林功師，鄭冬云，洪 江，劉麗麗

(廈門市海洋與漁業(yè)研究所，福建 廈門 361008)

海洋物種多樣、資源豐富，長(zhǎng)期以來是人類食物的重要來源之一。其中貝類產(chǎn)品，因其肉味鮮美、營(yíng)養(yǎng)豐富，蛋白質(zhì)和不飽和脂肪酸含量較高，脂肪含量低，易被人體消化吸收，并且富含鈣、鐵、鎂、硒、鋅、碘等多種人體必需的微量元素和維生素[1]，可作為人類的營(yíng)養(yǎng)食品，而深受廣大消費(fèi)者的喜愛。據(jù)漁業(yè)部門相關(guān)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，目前我國(guó)是貝類養(yǎng)殖大國(guó)，養(yǎng)殖規(guī)模和產(chǎn)量均居于世界前列，其中牡蠣(Ostreagigastnunberg)、貽貝(Mytilusedulis)、菲律賓蛤仔(Ruditapesphilippinarum)、文蛤(Meretrixmeretrix)、扇貝(Chlamysfarreri)等品種占貝類養(yǎng)殖總產(chǎn)量的60%以上[2-3]。

氯霉素是一種可人工合成的抑菌性廣譜抗生素，因其抗菌效果好，曾長(zhǎng)期用于防治漁業(yè)病害、水體消毒等水產(chǎn)養(yǎng)殖過程。但氯霉素在動(dòng)物可食用組織中的殘留量會(huì)通過食物鏈進(jìn)入到人體，人類如果長(zhǎng)期食用含有氯霉素殘留的食品，不僅會(huì)使人體腸道正常菌群失調(diào)[4]，還會(huì)導(dǎo)致再生障礙性貧血和粒狀白細(xì)胞缺乏等疾病[5]。鑒于氯霉素的毒副作用，其殘留問題已經(jīng)引起美國(guó)、歐盟、中國(guó)等國(guó)家及國(guó)際組織的高度重視，并相繼出臺(tái)了相關(guān)的規(guī)定，要求水產(chǎn)品中氯霉素殘留的限量為不得檢出[6-7]。但氯霉素類藥物具有價(jià)格低廉、抑菌效果好、容易獲得等優(yōu)點(diǎn)，使一些養(yǎng)殖戶、商販仍違法違規(guī)使用。因此，開展貝類中氯霉素殘留量的監(jiān)測(cè)，有利于及時(shí)了解貝類食用的安全性，為廣大消費(fèi)者的健康提供保障。

本次開展的貝類中氯霉素殘留量的檢測(cè)所使用的超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法是在GB/T 20756—2006國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法上建立的[8]，該方法在濃度0.5～20 ng/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，線性方程y= 0.601 59x+ 0.043 27，相關(guān)系數(shù)R2為0.999 8，氯霉素殘留量檢出限為0.1 μg/kg。

1 材料與方法

1.1 樣品

采集廈門市水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)、超市、養(yǎng)殖場(chǎng)等場(chǎng)地的菲律賓蛤仔、文蛤、牡蠣、縊蟶(Sinonovaculaconstricta)、貽貝、泥蚶(Tegillarcagranosa)、尋氏肌蛤(Musculussenhousei)、扇貝共8種常見貝類，169份樣品。牡蠣和縊蟶樣品每份重約2.0 kg，其余貝類樣品每份重約4.0 kg。貝類樣品的產(chǎn)地主要來自廣西、廣東、江蘇、遼寧、浙江、福建等省份。

1.2 儀器與試劑

超高效液相色譜(1290 Infinity UHPLC，美國(guó) Agilent 公司)；三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀(AB SciexTriple Quad 4500，美國(guó)AB公司，配有電噴霧 ESI 離子源)；MS3 Digital 漩渦振蕩器(德國(guó)IKA公司)；BS110S電子天平和TE212電子天平(德國(guó)Sartorius公司)；Sorvall Stratos高速冷凍離心機(jī)(美國(guó)Thermo公司)；Milli-Q Gradient超純水儀(美國(guó)Millipore公司)；20 μL、50 μL、100 μL、1000 μL移液器(法國(guó)Gilson公司)。乙酸乙酯、正己烷、甲醇、乙腈均為色譜純(德國(guó)MERCK公司)。氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品(純度為98.5%， Dr.Ehrenstorfer公司)， 氯霉素-D5標(biāo)準(zhǔn)溶液(100 μg/mL，Dr.Ehrenstorfer公司)。

1.3 方法

1.3.1 儀器條件

色譜柱為Zorbax Eclipse Plus-C18(2.1 mm×100 mm，1.8 μm)；流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為超純水；柱溫40℃；流速0.40 mL/min；進(jìn)樣量20 μL；液相色譜流速及梯度洗脫程序見表1。離子源為電噴霧離子源ESI，毛細(xì)管電壓為-4 500 V，離子源氣流量為50.0 mL/min，錐孔氣流量35.0 mL/min。采用負(fù)離子掃描方式，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式(MRM)。質(zhì)譜定性定量離子對(duì)信息見表2。

表1 液相色譜梯度洗脫條件

注：流動(dòng)相A 為乙腈，流動(dòng)相B 為超純水。

Note：The mobile phase A was acetonitrile，while the mobile phase B was water.

