【摘 要】 目的：觀察回醫(yī)烙灸療法對脊髓損傷后大鼠神經功能修復的影響。方法：采用Allens法制備急性脊髓損傷模型。實驗動物分為假手術組、模型組、西藥組、2h烙灸組、6h烙灸組，其中50只于第7、14、28、42、56天采用脊髓損傷運動功能改良Tarlov評分法及皮層體感誘發(fā)電位（CSEP）檢測。另外60只取損傷脊髓組織，于1、7、14、28d電鏡觀察脊髓超微結構進行評分。結果：Tarlov評分：損傷7d，除假手術組，其它4組均小于3分，4組間差異無統(tǒng)計學意義（P﹥0.05） ；損傷14d，西藥組、2h烙灸組、6h烙灸組評分均大于模型組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），西藥組、2h烙灸組、6h烙灸組間兩兩比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；損傷28d，評分排序為2h烙灸組和6h烙灸組>西藥組>模型組（P<0.05），2h烙灸組和6h烙灸組之間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；損傷42、56d，西藥組、2h烙灸組、6h烙灸組Tarlov評分均大于模型組（P<0.05）。西藥組、2h烙灸組、6h烙灸組之間兩兩比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。CSEP潛伏期：損傷7、14d，5組之間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；損傷28d，排序為2h烙灸組和6h烙灸組<西藥組<模型組（P<0.05），2h烙灸組和6h烙灸組之間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；損傷42d，各組之間差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。排序為2h烙灸組<6h烙灸組<西藥組<模型組；損傷56d，排序為2h烙灸組<6h烙灸組<模型組和西藥組（P<0.05），模型組和西藥組之間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。電鏡觀察損傷脊髓超微結構變化進行評分，評分結果顯示2h烙灸組、6h烙灸組中細胞質、細胞核、軸突髓鞘、軸突及線粒體恢復情況好于西藥組。結論：回醫(yī)烙灸療法對脊髓損傷大鼠神經功能的恢復有促進作用。

【關鍵詞】 回醫(yī)烙灸；大鼠；脊髓損傷；神經修復

【中圖分類號】R-332 【文獻標志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2018）05-0020-05

Abstract：Objective To obserue the influence of hui medicine lao moxibustion to the neural function recovery of the rats which spinal cord injured.Methods Allens method was used to make the ratsmodel of acute spinal cord injury. Experimental animals were divided into sham operation group、the model group， treatment group by western medicine ， treatment group by hui medicine lao moxibustion two hours after manufacturing model， treatment group by hui medicine lao moxibustion six hours after manufacturing model. 50 rats of them were detected on 7th， 14th，28th， 42th， 56th days by scoring method of tarlov and CSEP.The injured spinal cord tissue of the other 60 rats were observed on ultrastructure of the spinal cord and scored on 1th，7th，14th，28th day.Results Tarlov score： injury on the 7th day， in addition to sham operation group， the other four groups were less than three points， the four groups were not statistically significant （P>0.05）；injury on the 14th day， the scores of the western medicine group， the 2 hours lao moxibustion group， the 6 hours lao moxibustion group were higher than the model group， the difference was statistically significant （P<0.05）.The difference between the western medicine group， the 2 hours lao moxibustion group， the 6 hours lao moxibustion had no statistically significance （P>0.05）；injury on the 28th days，The scores range from high to low is the 2 hours moxibustion group and 6 hours moxibustion group ，the western medicine group ，the model group （P< 0.05）， the 2 hours moxibustion group and the 6 hours moxibustion group were not statistically significant （P>0.05）.injury on the 42th days and 56th days， the score of the western medicine group， the 2 hours moxibustion group， the 6 hours moxibustion group were all higher than the model group （P<0.05）. There was no statistical difference between the western medicine group， the 2 hours moxibustion group and the 6 hours moxibustion group （P>0.05）.The latent period of CSEP： injury on the 7th days and 14th days， there was no statistica difference between the 5 groups （P>0.05）； injury on the 28th days， sort from low to high are the 2 hours moxibustion group and the 6 hours moxibustion group ，the western medicine group，model group （P<0.05）.The difference between the 2 hours lao moxibustion group and the 6 hours lao moxibustion group was not statistically significant（P>0.05）；The difference between the five groups were statistically significant on the 42th days （P<0.05）. The order from low to high was the 2 hours moxibustion group，the 6 hours moxibustion group，the western medicine group，the model group； injury on the 56th days，the sequence from low to high was 2 hours moxibustion group，the 6 hours moxibustion group，the model group and the western medicine group （P<0.05）. There was no significant difference between the model group and the western medicine group （P>0.05）； The electron microscopy result of the ultrastructure of the spinal cord show the recover condition of the 2 hours lao moxibustion group， the 6 hours lao moxibustion group were better than western medicine group on cytoplasm， nucleus， axon myelin sheath and axon and mitochondria.Conclusion Hui medicine lao moxibustion has promoting effect on the recovery of neural function of rats which spinal cord injured.

