±0.11。轉染p75NTR的胃癌細胞侵襲入細胞外基質的侵襲率為13.5%，胃癌細胞的遷移率為23.6%；未轉染p75NTR的胃癌細胞侵襲入細胞外基質的侵襲率為35.8%，胃癌細胞的遷移率為57.3%。研究表明p75NTR通過一定的作用機制抑制了胃癌組織的轉移。

綜上,p75NTR在有轉移胃癌組織中的表達顯著低于無轉移胃癌組織，且能明顯抑制胃癌細胞的侵襲能力和轉移能力，對于臨床上利用靶向治療轉移胃癌有一定的參考意義。