表2 目標(biāo)化合物液質(zhì)測(cè)定條件

注：*定量離子。

Note：The asterisk represented the quantitation ion.

1.3.2 樣品處理

準(zhǔn)確稱取攪碎的濕樣品5.0 g于50 mL離心管中，加入20 μL 100 ng/mL內(nèi)標(biāo)工作溶液渦旋混合1 min，再加入15 mL乙酸乙酯渦旋1 min，以4 500 r/min離心5 min。將上層清液轉(zhuǎn)移至含有5 g無水硫酸鈉并用乙酸乙酯潤(rùn)洗的漏斗中，漏斗下方放置100 mL雞心瓶以便收集提取液。再往50 mL離心管中加入15 mL乙酸乙酯并渦旋混合1 min，重復(fù)上述操作一次，合并全部提取液于雞心瓶中，然后用10 mL乙酸乙酯將殘留在無水硫酸鈉中的目標(biāo)物沖洗至雞心瓶中。搖勻后，將提取液于40℃溫度下旋轉(zhuǎn)濃縮至干。殘?jiān)? mL水溶解，超聲3 min，加入適量正己烷渦旋混合1 min，靜置分層，棄掉上層的正己烷。將水相過0.22 μm濾膜后，待測(cè)。

本次檢測(cè)過程，每10批次樣品加測(cè)2份樣品的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，加標(biāo)水平為1.0 μg/kg。加標(biāo)回收率在88%～104%之間。

1.3.3 貝類中氯霉素的判定標(biāo)準(zhǔn)

農(nóng)業(yè)部235號(hào)公告《動(dòng)物性食品中獸藥最高殘留限量》中規(guī)定[9]，氯霉素為禁止使用的藥物，在動(dòng)物性食品中不得檢出。

2 結(jié)果

8種貝類中氯霉素殘留總體檢出情況：169份貝類樣品中，共有6份樣品有檢出氯霉素殘留，氯霉素總檢出率為3.6%(6/169)，含量最高為7.05 μg/kg；以菲律賓蛤仔檢出率最高，檢出率為7.7%(3/39)，其次為文蛤，檢出率為6.7%(2/30)；貽貝的檢出率為5.3%(1/19)；牡蠣、縊蟶、泥蚶、尋氏肌蛤、扇貝共計(jì)81份樣品中均未檢出氯霉素殘留。氯霉素殘留檢出率為：菲律賓蛤仔>文蛤>貽貝>牡蠣、縊蟶、泥蚶、尋氏肌蛤、扇貝，具體情況見表3。依據(jù)農(nóng)業(yè)部235號(hào)公告，在動(dòng)物性食品中氯霉素不得檢出的規(guī)定，則樣品中檢出氯霉素殘留，即為超標(biāo)，判定樣品不合格。

表3 氯霉素的總體檢出情況

注：N.D.指的是低于檢出限(0.1 μg/kg)。

Note：N.D.represented the result below detection limit (0.1 μg/kg).

3 討論

從本次監(jiān)測(cè)的數(shù)據(jù)可以看出，8種貝類中以菲律賓蛤仔(Ruditapesphilippinarum)和文蛤(Meretrixmeretrix)樣品中的氯霉素殘留檢出率較高，貽貝(Mytilusedulis)樣品中的氯霉素殘留量?jī)H在檢出限附近。氯霉素添加到鮮活貝類產(chǎn)品養(yǎng)殖水體中，具有延長(zhǎng)貝類存活時(shí)間，抑制病情、消毒等作用。部分養(yǎng)殖戶及經(jīng)營(yíng)者對(duì)氯霉素流入市場(chǎng)的危害性認(rèn)識(shí)不足，在貝類育苗階段、運(yùn)輸過程和零售市場(chǎng)暫存暫養(yǎng)過程可能違規(guī)使用氯霉素，而雙殼貝類特殊的生長(zhǎng)習(xí)性也導(dǎo)致其吸收的有害物質(zhì)更容易積累，從而出現(xiàn)貝類中氯霉素殘留量超標(biāo)的情況。本次抽樣檢測(cè)的貝類樣品中，6批次的檢出樣品均來自于批發(fā)市場(chǎng)和超市，而采自養(yǎng)殖產(chǎn)地的24批次樣品均未檢出氯霉素殘留。由于本次采集的貝類樣品，每個(gè)貝類品種檢測(cè)樣品的數(shù)量有限，個(gè)別貝類品種檢測(cè)數(shù)量比較少，故檢出率、檢出品種不一定完全有代表性，但檢測(cè)結(jié)果已顯示市面上的貝類中確實(shí)含有氯霉素殘留，相關(guān)管理部門應(yīng)該加強(qiáng)宣傳和監(jiān)管監(jiān)控，從而保障廣大消費(fèi)者的身體健康。

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