李國(guó)付，賈曉偉，李鵬達(dá)，劉俊英

(石家莊億生堂醫(yī)用品有限公司，河北 石家莊 050200)

殼聚糖又叫幾丁聚糖、脫乙酰甲殼素, 化學(xué)名稱為聚葡萄糖胺(1-4)-2-氨基-B-D葡萄糖。殼聚糖被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥制造領(lǐng)域。殼聚糖經(jīng)羧甲基化后可制成羧甲基殼聚糖。羧甲基殼聚糖可溶于水。本研究以羧甲基殼聚糖為主要材料，采用反相乳化交聯(lián)技術(shù)、冷凍干燥技術(shù)等制備羧甲基殼聚糖微球，并總結(jié)和分析羧甲基殼聚糖微球的制備工藝?，F(xiàn)將研究方法和結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 主要原料

羧甲基殼聚糖（購(gòu)于濟(jì)南海得貝海洋生物工程有限公司）、異丙醇（藥用級(jí)，購(gòu)于江西阿爾法高科藥業(yè)有限公司）、戊二醛（分析純，濃度為50%，購(gòu)于天津科密歐化學(xué)試劑有限公司）、Span80（分析純，購(gòu)于天津科密歐化學(xué)試劑有限公司）。

1.2 主要儀器

EX玻璃反應(yīng)釜（型號(hào)為100 L，由上海一凱儀器設(shè)備有限公司生產(chǎn)）、冷凍干燥機(jī)（型號(hào)為L(zhǎng)YO-O.7，由上海東富龍科技股份有限公司生產(chǎn)）。

1.3 羧甲基殼聚糖微球的制備方法

將液體石蠟與航空煤油攪拌均勻，制成油相。將羧甲基殼聚糖溶于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的碳酸鈉水溶液中，制成水相。使油相在油相管路中以一定的流速流動(dòng)，將水相以緩慢的速度從水相管路中垂直注入油相管路中。通過(guò)油相流體的剪切力將殼聚糖水相分離成大小均勻的液滴。在室溫下于滴液中加入span80，并攪拌均勻，制成穩(wěn)定的乳化溶液。在上述溶液中加入適量的戊二醛，進(jìn)行固化交聯(lián)反應(yīng)。待反應(yīng)完全后，用異丙醇進(jìn)行洗滌。用濃度由低到高（濃度分別為30%、60%、90%和100%）的乙醇溶液對(duì)上述溶液進(jìn)行梯度脫水，并分級(jí)過(guò)篩，然后在低溫或冷凍的環(huán)境下進(jìn)行干燥，即制得羧甲基殼聚糖微球。將羧甲基殼聚糖微球置于生理鹽水中保存，羧甲基殼聚糖微球與生理鹽水的比例為1 g:10 ml。分別采用不同濃度的羧甲基殼聚糖、不同劑量的span80、不同的油水比、不同比例的戊二醛/羧甲基殼聚糖、不同的交聯(lián)反應(yīng)時(shí)間、不同的轉(zhuǎn)速和不同的溫度制備羧甲基殼聚糖微球，然后觀察和比較在不同條件下制備羧甲基殼聚糖微球的質(zhì)量。

2 結(jié)果

2.1 用不同濃度的羧甲基殼聚糖制備微球的質(zhì)量及產(chǎn)量

在制備羧甲基殼聚糖微球時(shí)，若羧甲基殼聚糖的濃度低于1%，則不易形成微球；若羧甲基殼聚糖的濃度為5%，則液體的粘度較大，難以攪拌，不能制成微球。當(dāng)羧甲基殼聚糖的濃度為2%時(shí)，微球的平均粒徑和主粒徑的占比均較好，且產(chǎn)量較多。故在制備羧甲基殼聚糖微球時(shí)，采用濃度為2%的羧甲基殼聚糖較為適宜。詳見(jiàn)表1。

表1 用不同濃度的羧甲基殼聚糖制備微球的質(zhì)量及產(chǎn)量

2.2 用不同劑量的span80制備羧甲基殼聚糖微球的質(zhì)量

在制備羧甲基殼聚糖微球時(shí)，隨著span80用量的增加，微球的粒徑呈逐漸減小的趨勢(shì)。span80的用量過(guò)?。?.5%），會(huì)影響微球表面的完整性。span80的用量過(guò)大（為1.4%），會(huì)導(dǎo)致微球的粒徑明顯減小。在制備羧甲基殼聚糖微球時(shí)，span80的用量在0.8%～1.2%之間較為適宜。詳見(jiàn)表2。

