李冬艷

摘要：為全面了解彌勒市種公豬健康狀況及精液品質(zhì)，有效預(yù)防在公、母豬之間發(fā)生重要疫病的水平及垂直傳播，確保人工授精所用精液品質(zhì)，促進(jìn)地方生豬養(yǎng)殖健康發(fā)展，我們對彌勒市養(yǎng)豬場和散養(yǎng)戶種公豬攜帶豬瘟病毒（CSFV）、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）、偽狂犬病病毒（PRV）、豬細(xì)小病毒（PPV）、乙型腦炎病毒（JEV）等繁殖障礙性疾病進(jìn)行了調(diào)查。分3個批次采集了143份樣品送往實驗室進(jìn)行DNA（或RNA）的提前及PCR（或R-PCR）擴(kuò)增，通過瓊脂糖凝膠電泳鑒定[1]，從105份規(guī)模飼養(yǎng)種公豬精液樣品中未檢出上述6種病毒核酸；從38份散養(yǎng)種公豬精液中檢出PRV和PCV2核酸陽性各1份（來自不同個體），病毒總攜帶率為5.3%。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）回顧檢測以帶毒精液人工授精所獲子代的血清抗體，評估種公豬精液帶毒對繁育子代（被檢樣本n=35）健康的影響，其中被測20日齡仔豬血清PRV抗體和PCV2抗體呈陽性的比例分別為20%和8.5%。針對種公豬帶毒現(xiàn)狀提出相應(yīng)的疫病防控建議。

關(guān)鍵詞：種公豬；精液；繁殖障礙相關(guān)病毒；PCR擴(kuò)增

中圖分類號：S855.3 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B doi：10.3969/j.issn.2096-3637.2018.04.010

本調(diào)查通過建立和應(yīng)用PCR或RT-PCR方法，對彌勒市種公豬精液中可能攜帶的常見繁殖障礙性病毒進(jìn)行靈敏檢測，全面摸底調(diào)查當(dāng)?shù)胤N豬精液帶毒狀況，了解當(dāng)?shù)胤N公豬精液品質(zhì)及健康狀況，分析和評估養(yǎng)殖方式對精液品質(zhì)及精液帶毒對繁育仔豬的影響，確定當(dāng)?shù)厣i繁育管理的薄弱環(huán)節(jié)，為彌勒市生豬健康養(yǎng)殖的可持續(xù)發(fā)展提供種質(zhì)保障，為進(jìn)一步完善當(dāng)?shù)胤N公豬的養(yǎng)殖和防疫體系建立提供必要的科學(xué)依據(jù)。

PCR檢測本次所采集到的樣品總共143份，其中規(guī)模養(yǎng)殖的105份種公豬精液樣品中未檢出上述6種病毒核酸；分散養(yǎng)殖的38份種公豬精液中檢出PRV和PCV2核酸陽性各1份（來自不同個體），病毒總攜帶率為5.3%。針對本次檢出病毒核酸陽性數(shù)量不多的情況，回顧檢查操作方法、試驗材料、實驗步驟等，沒有發(fā)現(xiàn)任何錯誤之處，整個的實驗檢測過程科學(xué)合理，沒有出現(xiàn)因?qū)嶒灢划?dāng)造成檢測結(jié)果異常的情況，因此本試驗所獲檢測結(jié)果真實可信，能夠真實反映當(dāng)前彌勒市種公豬養(yǎng)殖種公豬攜帶繁殖障礙病毒的基本情況和疾病預(yù)防效果。