Keywords：Hui Medicine Lao Moxibustion；Rats；Spinal Cord Injury；Recovery of Neural Function

創(chuàng)傷性脊髓損傷在臨床上是一種比較嚴重的疾病，現(xiàn)代醫(yī)學沒有特別有效的治療方法，只停留在對癥治療階段?；蒯t(yī)烙灸療法是治療創(chuàng)傷性脊髓損傷的一種新方法，在臨床上已經取得一定療效。本實驗采用脊髓損傷運動功能改良Tarlov評分法及皮層體感誘發(fā)電位CSEP檢測的方法，取大鼠脊髓組織，電鏡觀察脊髓超微結構進行評分。通過觀察脊髓損傷大鼠行為、神經電生理傳導及脊髓超微結構進行評分，旨在探討回醫(yī)烙灸療法對大鼠脊髓損傷后神經修復功能的修復研究。

1 材料和方法

1.1 材料 實驗在寧夏醫(yī)科大學實驗動物中心完成，選取清潔級SD大鼠110只（寧夏醫(yī)科大學實驗動物中心提供，合格證號SYXK（寧）2015-0001，12周齡，體質量230～305g，雄性）。

1.2 方法

1.2.1 分組 將110只大鼠隨機數(shù)字表法分為5組：假手術組、 模型組、西藥組、2h烙灸組、6h烙灸組，每組22只，其中50只于第7、14、28、42和56天采用脊髓損傷運動功能改良Tarlov評分法及皮層體感誘發(fā)電位（CSEP）檢測。另外60只于第1、7、14和28天取損傷脊髓組織，電鏡觀察脊髓超微結構進行評分。假手術組，只做椎板切除，不做脊髓損傷；模型組，脊髓Allens打擊損傷后灌胃給予一定量生理鹽水，持續(xù)56d；醋酸潑尼松治療組（西藥組），脊髓Allens打擊損傷后0.5h內首次按20mg/kg，隨后按 4.6mg/kg/h腹腔注射給藥，3h連續(xù)給藥，之后按7.2mg/kg/d，連續(xù)給藥7d；2h烙灸組，脊髓Allens打擊損傷后2h采用烙灸治療，烙灸隔日1次，每次5min，持續(xù)28d；6h烙灸組，脊髓Allens打擊損傷后6h采用烙灸治療，烙灸隔日1次，持續(xù)28d。各組于術后1h經皮下注射青霉素，每日1次，連續(xù)7d。各組均給予一定量生理鹽水，持續(xù)56d。

1.2.2 模型制備 改良的脊髓損傷Allens[1]造模。操作：大鼠麻醉、消毒，以T10為中心，沿脊柱方向切約3cm的切口，切開皮膚、肌肉，分離并暴露棘突，將T10椎板全部切除，保留硬脊膜。采用自制的 Allens 改良式打擊裝置（將15g打擊棒套入鋼管內，卡住打擊高度，松開打擊棒即可下落） ，高度為5cm，致傷量為75g·cm-1，造成T10～T11 節(jié)段急性脊髓損傷（此致傷量可造成大鼠的不完全性截癱，屬中等程度損傷）。動物出現(xiàn)擺尾反射，雙下肢及軀體回縮撲動后，見雙下肢不完全癱瘓，標志造模成功。

1.2.3 治療方法 固定大鼠，回醫(yī)特制烙灸器放在損傷大鼠兩側夾脊穴（在距損傷上下端兩個椎體的棘突間隙旁開距中線3～4mm處取穴）?；蒯t(yī)特制烙灸器利用自制和脊柱形狀相似鐵質灸具制成，在灸槽內放有艾絨，點燃艾絨，利用鐵質灸具熱傳導，使局部發(fā)紅，排出異常體液。部位參照《實驗針灸學》（上?？茖W技術出版社）烙灸組于造模后2h和6h分別開始，隔日同一時間重復治療1次，每次灸5min，持續(xù)28d，并防止時間過長造成皮膚損傷。

1.2.4 改良Tarlov 評分法[2] 評價后肢神經功能 0分：完全癱瘓，針刺時下肢無反應；1分：后肢完全癱瘓，針刺時下肢無反應，但肢體不能活動；2分：后肢肢體可輕微活動，但不能站立；3分： 后肢肢體可水平活動，但后肢無法爬行；4分：后肢肢體可爬行數(shù)步，但不穩(wěn)定；5分：后肢能緩慢爬行走，但不靈活；6分： 后肢能正常行走。所有大鼠術前評分均正常，分別于7、14、28、42、56d評分，共5次，所有觀察均在19：00于開放空間進行，觀察時間為10min。

