蘇占輝，李冬云，孫 寒，趙春穎，謝利德

（承德醫(yī)學院中藥研究所/河北省中藥研究與開發(fā)重點實驗室，河北承德 067000）

《中國藥典》規(guī)定，升麻藥材是毛茛科植物升麻、興安升麻、大三葉升麻的干燥根莖。興安升麻Cimicifuga dahurica(Turcz.)Maxim為毛茛科金蓮花亞科多年生草本植物，又稱北升麻、窟窿牙根、苦老菜根[1-2]，主產于我國華北、東北地區(qū)。興安升麻幼苗可食，通常根莖入藥。研究發(fā)現，興安升麻地上部分富含三萜皂苷成分，抗炎、抗病毒等藥理作用明顯[3-5]，具有一定的開發(fā)應用前景。由于同屬植物眾多，為有效區(qū)分興安升麻，本研究對興安升麻地上部分莖、葉的顯微結構進行了觀察，以期為興安升麻質量標準的制定提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 主要儀器 BT-2型顯微鏡及攝像裝置（日本Olympus公司），TK-218型恒溫攤片烤片機（湖北泰維醫(yī)療科技有限公司），RM2125型常規(guī)輪轉石蠟切片機（德國Leica公司），恒溫箱（天津實驗設備廠），CSR-1-30型超純水機（北京愛思泰克科技開發(fā)有限責任公司）。

1.2 材料 興安升麻地上部分，采自河北省承德市豐寧縣，經承德醫(yī)學院趙春穎教授鑒定為毛茛科植物興安升麻。

1.3 試藥 番紅、固綠、乙醇、冰醋酸、甲醛、二甲苯、石蠟、稀甘油、水合氯醛，均為分析純。

2 方法與結果

2.1 石蠟切片法

2.1.1 方法：⑴取材和固定。取興安升麻的莖、葉處理干凈，按照直徑、長度≤0.5cm進行切割。將處理后的材料放在固定液（FAA液）中24h，固定液的用量約是植物的50倍。因升麻莖髓部較大，固定過程中用鑷子輕輕夾住莖的外圍擠壓排氣，每1h一次，直到第四次輕擠時莖的中心沒有氣泡冒出為止[6]。⑵脫水、透明、包埋、切片。固定后的材料在蒸餾水中浸泡，每1h更換一次，更換6次后梯度乙醇（50%、70%、85%、95%、100%）脫水，100%乙醇重復一次[8]；脫水后，梯度二甲苯（濃度分別為50%、75%、100%）透明，100%二甲苯重復浸泡一次。透明后的材料浸蠟3次后包埋，切片，厚度為5μm。⑶染色制片。用粘附劑將展平的蠟片貼于載玻片上，烘干后脫蠟。采用固綠番紅雙重染色法染色，最后用加拿大樹膠封片，置于顯微鏡下觀察。

2.1.2 結果：興安升麻莖被番紅染成紅色的為木質部的導管部分，木質部外圍被固綠染成綠色的為韌皮部的篩管部分。鏡下觀察可見，興安升麻的莖中心髓部較大，莖表皮細胞排成一列，完整、有規(guī)律，表皮細胞上有腺毛，靠近皮層的細胞壁明顯增厚；興安升麻葉中導管細胞明顯。見圖1-2：

圖1 興安升麻莖的木質部和韌皮部

2.2 粉末制片法

2.2.1 方法：⑴稀甘油裝片。取少量莖葉粉末放在載玻片中間，滴加2滴稀甘油，輕輕攪拌后用蓋玻片封片顯微鏡鏡下觀察。⑵水合氯醛裝片。取少量莖葉粉末放在載玻片中間，滴加2滴水合氯醛溶液，輕輕攪勻后于酒精燈上微微加熱，冷卻后再滴加一滴稀甘油，蓋上蓋玻片，用吸水紙吸去多余液體，顯微鏡下觀察。

2.2.2 結果：莖、葉粉末用水合氯醛和稀甘油制片，可在粉末中觀察到大量的導管，還可以觀察到針晶、淀粉粒、針晶束及柱晶；水合氯醛透化制片觀察的效果較好。見圖3-4：

圖3 莖葉粉末中導管(水合氯醛透化)

圖4 莖葉粉末中導管(稀甘油透化)

2.3 表面制片法

2.3.1 方法：用鑷子撕取升麻細莖的一小片表皮，制成0.2cm×0.5cm的小塊，置于載玻片上，滴加蒸餾水后蓋上蓋玻片，用吸水紙吸去多余液體，置于顯微鏡下觀察。

2.3.2 結果：鏡下觀察可見氣孔，平軸式，副衛(wèi)細胞兩個，莖表皮細胞細長，排列較整齊有規(guī)律，無細胞間隙。見圖5-6：

圖5 興安升麻莖表皮氣孔

圖6 興安升麻莖表皮

3 討論

本研究主要觀察了興安升麻莖葉的顯微結構。石蠟切片旨在觀察植物橫切面的結構特征，本研究中石蠟切片HE染色結果顯示，興安升麻莖的基本顯微結構特征典型，木質部和韌皮部組織分化顯著，表皮細胞層完整有規(guī)律。表面制片主要是觀察植物表皮組織的形態(tài)特征，本研究中表面制片能清晰地觀察到興安升麻的氣孔、表皮細胞的特征，方法簡單可行。粉末制片法一般采用甘油醋酸試液或水合氯醛試液處理，以清楚地觀察細胞組織的顯微結構。本研究中粉末制片能夠清晰地觀察到針晶等細胞后含物的結構特征；但粉末法制片時透化試劑的選擇可影響辨識效果，如本研究中水合氯醛制片的效果優(yōu)于稀甘油制片。本研究觀察到的顯微結構特征可為興安升麻地上部分的鑒別提供依據，并能為其生藥質量標準的制定提供參考。

（收稿日期：2018-01-29）