遂寧縣檢測的種公豬精液樣品中也未檢出陽性[2]，這和我市本次規(guī)模養(yǎng)殖種公豬精液檢出結(jié)果基本接近，出現(xiàn)這樣的結(jié)果，可能由于大環(huán)境免疫、管理措施得當(dāng)，致使檢出病毒陽性率較低甚至無。四川省精液樣品，JEV陽性率也為0，跟我們檢測結(jié)果一致，說明JEV在種公豬養(yǎng)殖中威脅較小。但血清學(xué)調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)，豬可存在一定程度的JEV感染，這提示JEV感染不一定引起病毒分布于精液，可能與個體免疫力有差異、存在血睪屏障等因素有關(guān)。該報道中PCV2陽性率為2.38%，和我市分散養(yǎng)殖檢出陽性率2.9%接近，表明PCV2的發(fā)生率相對較低，但陽性樣品來自散養(yǎng)戶，提示應(yīng)加強(qiáng)對散養(yǎng)戶的防疫監(jiān)督力度。在防疫措施比較到位、管理規(guī)范的區(qū)域或規(guī)模養(yǎng)殖場，這6種病毒的攜帶率低，是正?，F(xiàn)象。

本調(diào)查應(yīng)用PCR技術(shù)檢測種公豬精液，發(fā)現(xiàn)PRV和PCV2陽性各1例，但因受條件限制，未對PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行克隆、測序及比對分析，以致不能確認(rèn)病毒來源及變異的情況，也不能確定種公豬何時攜帶或感染相應(yīng)的病毒。若能擴(kuò)大樣本數(shù)以及采樣的區(qū)域范圍，并應(yīng)用檢測靈敏度更高的實時熒光定量PCR，結(jié)果會更具說服力。

從應(yīng)用ELISA對帶毒精液配種產(chǎn)生的子代檢測結(jié)果來看，20日齡仔豬血清存在一定程度的PRV和PCV2抗體陽性率，表明帶毒精液有可能通過自然交配乃至人工受精方式對子代健康產(chǎn)生重要影響。筆者根據(jù)對帶毒仔豬的母豬進(jìn)行追蹤了解，發(fā)現(xiàn)有3頭母豬出現(xiàn)過流產(chǎn)情況，另有1頭母豬出現(xiàn)不育癥狀，這4頭母豬在產(chǎn)下帶毒仔豬前未出現(xiàn)過流產(chǎn)、不育癥狀。這4頭母豬此次受精前身體狀況良好，受精后出現(xiàn)繁殖障礙，與本試驗檢測到所用精液陽性結(jié)果的情況基本一致。

本調(diào)查未發(fā)現(xiàn)規(guī)模養(yǎng)殖戶種公豬攜帶6種繁殖障礙相關(guān)病毒，表明規(guī)模養(yǎng)殖戶對生豬養(yǎng)殖防疫意識較高，按規(guī)定把疫苗接種和生物安全防護(hù)預(yù)防措施落實到位。規(guī)模養(yǎng)殖戶從選址、圈舍建造、飼料使用、疾病預(yù)防措施到日常管理，都比較規(guī)范、科學(xué)，建議逐步減少種公豬的分散養(yǎng)殖。從檢測結(jié)果來看，測出病毒攜帶的樣品來自散養(yǎng)戶。應(yīng)該加強(qiáng)對農(nóng)村散養(yǎng)種公豬的管理和規(guī)范養(yǎng)殖[3]。彌勒市仍有部分地區(qū)散養(yǎng)種公豬，雖可為農(nóng)村發(fā)展生豬養(yǎng)殖提供一定便利，但難以實現(xiàn)對種公豬疫病的監(jiān)控，建議在進(jìn)行春秋“兩防”豬瘟、藍(lán)耳病及口蹄疫強(qiáng)制免疫時，加入對PRV和PCV2等其他繁殖障礙相關(guān)疾病的預(yù)防工作。

參考文獻(xiàn)

[1] 張志，劉爽，張燕霞，等.豬精液中五種病毒的初步檢測[J].動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2012，33（7）： 112-115.

[2] 吳永剛.四川省部分地區(qū)公豬精液6種病毒性疾病的分子檢測[D]，雅安：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，2014.

[3] 李剛.豬精液冷凍保存技術(shù)研究[D].西安：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2005.