1.2.5 大鼠皮層體感誘發(fā)電位（CSEP）檢測 采用誘發(fā)電位儀檢測皮層體感誘發(fā)電位，分別于脊髓損傷后7、14、28、42、56d對下肢進行觀察。大鼠腹腔注射麻醉，刺激電極插入下肢后部，陰陽電極相距1cm，周圍以溫鹽水濕潤。記錄電極置于大鼠對側感覺皮質表面，參考電極插入前額皮下。電位儀給予直流方波電脈沖刺激，強度為60mA，波寬0.3ms，頻率2.1Hz，疊加300～400次，分析時間100ms，觀察P1波的反應潛伏期。

1.2.6 電鏡觀察 每組又按不同時間點分別在1、7、14、28d各取3只，共計60只，處死大鼠，取脊髓損傷部位上下1cm的脊髓組織，電鏡觀察脊髓超微結構進行評分。采用Kaptanoglu等[3-4]創(chuàng)立的脊髓損傷的超微結構評分法。評分標準細胞質、軸突、線粒體根據(jù)水腫程度分0～3分；細胞核根據(jù)染色質損傷程度分0～3分；軸突髓鞘根據(jù)損傷情況分0～3分。 評定各項分值相加 ，計算各組中胞質內水腫、細胞核損傷、軸突變性、髓鞘分解、和線粒體損傷的平均評分及標準誤，數(shù)值越高，則脊髓損傷程度越嚴重。數(shù)值的大小與脊髓損傷的嚴重程度成正比。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理和分析，計量資料以（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD檢驗。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 脊髓損傷大鼠運動功能Tarlov評分 實驗開始前5組大鼠評分均正常。除假手術組，其它各組大鼠經改良Allens打擊后，雙后肢不完全癱瘓，第7、14、28、42和56天 Tarlov評分均小于假手術組 （P<0.05）。損傷7d評分：除假手術組，其它4組均小于3分，4組間差異無統(tǒng)計學意義（P﹥0.05） ；損傷14d評分：西藥組、2h烙灸組、6h烙灸組評分均大于模型組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），西藥組、2h烙灸組、6h烙灸組間兩兩比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；損傷28d評分：經兩兩比較Tarlov評分排序為2h烙灸組和6h烙灸組>西藥組>模型組（P<0.05），2h烙灸組和6h烙灸組之間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；損傷42d評分：西藥組、2h烙灸組、6h烙灸組Tarlov評分均大于模型組（P<0.05）。西藥組、2h烙灸組、6h烙灸組之間兩兩比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；損傷56d評分：西藥組、2h烙灸組、6h烙灸組Tarlov評分均大于模型組。西藥組、2h烙灸組、6h烙灸組之間兩兩比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表1。

2.2 脊髓損傷大鼠CSEP檢測 正常CSEP潛伏期是（16.45±0.61）ms，波形為“W”形。除假手術組，其它各組大鼠經改良Allens打擊后，雙后肢不完全癱瘓，第7、14、28、42、56天CSEP潛伏期均大于假手術組 （P<0.05）。損傷7d和14d時，4組之間CSEP潛伏期差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。損傷28d時，經兩兩比較，CSEP潛伏期排序為2h烙灸組和6h烙灸組<西藥組<模型組（P<0.05），2h烙灸組和6h烙灸組之間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。損傷42d時，經兩兩比較各組之間差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。CSEP潛伏期排序為2h烙灸組<6h烙灸組<西藥組<模型組。損傷56d時，經兩兩比較CSEP潛伏期排序為2h烙灸組<6h烙灸組<模型組和西藥組（P<0.05），模型組和西藥組之間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表2。

2.3 電鏡觀察脊髓損傷的超微結構評分 采用Kaptanoglu等創(chuàng)立的脊髓損傷的超微結構評分法。評分結果顯示除假手術組，其它各組各時間點評分均大于假手術組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。損傷1d評分，除假手術組，其它各組評分明顯升高，差異無統(tǒng)計學意義（P﹥0.05） ；7d評分：西藥組、2h烙灸組、6h烙灸組均小于模型組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），西藥組、2h烙灸組、6h烙灸組間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；14d評分：西藥組、2h烙灸組、6h烙灸組的評分要小于模型組。西藥組、2h烙灸組、6h烙灸組之間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；28d評分：評分排序為2h烙灸組<6h烙灸組<西藥組<模型組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表3。