表2 用不同劑量的span80制備羧甲基殼聚糖微球的質(zhì)量

2.3 用不同的油水比制備羧甲基殼聚糖微球的質(zhì)量

在制備羧甲基殼聚糖微球時(shí)，若油水比太小（為1:1），則難以形成穩(wěn)定的乳液，得不到完整的微球。隨著油水比的增大，微球的粒徑逐漸增加。在制備羧甲基殼聚糖微球時(shí)，油水比為3:1較為適宜。詳見(jiàn)表3。

表3 用不同的油水比制備羧甲基殼聚糖微球的質(zhì)量

2.4 用不同比例的戊二醛/羧甲基殼聚糖制備羧甲基殼聚糖微球的質(zhì)量

在制備羧甲基殼聚糖微球時(shí)，隨著戊二醛用量的增加，微球的粒徑逐漸減小，微球的顏色逐漸變淺。在制備羧甲基殼聚糖微球時(shí)，戊二醛/羧甲基殼聚糖的比例為1:1較為適宜。詳見(jiàn)表4。

表4 用不同比例的戊二醛/羧甲基殼聚糖制備羧甲基殼聚糖微球的質(zhì)量

2.5 用不同的交聯(lián)反應(yīng)時(shí)間制備羧甲基殼聚糖微球的質(zhì)量

在制備羧甲基殼聚糖微球時(shí)，隨著交聯(lián)反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng)，微球的硬度逐漸增加，吸水率逐漸減小。若交聯(lián)反應(yīng)的時(shí)間過(guò)短（為15 h），就會(huì)出現(xiàn)交聯(lián)反應(yīng)不完全的情況，使微球在吸水后呈半凝膠狀態(tài)，得不到完整的微球。當(dāng)交聯(lián)反應(yīng)達(dá)到一定的時(shí)間后，微球的強(qiáng)度可逐漸增加。但交聯(lián)反應(yīng)的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，易導(dǎo)致微球發(fā)生破乳，使微球之間發(fā)生粘連。故在制備羧甲基殼聚糖微球時(shí)，交聯(lián)反應(yīng)的時(shí)間為20～24 h較為適宜。詳見(jiàn)表5。

表5 用不同的交聯(lián)反應(yīng)時(shí)間制備羧甲基殼聚糖微球的質(zhì)量

2.6 用不同的轉(zhuǎn)速制備羧甲基殼聚糖微球的質(zhì)量

在制備羧甲基殼聚糖微球時(shí)，隨著轉(zhuǎn)速的增加，微球的粒徑有逐漸變小的趨勢(shì)。轉(zhuǎn)速的增加可增強(qiáng)乳液的穩(wěn)定性，使乳滴的分散更為均勻。但轉(zhuǎn)速過(guò)快會(huì)增加乳滴之間發(fā)生碰撞的幾率，易造成破乳，使微球之間發(fā)生粘連。當(dāng)轉(zhuǎn)速為小于160 r/min或大于260 r/min時(shí)，微球發(fā)生破乳的幾率較高。故在制備羧甲基殼聚糖微球時(shí)，轉(zhuǎn)速為180～240 r/min較為適宜。

2.7 在不同的溫度下制備羧甲基殼聚糖微球的質(zhì)量

分別在40℃、45℃、50℃、55℃和60℃的溫度下制備羧甲基殼聚糖微球。隨著溫度的升高，微球的粒徑可逐漸變小，交聯(lián)反應(yīng)的速度可逐漸加快。在制備羧甲基殼聚糖微球時(shí)，溫度為50℃較為適宜。

3 討論

羧甲基殼聚糖是一種可降解材料，是制備栓塞材料的最佳選擇。動(dòng)脈栓塞微球是一種靶向制劑。用動(dòng)脈栓塞微球?qū)颊哌M(jìn)行治療的原理是：對(duì)其動(dòng)脈進(jìn)行穿刺和插管，經(jīng)導(dǎo)管將微球輸送至其靶組織或靶器官處，阻斷靶區(qū)的血液供給，從而殺滅腫瘤細(xì)胞[1]。用動(dòng)脈栓塞微球進(jìn)行介入治療是臨床上治療某些中晚期癌癥（如中晚期肝癌）的首選方法[2]。

本研究的結(jié)果證實(shí)，制備羧甲基殼聚糖微球的最佳反應(yīng)條件是濃度為2%的羧甲基殼聚糖、劑量為0.8%～1.2%的span80、3:1的油水比、1:1的戊二醛/羧甲基殼聚糖、20～24 h的交聯(lián)反應(yīng)時(shí)間、180～240 r/min的轉(zhuǎn)速和50℃的溫度。