3 討論

脊髓損傷的程度和臨床表現(xiàn)是由原發(fā)性損傷的部位和性質決定的，中醫(yī)學病因病機為瘀血停滯導致“腰痛”、“痿證”、“癃閉”等病證范疇。在脊髓中中樞神經結構的獨特，造成了脊髓損傷后修復的過程相當困難，因此讓損傷的腦和脊髓獲得再生，成為許多神經科學家研究的目標[5]?，F(xiàn)代醫(yī)學的研究大多放在神經營養(yǎng)因子及去除神經生長抑制因子方面。實驗研究顯示，由于神經營養(yǎng)因子的神經系統(tǒng)老化、創(chuàng)傷、神經退行性變等情況下能調節(jié)神經元的可塑性和神經再生，它們具有支持運動神經元存活、促進感覺和運動神經元軸突生長的作用[6-7]。現(xiàn)在激素類藥物作為脊髓損傷的常用藥物，研究顯示激素類藥物對近期脊髓損傷功能恢復的具有顯著療效，對遠期的功能恢復效果并不十分顯著，而且長期運用激素類藥物副作用比較多[8]。通過前期臨床研究發(fā)現(xiàn)回醫(yī)烙灸療法對脊髓損傷臨床效果十分明顯，且安全穩(wěn)定，副作用較小，它是治療脊髓損傷新的手段[9]。

Tarlov、CSEP是一個相對定量、客觀的檢測技術，能夠對脊髓損傷作出功能性診斷及正確的定量分析。改良Tarlov評分主要對大鼠運動功能進行評價，而CSEP根據(jù)潛伏期變化的程度判斷脊髓損傷的嚴重程度，潛伏期越接近正常值療效越顯著。Tarlov、CSEP統(tǒng)計結果顯示，回醫(yī)烙灸療法療效明顯優(yōu)于西藥組療效，尤其28d最顯著。在42d和56d時，2h烙灸組、6h烙灸組和西藥組之間沒有差異（P>0.05），由于烙灸療法只治療28d，后續(xù)沒有采取治療，后續(xù)的康復功能與西藥組相比差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。以上實驗發(fā)現(xiàn)通過28d烙灸治療，脊髓損傷后的神經功能恢復速度明顯好于西藥組及模型組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。烙灸治療28d后，一旦結束烙灸治療神經功能恢復的速度明顯降低，與其它各組比較無統(tǒng)計學差異（P>0.05），證實回醫(yī)烙灸療法對脊髓損傷后的神經功能恢復確有促進作用。每個組又按1、7、14、28d不同時間點分別取3只，共計60只，做電鏡觀察損傷脊髓超微進行評分。評分結果顯示2h烙灸組、6h烙灸組中細胞質水腫、細胞核染色質損傷、軸突髓鞘、軸突及線粒體水腫程度恢復情況好于西藥組。結果又進一步證實了回醫(yī)烙灸治療脊髓損傷療效確切。

回醫(yī)烙灸療法是灸法治療方式的一種，它能夠結合腧穴組織特點和經絡功能，利用藥物、器械加熱所產生的火熱刺激，通調氣血，直接或間接地引導自然中存在“三子”（回醫(yī)認為構成生命的三種本源）元素來激發(fā)人體內的稟性體液活動機能，通過皮膚和血管感受器的反射途徑傳到中樞神經系統(tǒng)，通過興奮和抑制的調節(jié)作用，使之趨于相對平衡。在溫熱性刺激效應的作用下，導致局部血管擴張，促進體液循環(huán)，加強新陳代謝，改變局部組織營養(yǎng)狀態(tài)，增強血管壁通透性及白細胞吞噬能力，增強局部耐受性及機體抵抗力 [10]。而脊髓損傷后期其元陽不振，氣血不調，經絡淤阻造成肢體活動不利。治療正需要回醫(yī)烙灸強刺激手段，刺激周圍神經的敏感度，加強其與大腦中樞神經的聯(lián)系。這種獨具特色的灸法，是祖國醫(yī)學“化膿灸”的發(fā)展與深化，它較“化膿灸”療法操作更加精準，醫(yī)者對施灸的火力與程度能夠進行較好控制，且對皮膚的損傷程度較輕，對元氣的振奮與恢復較為迅速[11]?；蒯t(yī)在長期臨床使用中證實，烙灸療法對于經絡、筋經的不暢，骨與關節(jié)損傷性疾病有不可替代的獨特療效。本療法在長期的傳承和實踐中，積累了豐富的臨床經驗，治療效果相對可靠，對醫(yī)療設備設施的依賴小，技術操作便于掌握，適合在基層推廣。

總之，本實驗研究表明回醫(yī)烙灸對脊髓損傷后的神經功能恢復確有促進作用，從而對神經細胞起到保護作用，并減少髓鞘的脫失，其為脊髓損傷后神經的修復提供理論和實踐基礎，豐富了脊髓損傷的新的治療手段，更為脊髓損傷的治療開辟新的途徑、新的方法，從而有利于提升脊髓損傷患者的康復治療水平。

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（收稿日期：2018-01-17 編輯：程鵬飛）